获得供解毒治疗使用的高效人白蛋白的方法技术

获得供解毒治疗使用的高效人白蛋白的方法。该方法包括ａ）第一次透析（渗滤）；ｂ）通过ＮａＣｌ和至少一种氨基酸来稳定溶液；ｃ）加热溶液；ｄ）第二次透析（渗滤）。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及获得具有高容量的人白蛋白的方法，该方法用于运输分子 例如在解毒治疗或细胞培养等或其他应用之中。本专利技术是以实验为基础用 作净化具有高结合容量和运输分子的人白蛋白并藉此通过去除血液中的 毒素来提高解毒治疗的功效，优选通过白蛋白注入、单采血浆术及通过体 外系统替换白蛋白。单采血浆术根据本专利技术该方法包括，获得用于病毒的 灭活治疗用途并具有高结合容量、不含稳定剂，或含有特定稳定剂以使其 保持高结合容量的白蛋白溶液。本专利技术的基本性质定义于权利要求1中。从属权利要求2到22定义本专利技术的其他优选方面。
技术介绍
在数量上，白蛋白是人血浆中最重要的蛋白质，并且对于血液的胶体 渗透压的保持起着基础性的作用。白蛋白还具有其他的性质，例如其抗氧 化剂和抗自由基活动性以及其与不同的内生和外生物质，例如在其他配体 中的脂类物质、脂肪酸、胆盐、药物和有毒物质结合的亲合力。根据几位作者，已经指出了白蛋白作为患有严重白蛋白不足、低血容 量症(hypovolaemia)或休克(严重烧伤、外伤或溢血)、由慢性肾病和 肝脏硬化导致的低蛋白血症的病人，以及在心肺分流术、急性呼吸急迫综 合症(acute respiratory distress syndrome)、血液透析和高胆红素血症的情况 中作为替代疗法的治疗用途。白蛋白还用于腹水、急性肾病、急性肾病综 合征、胰腺炎、腹内传染和急性肝功能不全的治疗。作为在血液中主要的运输分子，血清白蛋白具有对于亲脂性物质如脂 肪酸、胆红素等的特殊结合位点。大多数白蛋白配体与两个结合位点I或II 中的一个结合。游离脂肪酸、金属离子如铜和胆红素有选择地与特定结合 区域结合。这些物质通常由白蛋白运输到肝脏并被降解。在肝功能衰竭的情况 下，这些有毒物质留下来与白蛋白结合使其结合容量饱和，并引起血液中 毒素水平的增加，其在组织中累积并且导致可以造成病人死亡的多器官功 能衰竭。在这些情况下可以通过得益于市售治疗用白蛋白的结合容量的体 外肝脏支援系统来进行治疗。如果拥有具有更高的结合容量白蛋白会在这 类治疗中更加有效。白蛋白获得和运输大量不同的物质，如代谢产物、金属、毒素、脂肪 酸、激素等的容量，使得这种蛋白质非常重要。根据科恩法(Cohn等.J Am Chem Soc, 1946, 68, 459 - 475 )从人血浆 中获得白蛋白的方法通常以血浆的乙醇分流法的馏分V(FrV)开始。虽然 该方法不常见，但是也可以使用其他原料，例如该科恩分部分馏法的上清 液(S/N )，如馏分IV的S/N或馏分II + III的S/N,包括纯化中的额外步 骤例如离子交换色谱法为。以这些具有> 90 - 95 %的白蛋白纯度级别的科恩分部分离法中间产 物开始的纯化方法，通常是基于由存在于溶液中的乙醇的作用析出的聚合 物、聚集物及其他化合物如脂蛋白的分离。为了这些化合物的最佳分离， 可向悬浮液中适当地加入白蛋白的过滤助剂(硅藻土)和Z或不溶性无机硅 酸盐(斑脱土)或硅胶是可取的。可选择地，根据起始原料的蛋白质污染 物的类型，可适当的加入离子交换剂以保持避免白蛋白吸附作用的条件。随后，通过在超细过滤设备中渗滤从溶液中去除乙醇，其还可以提供 金属离子和有机羧酸阴离子如柠檬酸盐的去除(西班牙专利P2.101.390)。 该超细过滤还提供白蛋白溶液达到所需的浓度。另外，进行溶液的热处理(优选在56。C到63。C之间热沖击)，以使任 何残留在白蛋白溶液中的可能使最终产品不稳定的热不稳定的化合物变性和不溶解。该热处理对于降低白蛋白的常见污染物之一的前激肽释放酶 激活剂(PKA)的活性也是有用的。已描述了白蛋白纯化的不同方法，关于步骤的前后顺序或增加额外的 纯化步骤，纯化其按照如上所述的情况表现出变化。其他方法包括例如美国专利5.346.992或欧洲专利0367220通过 以馏份V或馏分IV的上清液起始的离子交换色i普法纯化白蛋白。美国专利 4.288.154提出了从馏分II+m的上清液开始，也通过离子交换色谱法，具有 在凝胶中预先过滤步骤的方法。通过目前已知方法从血浆中获得的用于治疗用途的人体白蛋白溶液 以浓缩溶液的形式出现， 一般具有15%到25%的总蛋白质，为高渗的 并促使流体,人血管外向血管内间隙的流动，或者以3.5%到5%总蛋白质 的等渗溶液的形式，其与血浆是等渗的。这些溶液的配方含有具有高于 95%的总蛋白的纯度级别的白蛋白和稳定剂。当从人血浆库中获得白蛋白溶液时，就如对于其他的生物制品一样， 不可避免来自病毒或其他病原体的传播感染的风险。尽管面临上述的风 险，现在的治疗用的白蛋白仍被认为是一种安全的血液产品。这主要是由 于白蛋白溶液是经过巴氏杀菌的( 一般是最终的小瓶在60-63°C至少10小时 的热处理)。自从1941年，通过分馏人血浆制备了第一例白蛋白溶液(Cohn等. Chem. Rev. 1941, 28, 395 )之日起，便开始了为使白蛋白溶液稳定的研究， 而在1945年实现了以N-乙酰色氨酸、辛S交钠或二者的混合物来稳定白蛋 白溶(Scatchard G,等，J. Clm. Invest. 24:671-676, 1945 )。白蛋白溶液的稳 定继续作为研究课题(Fmlayson J.S.等，Vox Sang. 47:7-18, 1984 ); (Finlayson J.S.等，Vox Sang. 47:28-40, 1984 )，然而直至今日仍没有重大 变化，这一稳定形式被不同国家的规章制定机构所接受(例如欧洲药典； 人白蛋白溶液专题论文0255 )。因此，目前白蛋白的市售制品通常含有 辛酸盐及氮乙酰色氨酸作为稳定剂，以避免在巴氏灭菌过程中的聚合并保 证产品到保质期之前在贮存期间的稳定性。当捕获有毒化合物作为去除之前的机制，白蛋白的治疗效果发生的情 况下，如在高胆红素血症的治疗中，其功效依赖于具有自由结合位点的白蛋白。在以婴儿中的高胆红素血症为模型的研究中，Ebbesen F.( Acta Pediatr. Scand. 71:85-90, 1982 )证实，与单独以辛酸盐稳定的白蛋白相反，N-乙酰 色氨酸强烈地取代胆红素，从而降低了以N-乙酰色氨酸和辛酸盐稳定的白 蛋白的功效。尽管两种制品的任一种在防止由胆红素引发的脑病中都是 有效的，但数据似乎显示以N-乙酰色氨酸来稳定可能不适于高胆红素血症 的治疗，而证明以辛酸盐对白蛋白来稳定的优越性。在也是关于白蛋白与不同化合物，包括色氨酸和辛酸盐结合的亲和力 和容量的其他研究中，已证实在不同化合物之间对于白蛋白结合位点存在 竟争(Kragh - Hansen U. Biochem. J. (1991) 273, 641-644))并且公认色氨酸 在特定位点与白蛋白分子结合，而辛酸盐(石典苯腈辛酸酯)与白蛋白分子在 不同位点结合，导致白蛋白与其他化合物结合的容量降低。目前毫无疑问的是这些稳定剂与至少是白蛋白结合位点n结合从而防 碍经巴氏杀菌的白蛋白的输送功能，并可在这种的白蛋白静脉输注之后至 少部分地抑止内源性配体(毒素等)的结合。已经作出了在为开发在纯化过程和最终组成中均避免乙酰色氨酸和/ 或辛酸钠的使用的白蛋白生产方法的方向上的尝试。世界本文档来自技高网...

【技术保护点】
获得具有高容量结合分子的人白蛋白溶液的方法，包括：　ａ）第一次透析（渗滤）　ｂ）通过ＮａＣｌ和一种或多种氨基酸，不加入脂肪酸来稳定溶液，　ｃ）加热溶液　ｄ）第二次透析（渗滤）。

【技术特征摘要】
ES 2007-11-12 P2007029831.获得具有高容量结合分子的人白蛋白溶液的方法，包括a)第一次透析(渗滤)b)通过NaCl和一种或多种氨基酸，不加入脂肪酸来稳定溶液，c)加热溶液d)第二次透析(渗滤)。2. 根据权利要求l的获得白蛋白溶液的方法，其中白蛋白溶液是源自 人血浆。3. 根据权利要求1的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法， 其包括加热白蛋白溶液(巴氏灭菌)，以失活病毒并减少PKA含量。4. 根据权利要求3的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法， 其中溶液的加热(巴氏灭菌)在61±2°。下进行。5. 根据权利要求4的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法， 其中将溶液加热(巴氏灭菌)10.5土0.5小时。6. 根据权利要求l的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法， 其中溶液以20.15 M浓度的NaCl和至少一种氨基酸来稳定。7. 根据权利要求6的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法， 其中氨基酸优选为N-乙酰色氨酸。8. 根据权利要求7的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法， 其中N-乙酰色氨酸的量为每克白蛋白20.096 mmol的N-乙酰色氨酸。9. 根据权利要求1的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，包括通过渗滤去除与白蛋白结合而降低其结合容量的物质。10. 根据权利要求9的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法， 包括两级渗滤以去除...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡安伊格纳西奥霍尔克拉捏托，皮尔里斯托德巴特，蒙特塞拉特科斯塔里尔若拉，
申请(专利权)人：基立福有限公司，
类型：发明
国别省市：ES[西班牙]