一种改良的前白蛋白检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种改良的检测血清中前白蛋白含量的免疫透射比浊试剂盒。其包含试剂Ｒ１，试剂试剂Ｒ２，前白蛋白标准品。该试剂盒通过抗原抗体的特异性反应，形成小的免疫复合物（＜１９ｓ），在促聚剂的作用下会形成大的可见的复合物（＞１９ｓ），产生一定的浊度，从而适于透射比浊测量，所含试剂能有效地防止伪浊度的产生，且准确度高、重复性好、抗干扰能力强、操作简单，适用于各种类型的全自动生化分析仪。所含的标准液，采用全血清基质，避免了基质效应的影响。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学免疫体外诊断领域，涉及一种免疫比浊检测试剂，特别是，本专利技术涉及一种免疫透射比浊检测血清中前白蛋白的试剂盒。
技术介绍
前白蛋白是肝脏细胞合成的一种血清蛋白质，电泳时迁移在白蛋白之前，故称为前白蛋白，主要生理功能参与血清中甲状腺素和视黄醇的运输，并具有胸腺激素活性，可通过促进淋巴细胞的成熟来增加肌体免疫力。前白蛋白由4个相同的亚基组成，分子量54980，消光系数(E280nm)13.6，半衰期1.9天。 血清中前白蛋白的测定结果在临床上是反应肝功能和肌体营养状态的优良指标，常见于营养不良者。由于前白蛋白半衰期很短，可反应肝脏合成和分解代谢的轻微改变，其血清浓度降低的幅度与肝实质损害的程度密切相关，因此在临床上也常见于肝功能损伤、肝硬化、外伤及感染患者。皮质醇、帕金森氏病、饮酒和口服避孕药却可导致血清前白蛋白浓度升高。 现有技术中常用的检测方法是免疫透射比浊法、免疫扩散法、免疫电泳法、放射免疫分析法。免疫浊度测定的基本原理是抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过量时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出待检测物的含量。 目前市场上的前白蛋白检测试剂不能很好的去除伪浊度的影响，抗干扰能力差，以致一些特殊的样本测值为零或者为负值。 为了克服现有技术的不足之处，本专利技术采用一种改良的免疫透射比浊试剂盒来检测血清中的前白蛋白的含量。通过优化促凝剂的含量以及试剂1(R1)和试剂2(R2)中促凝剂的配比，解决了浊度试验最大的弱点———伪浊度的产生，大大提高了抗干扰能力。同时，本试剂盒配备了人血清基质的标准液，去除了基质效应的影响，从而大大提高了检测结果的准确性，在血清的处理中加入了合适的表面活性剂，能够使抗原抗体的结合位点裸露，从而提高了反应的特异性。并且标准液是稳定的液体的，与市面上干粉的固态的相比较，使用更为方便，而且其制作方法简单易行，成本低廉，所以本专利技术在临床上具有较大应用价值。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种特异的免疫透射比浊检测试剂盒，该试剂盒能够降低浊度反应的最大弱点———伪浊度的产生，提高抗干扰能力；同时提供一种人血清基质标准品的制备方法及用该方法制备的标准品，解决了基质效应问题，提高检测的准确度。 因此，本专利技术提供一种改良的检测血清前白蛋白的试剂盒，包含试剂R1，试剂R2和人血清基质标准品，其特征在于所述的试剂R1包含按体积百分比计浓度为0.5—4％的促凝剂，按体积百分比计浓度为0.02-2.0％的表面活性剂，试剂R2包含按体积百分比计浓度为0.5—15％的促凝剂，按体积百分比计浓度为5—40％的抗血清和按体积百分比计浓度为0.02-2.0％的表面活性剂，人血清基质标准品为包含全人血清基质的液体。 本专利技术中，所述的抗血清为羊抗人PA抗血清、马抗人抗血清、鼠抗人抗血清或兔抗人抗血清。所述的促凝剂包括PEG6000、PEG8000、PEG20000、溴化己二甲胺、聚凝胺；表面活性剂为Trion系列、Tween系列、月桂醚系列、聚氧乙烯辛基苯醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚。所述的表面活性剂优选是Trion X100、Tween20、月桂醚。 本专利技术所述的配制试剂R1、R2的缓冲液是pH范围为6.5—8.0的缓冲液，其选自三羟甲基氨基甲烷—盐酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑—盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、碳酸钠—碳酸氢钠缓冲液、硼酸—硼酸钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液、磷酸缓冲液或者磷酸盐缓冲液。 本专利技术所述的血清前白蛋白的试剂盒，还包括按照体积百分比计，浓度分别为0.01—1％的抗氧化剂、防腐剂。 所述的人血清基质标准品分别为0—850mg/L的五个不同浓度的标准品。该人血清基质标准品还包含抗氧化剂、防腐剂、表面活性剂、广谱杀菌剂、抗霉菌、稳定剂。人血清基质标准品由健康人混合血清，经检测排除乙肝、丙肝、爱滋、梅毒等传染病后，浓缩获得高浓度原液，再按梯度稀释成4—5个浓度梯度，经二级甚至一级参考品和参考测量方法量值溯源定值。 本专利技术所述的抗氧化剂为EDTA、丁基羟基茴香醚、苯多酚、二丁基羟基甲苯、硫代二丙酸二月桂酯、磷脂或甘草抗氧化物。 本专利技术所述防腐剂为NaN3、苯酚、对羟基苯甲酸乙酯或乙基汞硫代硫酸钠。 所述的杀菌剂为能杀灭革兰氏阴性、阳性菌的广谱和窄谱抗菌素中的一种或多种。所述的杀菌剂为青霉素、链霉素、庆大霉素、四环素或土霉素。所述抗霉菌素为制霉菌素、季铵盐系列、丙酸钠、脱氧乙酸和两性霉素中的一种或多种。 本专利技术所述的稳定剂为EDTA、Mgcl2、BSA、丙三醇、乙二醇、单糖和多糖中的一种或者多种。 由此可见，本专利技术所述试剂盒包含试剂R1，试剂R2和标准液，所述试剂R1为含有少量促聚物、抗氧化剂、防腐剂和表面活性剂的缓冲液；所述的试剂R2为含抗人前白蛋白抗血清的溶液，还包含一定的抗氧化剂、稳定剂、防腐剂和表面活性剂。 进一步的，在本专利技术所述的前白蛋白检测试剂盒的试剂R1中，所述的促聚物包括PEG6000、PEG8000、PEG20000；表面活性剂为Trion X100、Tween20和月桂醚等聚氧乙烯类多聚物等；抗氧化剂、防腐剂包括EDTA、NaN3。更进一步的，在试剂R1中，所述的促聚物浓度为0.25—3.5％，所述的表面活性剂的含量为0.1-3.0％，抗氧化剂、防腐剂的浓度为0.01—1％。试剂R2中，促聚物的浓度为0.25—20％，抗血清的浓度为5—60％。 本专利技术所述的试剂，优化了促聚剂的含量和配置，克服了临床上一些特殊样本测量中，容易出现伪浊度的缺点。由于调整了促聚剂的用量，也大大提高了抗干扰能力和灵敏度。 本专利技术所述的试剂，使用了合适的表面活性剂，可以改变分子的表面结构和电荷性质，有利于抗原抗体的充分特异性结合。 本专利技术所述的试剂盒还包括人血清基质标准液，从制作工艺上降低了标准液制备中的基质效应的影响。人血清基质标准液稀释为0—850mg/L的五个不同浓度，采用多点定标，使得试剂的临床测值更为准确。 本专利技术所述的试剂盒中包括的人血清基质标准液的制备方法，采取混合血清浓缩的方法，操作简单，节约成本，使用的混合血清都是人健康血清，从而解决了基质效应的问题。并且本专利技术对混合血清浓缩前后采取了特殊处理，使得人血清基质标准液可长时间稳定。另外，也优化了标准液的定值方法，量值具有溯源性，可以溯源到二级或者一级参考物。 本专利技术所述的试剂盒的组成成分为 试剂R1 缓冲液(PH 6.5-8.0)10—100mM 抗氧化剂 0.1-3g/L 防腐剂 0.1-3g几 促凝剂 0.5—4％ 表面活性剂 0.02—2％ 试剂R2 缓冲液 10—100mM 抗氧化剂 0.1-3g/L 防腐剂 0.1-3g/L 表面活性剂 0.02-2％ 促凝剂 0.5—15％ 抗血清5—40％ 人血清基质标准液 混合人血清排除乙肝、丙肝、梅毒、爱滋感染 防腐剂0.02—2％ 杀菌剂2—20mM 抗氧化剂 0.02—2％ 表面活性剂0.02—2％ 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改良的检测血清前白蛋白的试剂盒，包含试剂Ｒ１，试剂Ｒ２和人血清基质标准品，其特征在于所述的试剂Ｒ１包含按体积百分比计浓度为０．５－４％的促凝剂，按体积百分比计浓度为０．０２－２．０％的表面活性剂，试剂Ｒ２包含按体积百分比计浓度为０．５－１５％的促凝剂，按体积百分比计浓度为５－４０％的抗血清和按体积百分比计浓度为０．０２－２．０％的表面活性剂，人血清基质标准品为包含全人血清基质的液体。

【技术特征摘要】
1、一种改良的检测血清前白蛋白的试剂盒，包含试剂R1，试剂R2和人血清基质标准品，其特征在于所述的试剂R1包含按体积百分比计浓度为0.5—4％的促凝剂，按体积百分比计浓度为0.02-2.0％的表面活性剂，试剂R2包含按体积百分比计浓度为0.5—15％的促凝剂，按体积百分比计浓度为5—40％的抗血清和按体积百分比计浓度为0.02-2.0％的表面活性剂，人血清基质标准品为包含全人血清基质的液体。2、根据权利要求1所述的血清前白蛋白的试剂盒，其特征在于所述的抗血清为羊抗人PA抗血清、马抗人抗血清、鼠抗人抗血清或兔抗人抗血清。3、根据权利要求1所述的血清前白蛋白的试剂盒，其特征在于，所述的促凝剂包括PEG6000、PEG8000、PEG20000、溴化己二甲胺、聚凝胺；表面活性剂为Trion系列、Tween系列、月桂醚系列、聚氧乙烯辛基苯醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚。4、根据权利要求1所述的血清前白蛋白的试剂盒，其特征在于，所述的表面活性剂是Trion X100、Tween20、月桂醚。5、根据权利要求1所述的血清前白蛋白的试剂盒，其特征在于，配制试剂R1、R2的缓冲液是pH范围为6.5—8.0的缓冲液，其选自三羟甲基氨基甲烷一盐酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑—盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、碳酸钠—碳酸氢钠缓冲液、硼酸—硼酸钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液、磷酸缓冲液或者磷酸盐缓冲液。6、根据权利要求1所述所述的血清前白蛋白的试剂盒，其特征在于，还包括按照体积百分比计，浓度分别为0.01—1％的抗氧...

【专利技术属性】
技术研发人员：温云飞，
申请(专利权)人：北京九强生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]