稳定的激肽释放酶-1注射液制造技术

本发明专利技术公开了一种稳定的激肽释放酶－１注射液，所述的注射液中含有：（１）激肽释放酶－１０．０５－４０．００ＡＵ／ｍｌ；（２）磷酸盐缓冲液１０－５０ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ６．０－８．０；（３）氯化钠０．０１－０．２ｍｏｌ／Ｌ；和（４）蛋白酶保护剂０．０１－２０ｗ／ｖ％。本发明专利技术公开的含有激肽释放酶－１的稳定的注射液中蛋白的稳定性好；不含人血白蛋白作为保护剂，避免了增加引入外源性病毒的潜在危险；而且制作简便，成本低。

Stable kallikrein -1 injection

The invention discloses a stable release enzyme kallikrein 1 injection, the injection contains: (1) kallikrein - 10.05 - 40.00AU / ml; (2) phosphate buffer 10 - 50mmol / L, pH6.0 8; (3) sodium chloride 0.01 0.2mol / L; and (4) protease protection agent 0.0120w / v%. The invention discloses a stable protein injection containing kallikrein 1 in stabilized; excluding Human Albumin as a protective agent, to avoid the potential risks introducing exogenous virus; and has the advantages of simple manufacture, low cost.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及含有蛋白酶的溶液，更具体地涉及稳定的激肽释放酶-1注射液。
技术介绍
激肽释放酶-l(Kallikrein-l)是一种丝氨酸蛋白酶，在人或动物体内主要 作用于激肽原，使之水解释放出激肽，通过激肽发挥扩张毛细血管、松弛血管 平滑肌、改善微循环、增加血流量、抗凝、溶血栓、降低血液粘度和血压，以 及具有治疗不育症等作用。其中更多相关的背景信息可另参考本专利申请人已 经提交的中国专利申请2006100277541和200710038911.3 PCT/CN2007/070800。激肽释放酶-l在溶液状态下极不稳定，因此通常需要将其冻干保存，该冻 干制剂在配制成溶液，也需要尽快使用，以避免活性丧失。例如，在中国专利 ZL200410096060. 4中公开了一种水溶液，其中将甘露醇、水解明胶(或右旋糖 酐)和柠檬酸钠组合，用以溶解从人尿中提取的人尿激肽原酶(人激肽释放酶-l) 冻干粉，以达到保持主药活性的作用。这种采用冻干粉针剂，并再配以由一定 的辅料组成的水溶液来溶解的制剂方式，不仅增加了生产成本，而且临床使用 也不方便，此外，溶解后保持主药活性的时间也非常短暂。因此，本领域迫切需要提供能保持激肽释放酶-1长期稳定性的液体制剂。
技术实现思路
本专利技术旨在提供稳定的含有激肽释放酶-1的注射液。本专利技术的另一个目的是提供上述稳定的含有激肽释放酶-1的注射液的制 备方法。在本专利技术的第一方面，提供了一种稳定的激肽释放酶-l注射液，所述的注射液中含有(1)激肽释放酶-1 0.05-40. 00AU/ml;(2) 磷酸盐缓冲液10-50mmol/L， p服.0-8. 0;(3) 氯化钠 0. 01-0. 2mol/L;和(4) 蛋白酶保护剂0.01-20%(w/v)(以注射液的总体积为基准)。 在另一优选例中，所述的蛋白酶保护剂为0.5—10%;优选1一5%。 在另一优选例中，所述的蛋白酶保护剂选自下述的一种或多种甘露醇、水解明胶、右旋糖酐、葡萄糖、蔗糖、海藻糖、聚乙烯吡洛烷酮、甘氨酸、聚 乙二醇；所述的蛋白酶保护剂优选自下述的一种或多种甘露醇、水解明胶、 右旋糖酐、甘氨酸。在另一优选例中，以注射液的总体积为基准，其中所述的甘露醇0.5-10% (w/v)，水解明胶O. 1-10%(w/v)，右旋糖酐O. 5-10%(w/v)，甘氨酸O. 05-2%(w/v); 优选所述的甘露醇l-4%(w/v)，水解明胶1-3% (w/v)，右旋糖酐l-4%(w/v)， 甘氨酸0. 5-l%(w/v)。在另一优选例中，激肽释放酶-1是天然提取或重组的；优选重组人激肽释 放酶-l。在另一优选例中，其中所述的磷酸盐缓冲液是磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓 冲对；所述的氯化钠为0.卜0.2mol/L;所述的右旋糖酐选自右旋糖酐-20、右 旋糖酐-40或右旋糖酐-70。在另一优选例中，以注射液的总体积为基准，所述的溶液中还含有 0. 005-0. 02。/。(w/v)防腐剂。在本专利技术的第二方面，提供了一种如上所述的注射液的制备方法，所述的 方法包括步骤(a) 将磷酸盐、氯化钠、蛋白酶保护剂和注射用水混合；(b) 用磷酸或Na0H调节p朋.0 — 8. 0;和(c) 加入激肽释放酶-1后注射用水定容，得到如上所述的稳定的激肽释 放酶-1注射液。在另一优选例中，所述的磷酸盐缓冲液是磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲对。 在另一优选例中，在步骤(a)中还可以加入防腐剂，使步骤(c)中所得 到的注射液中，以注射液的总体积为基准含有0.005-0. 02%(w/v)防腐剂。据此，本专利技术提供了能保持激肽释放酶-1长期稳定性的液体制剂。具体实施例方式专利技术人发现在含有激肽释放酶-1的水溶液中加入一定种类和一定量的蛋白 酶保护剂，可以长时间地保持激肽释放酶-l在水溶液中的活性。具体地，专利技术人向处于磷酸盐缓冲体系(pH6.0-8.0)中的激肽释放酶-l溶 液中加入甘露醇、水解明胶、右旋糖酐、葡萄糖、蔗糖、海藻糖、聚乙烯吡洛 烷酮、甘氨酸、和聚乙二醇中的一种或多种作为蛋白酶保护剂，并适当再添加 氯化钠用以调节水溶液的渗透压，就制成能长期保持活性(稳定性)，可供临床 中方便使用的激肽释放酶-1液体制剂。如本文所用，"激肽释放酶-l"和"激肽原酶"可以互换使用，此外，目前 文献中还有在这两个词前冠以来源的组织器官或代谢产物名称，如'胰激肽原酶'、 '胰激肽释放酶'、'尿激肽原酶'等，均与本专利中所描述的，按国际上建议的'激肽释放酶-r这一名称所指的是同一种成分。它是一种丝氨酸蛋白酶，可作用 于激肽原，使之水解释放出激肽，通过激肽发挥扩张毛细血管、松弛血管平滑 肌、改善微循环、增加血流量、抗凝、溶血栓、降低血液粘度和血压等作用。英文名为Kallikrein与Kininogermse、 Kallidinogenase 、 Kininogenin所 描述的都是同一类成分，不过目前多用Kallikrein —词。已经从人和动物体 的不同组织、器官或尿液中获得了许多Kallikrein类成分，其中将含量最高， 发现也最早的命名为Kallikrein-1(激肽释放酶-1)。该成分在人或哺乳动物的 胰腺和肾脏中含量最高，其代谢后又通过肾脏，随尿排出体外。因此，从人或 动物尿中分离出来的早年所称的尿激肽原酶(或尿激肽释放酶)实际就是新分 类中的激肽释放酶-l(Kallikrein-1)。不同来源的激肽释放酶-1的分子量差 别很大。例如，从人尿中或胰腺中分离出的人激肽释放酶-1，其相对分子量为 33800。而通过基因方法获得的重组人激肽释放酶-1的分子量从26000-35000 不等，这主要取决于采用的表达系统(E.cli、酵母、昆虫细胞、CHO细胞等) 以及表达的方式(细胞内或分泌表达)等不同，蛋白糖基化的修饰方式、修饰程 度不同以及纯化方式对糖链影响等而引起的差别。例如，E.coli或酵母细胞内 表达出的激肽释放酶-1其分子量约26000左右，而CHO细胞表达的激肽释放酶 -l可达到35000左右。本专利中的激肽释放酶-1可以是天然提取或重组的， 可以是尿激肽原酶或胰激肽原酶，较佳地是重组人激肽释放酶-1。在本专利技术中，"重组激肽释放酶-l"可以使用本领域技术人员熟知的方法 获得， 一种优选的方法可以如本专利技术实施例1中所提供的，也可以参考中国专 利2006100277541以及200710038911. 3、 PCT/CN2007/070800中的相关内容。如本文所用，"蛋白酶保护剂"、"保护剂"和"稳定剂"可以互换使用， 都是指可以保持激肽释放酶-1活性的物质，选自下述的一种或多种甘露醇、 水解明胶、右旋糖酐、葡萄糖、蔗糖、海藻糖、聚乙烯吡洛烷酮、甘氨酸、聚 乙二醇；较佳地选自甘露醇、水解明胶、右旋糖酐、和甘氨酸中的一种或多种。在本专利技术中，含有激肽释放酶-1的水溶液在4-37'C放置，以激肽释放酶-1 和溶液刚开始混合为时间的起始点(O时)，以0时每毫升(ml)水溶液中激肽释放 酶-l的活性单位(AU)为起始活性值，如果放置0-300天，每ml水溶液中激肽释 放酶-1的AU是起始活性值的80-120%，就是本专利技术所指的稳定，较佳地是 90-110%，更佳地为95-105%。本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定的激肽释放酶－１注射液，其特征在于，所述的注射液中含有：　（１）激肽释放酶－１　０．０５－４０．００ＡＵ／ｍｌ；　（２）磷酸盐缓冲液　１０－５０ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ６．０－８．０；　（３）氯化钠　０．０１－０． ２ｍｏｌ／Ｌ；和　（４）蛋白酶保护剂　０．０１－２０％（ｗ／ｖ）。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张淑芸，陈耀国，陈佩新，王书生，曹嘉炜，沈英，潘学工，黄秀东，
申请(专利权)人：上海万兴生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]