核酸微球体，其制备和递送制造技术

通过将包含核酸的化合物溶解于适当的溶剂或溶剂体系中并从所形成溶液中的形成微球体而制备核酸。将该微球体对个体给药用作对症状的保护，其中核酸的递送用于，例如自身免疫性疾病的治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般性地涉及核酸微球体的制备及其递送，特别是为了诱导树突细胞的耐受性以处理医学问题。更特别的，本专利技术涉及借助于采用含水条件制备的微球体的药物递送技术。所述微球体可掺入干扰RNA，质粒DNA、反义(AS)寡核苷酸或其它核酸。这些微球体用于在体内和原位改变细胞功能。
技术介绍
微粒体、微球体和微胶囊是具有小于一毫米，更优选小于100微米直径的固体或半固体颗粒，其可由各种材料，包括合成聚合物、蛋白质和多糖形成。微球体已经被用于很多不同的应用中，主要是分离、诊断和药物递送。从合成聚合物、天然聚合物、蛋白质和多糖制备这些微球体可应用很多不同的技术，包括相分离、溶剂蒸发、乳化和喷雾干燥。通常，这些聚合物形成这些微球体的支持结构，并且目的药物被掺入到该聚合物结构中。用于形成微球体的示例的聚合物包括描述于Ruiz的美国专利5,213,812，Reid等人的美国专利5,417,986，Tice等人的美国专利4,530,840，Tice等人的美国专利4,897,268，Tice等人的美国专利5,075,109，Singh等人的美国专利5,102,872，Boyes等人的美国专利5,384,133，Tice等人的美国专利5,360,610和Southern Research Institute的欧洲专利申请公开248,531中的乳酸和乙醇酸的均聚物和共聚物(PLGA)；描述于Illum的美国专利4,904,479中的嵌段共聚物，例如特窗908(tetronic 908)和普罗沙姆407(poloxamer 407)；以及描述于Cohen等人的美国专利5,149,543中的聚偶磷氮(polyphosphazenes)。采用例如这些聚合物制备的微球体表现差的装载率并经常只能够将小百分率的目的药物掺入到所述聚合物结构中。因此，经常必须用相当大量的微球体给药以获得治疗效果。球状小珠或颗粒作为生物化学家的工具已经商业化很多年了。例如，结合于小珠的抗体形成特异于特定配体的相对大的颗粒。该被抗体包被的大颗粒通常被用于交联在细胞表面上的受体以活化细胞，被结合于固相用于免疫亲和纯化，并可用于递送随时间缓慢释放的治疗剂，利用结合于所述颗粒的组织或肿瘤特异性抗体以使所述治疗剂靶向于所需的位点。将抗体共价结合到固相基质上的常用方法是用化学结合试剂衍生小珠，然后将所述抗体结合到该活化的珠上。应用合成聚合物小珠优于应用蛋白质分子，其允许采用比许多蛋白质可以耐受的更苛刻的衍生条件，且相对成本不高，并经常形成稳定于广泛的变性条件的连接。很多衍生化的珠是商业化了的，它们都具有各种不同的组分和大小。由合成聚合物，例如聚丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚苯乙烯或乳胶形成的小珠可购自许多来源，例如Bio-Rad实验室(Richmond，Calif.)和LKB Produkter(Stockholm，Sweden)。由天然高分子和颗粒，例如琼脂糖、交联的琼脂糖、球蛋白、脱氧核糖核酸和脂质体形成的小珠可购自如下来源例如Bio-Rad实验室，Pharmacia(Piscataway，N.J.)和IBF(France)。由聚丙烯酰胺和琼脂糖的共聚物形成的小珠可购自如下来源例如IBF和Pharmacia。有磁性的小珠可购自如下来源例如Dynal Inc.(Great Neck，N.Y.)。目前可获得的微粒体或小珠的一个缺点是它们都难于制造和成本高。由这些已知方法制备的微粒体具有宽的粒度分布，经常缺少均匀性，并且当活性组分的浓度高时不表现出长期释放动力学。另外，用于这些已知方法的聚合物需要溶解在有机溶剂中以形成微粒体。因此它们必须在被设计成可处理有机溶剂的特殊设备中制备。这些有机溶剂可使包含于微粒体中的蛋白质或肽变性。残留的有机溶剂当对人和动物用药时可能有毒。另外，可获得的微粒体几乎没有足够小到适合穿过针头的大小，所述的针头通常用于给药治疗剂或用于通过吸入给药。例如，采用聚乳酸乙醇酸(PLGA)制备的微球体是大的并有聚集的倾向。粒度选择的步骤会导致产品损失，但对于除去对于注射而言过大的颗粒是必须的。用于注射的合适大小的PLGA颗粒，必须通过适应大粒度的大规格针头给药，这经常导致患者的不适。通常，许多目前可获得的微粒体被活化以在水相介质中释放它们的内含物，因此它们必须被冻干以防止过早的释放。另外，采用PLGA体系制备的这样的颗粒表现出基于侵蚀和扩散两者的释放动力学。在这种类型的体系中，观察到药物的初始突释或快速释放。这种突释效应可在将所述颗粒给药的病人中导致不希望的副作用。用脂质封装目标药物而制备的微粒体是已知的。例如，在Sinil Kim的美国专利5,422,120中所述的那样，环绕着多种水相隔室的双层膜中排列以形成颗粒的脂质，可以被用来封装水溶性药物用于随后的递送。这些粒度通常大于10微米并被设计用于关节内、鞘内、皮下和硬膜外给药。另外，脂质体已经被用于小分子的静脉递送。脂质体是由单独或多个磷脂和胆固醇的双层组成的球状颗粒。脂质体的大小为30微米或更大并且可以装载多种水溶性或脂溶性药物。脂质体技术已经被如下问题所阻碍，包括脂质组分的纯度、可能的毒性、囊泡异质性和稳定性、过度吸收和生产或保质期困难。医学协会的目标是将核酸递送到到对象，包括但不限于动物或哺乳动物中的细胞内用于治疗。例如，可将核酸相对有效地递送到在培养物中(体外)的细胞内，但当将核酸递送到动物中时(体内)，核酸酶导致核酸快速降解。除了保护核酸使其免于核酸酶消化，核酸递送媒介物还必须显示低毒性，必须有效地被细胞吸收并具有明确的、易于生产的配方。如在临床试验中所示，用于递送的病毒载体可能导致严重负面的、甚至致命的体内免疫应答。另外，这种方法具有在体内致突变作用的可能性。通过将核酸封入不同配方的脂质复合物(例如脂质体或阳离子脂质复合物)中而递送，通常在体内是无效的并可能有毒性作用。核酸与各种不同的聚合物或与肽组成的复合物已经显示出不一致的结果并且这些配方的毒性尚被解决。核酸已经被封装入聚合物基质中用于递送，但在这些情况下，这些颗粒具有宽的大小范围并且用于治疗性应用的效果尚未被证明。因此，对解决核酸的递送问题和提供有效的核酸配方有需要。同样，持续需求开发微球体和制备微球体的新方法。微球体及其制备已经描述于Scott等人的美国专利6,458,387，Woiszwillo等人的美国专利6,268,053、6,090,925、5,981,719和5,599,719，和Woiszwillo的美国专利5,578,709中。这里明确指出的上述参考文献和所有其它的参考文献通过引用并入本专利技术中。
技术实现思路
本专利技术的目的是微球体及其制备方法和应用，所述微球体包含生物活性剂，例如DNA、siRNA(沉默RNA，也公知为双链RNA)、mRNA、tRNA，和所有其它核酸，包括但不限于寡核苷酸。据信本专利技术的微球体递送方法防止了或阻止了所递送的核酸与细胞核酸酶接触，因此防止了治疗用核酸的过早降解。包含核酸的微球体可用于治疗各种不同疾病，包括但不限于自身免疫性疾病，例如多发性硬化、1型糖尿病、银屑病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、Berger氏病(IgA肾病)、慢性疲劳综合症、Crohn氏病、皮肌炎、纤维肌痛、Grave氏病本文档来自技高网...

【技术保护点】
微球体，其包含约２０重量％至１００重量％的一种或多种核酸，并且具有不大于约５０微米的平均粒度。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：特伦斯L斯克特，黛博拉拉弗里尼埃，韦雷德比什克利布，拉里R布朗，
申请(专利权)人：巴克斯特国际公司，巴克斯特医疗保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]