一种综合提取柘木多糖和黄酮的方法技术

本发明专利技术公开了一种综合提取柘木多糖和黄酮的方法，涉及天然植物提取技术。该方法包括以下技术方案：取柘木药材于５５℃烘箱烘干粉碎，过４０－８０目筛，加入不同浓度乙醇溶液梯度回流提取，提取液浓缩，依次用石油醚和水饱和正丁醇萃取，萃余液加入９５％乙醇至沉淀完全，离心分离，得离心沉淀物和上清液；将沉淀物用丙酮反复洗涤，冷冻干燥，即得柘木多糖；将上清液过层析柱，收集含黄酮成分的流分，减压浓缩，干燥即得柘木总黄酮。本发明专利技术方法得率高，可用于制备具有抗肿瘤作用的药物或保健品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然植物提取
，涉及。
技术介绍
15 7K 力 # 禾斗才直 ^ 15 W Maclura tricuspidata Carr. 的木材，目前从柘木中分离并鉴定的化合物主要为xanthone 类和黄酮类成分、多糖，此外还有生物碱、木脂素、香豆素等成分。多糖是一类天然高分子化合物，是由单糖连接而成的多聚物，广泛存在于动物、植 物和微生物中，具有较明确的抗肿瘤、提高免疫功能的作用，不同种类的多糖对于细胞免疫 功能、体液免疫功能、巨噬细胞功能、NK细胞(natural killer cells)功能分别有不同的 激活作用。并且由于多糖没有明显的毒副作用，对多糖生物资源的开发利用和研究日益活 跃，成为天然药物、生物化学、生命科学的研究热点。柘木多糖是近年由山东大学徐誉泰教 授从柘树根中首先提取并初步研究了其免疫增强功效；枸杞是传统中药，枸杞多糖作为枸 杞的有效成份，其免疫调节作用已受到广泛研究和公认。徐誉泰发现柘树根水煎剂的主要有效成分为多糖和黄酮类化合物，并首次从柘木 根中提取出柘木多糖，该多糖对小鼠S180肿瘤的抑制率达57%，同时发现腹腔给药能明显 提高小鼠腹腔巨噬细胞过氧化物酶的活性、吞噬功能及细胞毒活性，认为柘木多糖通过调 节机体的免疫功能而起到抗肿瘤作用。宋锦苹等通过实验表明柘木多糖进一步分离纯化出 的3种多糖，体外能直接刺激小鼠脾淋巴细胞增殖，协同ConA增强脾淋巴细胞增殖，并促进 小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，表明柘木多糖对免疫细胞有直接激活作用，免疫细胞膜上 可能存在此类多糖受体。徐誉泰等分离得到2个组分的柘树黄酮，分别加入人胃癌细胞NKM进行体外培养 同位素标记实验，结果表明柘树黄酮对NKM的大分子合成有显著的影响。Lee等实验发现从 柘木中分离出的5个二氢黄酮醇类化合物(geticudranins A、B、C、D、E)对培养的人体肿 瘤细胞 CRL1579 (皮肤)、LOX-IMVI (皮肤)、M0LT_4F(白血病)、KM12 (结肠)和 U0-31 (肾 脏)有细胞毒活性，其ED5tl为2. 7-31. 3μ g/ml。中国专利申请号200710045425. 4公开了一 种柘木提取物、其制备及应用，采用5-10倍醇水溶液，浓缩，依次通过大孔吸附树脂柱、聚 酰胺层析柱、凝胶柱层析，分离得到总黄酮，该方法分离效果好，但操作繁琐，得率低，成本 高，不宜用于产业化生产。伍伟超等发表的“正交试验优选柘木总黄酮提取工艺研究”中， 采用12倍60%乙醇提取柘木总黄酮，该方法提取率较低，有机溶剂用量大，杂质多。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术不足，提供一种易于生产、经济效益显著、可行的 柘木多糖和黄酮的提取、分离、纯化方法。具体而言，本专利技术包括以下技术方案1)取柘木药材于55°C烘箱烘干，粉碎，过40-80目筛，过筛的柘木粉末中加入不3同浓度乙醇溶液梯度回流提取，提取3-6次，合并提取液，浓缩，依次用石油醚和水饱和正 丁醇萃取，弃去萃取物，萃余液加入95 %乙醇至沉淀完全，离心分离，得离心沉淀物和上清 液；2)将上述沉淀物用丙酮反复洗涤，冷冻干燥，即得柘木多糖；3)将上述上清液过层析柱，收集含黄酮成分的流分，减压浓缩，干燥，即得柘木总黄酮。步骤1)所述的含水乙醇，乙醇的体积百分比为0-80%，每次回流提取时间为1-4 小时。步骤1)所述的有机溶剂萃取，石油醚和水饱和正丁醇的用量与浓缩液体积比均 为 0. 5-2 1。步骤1)所述的离心机转速为2000-6000r/min，离心时间为1045分钟。步骤3)所述的层析柱填料为大孔树脂、葡聚糖凝胶或硅胶，柱层析2次，葡聚糖凝 胶或硅胶的目数为100-300目，洗脱剂为氯仿、甲醇、丙酮、水中的一种或两种以上的混合液。本专利技术具有下述优点1)得率高，成本低；2)活性成分含量高，质量好；3)原料利用率高，适用于综合提取柘木多糖和总黄酮；4)步骤简单，易放大产业化。具体实施例方式实施例1 取柘木药材，于55°C烘箱烘干，粉碎，至全部药材过60目筛，将500g过筛后的柘 木粉末投入多功能提取罐中，先用6倍蒸馏水加热提取3小时，保留提取液，药渣再加入含 水乙醇加热回流提取3次(20%乙醇，4倍，2小时；50%乙醇，3倍，1小时；80%乙醇，3倍， 1小时)，合并提取液，减压浓缩至1600ml，先用IL石油醚超声萃取，弃去萃取液，萃余液I 再用0. 8L水饱和正丁醇萃取，弃去萃取液，萃余液II加入95%乙醇至沉淀完全，于4500r/ min转速下离心20分钟，得沉淀和上清液。将离心得到的沉淀用丙酮反复洗涤，低温挥干溶 剂，冷冻干燥即得柘木多糖，多糖含量为87. 4%。将离心得到的上清液通过AB-8大孔吸附树脂柱，氯仿-甲醇(5 1、3 1、1 1、 0 1)梯度洗脱，收集合并含有黄酮的流分，回收试剂，旋转蒸发浓缩，再次上柱层析，洗脱 液浓缩后于45-55°C下低温干燥即得柘木黄酮，黄酮含量为85. 3%。实施例2 取柘木药材，于55°C烘箱烘干，粉碎，至全部药材过80目筛，将1500g过筛后的柘 木粉末投入多功能提取罐中，先用5倍蒸馏水加热提取4小时，保留提取液，药渣再加入含 水乙醇加热回流提取2次(20%乙醇，4倍，3小时；60%乙醇，3倍，2小时)，合并提取液，减 压浓缩至2200ml，先用3. OL石油醚超声萃取，弃去萃取液，萃余液I再用1. 5L水饱和正丁 醇萃取，弃去萃取液，萃余液II加入95%乙醇至沉淀完全，于6000r/min转速下离心30分 钟，得沉淀和上清液。将离心得到的沉淀用丙酮反复洗涤，低温挥干溶剂，冷冻干燥即得柘木多糖，多糖含量为83.6%。将离心得到的上清液通过200目硅胶层析柱，含水甲醇梯度洗脱，洗脱浓度依次 为0%、30%、60%、100%，收集合并含有黄酮的流分，回收试剂，旋转蒸发浓缩，再次上柱层 析，洗脱液浓缩后于45-55°C下低温干燥即得柘木黄酮，黄酮含量为77. 4%。实施例3 取柘木药材，于55°C烘箱烘干，粉碎，至全部药材过40目筛，将5000g过筛后的柘 木粉末投入多功能提取罐中，先用5倍蒸馏水加热提取2次，每次4小时，保留提取液，药渣 再加入含水乙醇加热回流提取4次(20%乙醇，3倍，3小时，1次；50%乙醇，3倍，2小时，2 次；80 %乙醇，2倍，1小时，1次)，合并提取液，减压浓缩至10L，先用12. OL石油醚超声萃 取，弃去萃取液，萃余液I再用5. 5L水饱和正丁醇萃取，弃去萃取液，萃余液II加入95%乙 醇至沉淀完全，于3000r/min转速下离心35分钟，得沉淀和上清液。将离心得到的沉淀用 丙酮反复洗涤，低温挥干溶剂，冷冻干燥即得柘木多糖，多糖含量为88. 5%。将离心得到的上清液通过200目凝胶层析柱，含水丙酮梯度洗脱，洗脱浓度依次 为0%、30%、60%、100%，收集合并含有黄酮的流分，回收试剂，旋转蒸发浓缩，再次上柱层 析，洗脱液浓缩后于45-55°C下低温干燥即得柘木黄酮，黄酮含量为81.7%。实施例4 取柘木药材，于55°C烘箱烘干，粉碎，至全部药材过50目筛，将7000g过筛后的柘 木粉末投入多功能提取罐中，先用5倍蒸馏水加热提取2次，每次3小本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，郭琴，杨成东，
申请(专利权)人：南京泽朗医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：84