过墙风总黄酮的提取方法及其在制备保肝药物中的应用技术

本发明专利技术公开了过墙风总黄酮的提取方法及其在制备保肝药物中的应用，以乙醇浓度、提取温度、提取时间为自变量，总黄酮得率为因变量，采用星点设计—效应面法优化过墙风总黄酮提取工艺，得到最优工艺条件为：乙醇浓度54.76%，提取温度83.92℃，提取时间102.64min，料液比为1:20，提取2次，在此条件下得率最大。该提取工艺简便可行，预测结果可靠，适于工业化生产。此外将过墙风总黄酮作用于四氯化碳肝损伤模型中，实验保肝作用，实验结果显示过墙风总黄酮具有保肝护肝作用，作用机制可能有由TNF‑α、IL‑6和 NO所介导的肝细胞炎性反应,有效地保护肝细胞。

Extraction method of total flavonoids and its application in the wind over the wall in the preparation of hepatoprotective drugs

The invention discloses a method for extracting total flavonoids from wall wind and its application in the preparation of hepatoprotective drugs, ethanol concentration, extraction temperature and extraction time as independent variables, the yield of total flavonoids as the dependent variable, using central composite design and response surface methodology, optimization of total flavonoids through the wind extraction process, the optimal process conditions were: ethanol concentration 54.76%, extraction temperature 83.92, extraction time 102.64min, ratio of material to liquid 1:20, extracted 2 times, the maximum yield under this condition. The extraction process is simple and feasible, and the prediction result is reliable. It is suitable for industrial production. In addition to the wall wind effect on total flavonoids in CCl4 induced liver injury model, hepatoprotective effect experiment, experimental results show that the total flavonoids has hepatoprotective effect of wind over the wall, the possible mechanism by TNF alpha, IL 6 and NO mediated liver inflammatory reaction, effectively protect the liver cells.

【技术实现步骤摘要】
过墙风总黄酮的提取方法及其在制备保肝药物中的应用
本专利技术属于中医药领域，具体是过墙风总黄酮的提取方法及其在制备保肝药物中的应用。
技术介绍
过墙风，别名臭茉莉、臭牡丹、大枫叶、臭黄根、鬼点火。药材基源为马鞭草科植物尖齿臭茉莉带根的全株。属于传统瑶药中的风类药，全草含黄酮甙、酚类、皂甙、鞣质等，具有祛风除湿，活血止痛和清热解毒的功效，主治风湿痹痛，脚气水肿，黄疸型肝炎等，主要分布于广东、广西和云南等。广东药学院吴凡冬等采用正交设计试验对重瓣臭茉莉根总黄酮提取工艺进行了优化，而未见臭茉莉根总黄酮（过墙风总黄酮）提取工艺的研究报道。黄酮类化合物具有抗炎、抗氧化、清除自由基等药理活性，在防治疾病方面发挥着重要的作用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供过墙风总黄酮的提取方法及其在制备保肝药物中的应用。实现本专利技术目的的技术方案是：过墙风总黄酮的提取方法，包括如下步骤：取过墙风根，打成粗粉，按1:20的料液比加入54.76%乙醇，提取温度83.92℃，回流提取2次，每次102.64min，合并提取液并过滤，减压回收滤液中的乙醇，浓缩得过墙风浸膏；浸膏加适量的水，充分混匀成混悬液，加盐酸调pH=4.5，采用D102型大孔吸附树脂进行纯化，上样流速3mL·min-1，上样后静止12h，先用2倍树脂体积的35%乙醇洗脱，而后用4倍树脂体积70%乙醇洗脱，流速2.5mL·min-1，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩洗脱液，干燥后得过墙风总黄酮干膏。通过实验，得出过墙风总黄酮提取的最优工艺条件为：乙醇浓度54.76%，提取温度83.92℃，提取时间102.64min，料液比为1:20，提取2次，在此条件下得率最大。本专利技术采用星点设计—效应面法优化过墙风总黄酮提取方法，接着进一步纯化其中总黄酮，并将其作用于四氯化碳肝损伤模型中，实验保肝作用，实验结果显示过墙风总黄酮具有保肝护肝作用，作用机制可能有由TNF-α、IL-6和NO所介导的肝细胞炎性反应,有效地保护肝细胞。本专利技术与现有技术相比，过墙风药材资源丰富，制备过墙风总黄酮工艺简单、成本低，具有良好的开发价值。此外，本专利技术发掘了过墙风总黄酮具有保肝护肝作用，制备保肝药物或保健品具有良好的药用价值，并为过墙风总黄酮进一步深入开发提供研究基础。附图说明图1为提取过程中提取温度、提取时间和乙醇浓度相互作用对总黄酮提取率影响的效应面图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术的内容作进一步的说明，但并不是对本专利技术的限定。一、过墙风总黄酮的提取工艺研究1.材料DF-25落地式连续投料粉碎机（温岭市林大机械有限公司），101-1电热鼓风干燥箱（北京中兴伟业仪器有限公司），UW-2200H电子天平(日本岛津公司)，HW.W21恒温水浴箱（北京长风仪器仪表公司），H2050R台式高速冷冻离心机（湖南湘仪离心机厂）,UV-2450/2550紫外-可见分光光度仪(日本岛津公司)。过墙风购买于桂林市七星区六合路药材市场，经桂林医学院张可锋副教授鉴定为ClerodendrumphilippinumSchauervar.simplexMlodenkeroots，芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号100080-200707），无水乙醇、亚硝酸钠、氯化铝、氢氧化钠等试剂均为国产分析纯。方法与结果2.1检测波长与标准曲线2.1.1对照品溶液的制备精密称定芦丁对照品，配制质量浓度为0.40g·L-1的70%乙醇溶液，混匀，备用。供试品溶液的制备将过墙风晾晒后粉碎，过80目筛，置60℃恒温烘箱中烘干，放于干燥器中备用。精密称取过墙风粉末约1.0g，加入70%的乙醇20倍量（g:mL），在80℃下回流提取1次，过滤后离心（4000r·min-1）取上清液，备用。检测波长的确定以70%乙醇为空白对照，分别取芦丁对照品溶液和供试品溶液1.0mL置于25mL容量瓶中，先加5%亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，放置6min，再加10%硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠溶液5mL，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min。在200~800nm范围内测定吸光度，结果显示对照品和供试品溶液均在510nm处有最大吸收，且空白无干扰，故选择510nm作为检测波长。标准曲线的绘制精密吸取0.5、1.5、2.0、3.0、3.5、4.0mL芦丁对照品溶液，分别置于25mL容量瓶中，然后按照2.1.3项进行操作，在510nm处测定吸光度A，以吸光度值A为纵坐标，芦丁对照品溶液质量浓度C为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程A=0.0133C-0.0399(r=0.9991)，线性范围0.00~0.064g·L-1。方法学验证2.2.1精密度试验取供试品溶液1.0mL，按照2.1.3项在510nm处测定吸光度，重复5次，计算RSD值为0.44%，表明仪器性能稳定。稳定性试验取同一供试品溶液，按照2.1.3项在510nm处，分别于0、0.5、1、1.5、2h时测定吸光度，RSD值为0.61%，表明供试品溶液在2h内稳定性良好。重复性试验精密称取过墙风粉末5份，每份约1.0g，按2.1.2项制备供试品溶液5份，并按2.1.3项在510nm测定吸光度，计算RSD为1.23%，表明该方法重复性较好。回收率试验精密称取过墙风粉末约1.0g，按2.1.2和2.1.3项处理后，计算总黄酮含量；然后精密称取同一批过墙风粉末3份，分别加入约相当于总黄酮含量的0.8，1.0，1.2倍的芦丁对照品，按2.1.2和2.1.3项进行处理，计算平均回收率为101.78%，表明该方法测定总黄酮含量较为准确。单因素试验2.3.1提取次数精密称取过墙风粉末3份，每份约1.0g，固定料液比1:20，乙醇浓度70%，提取温度80℃，提取时间1h，提取次数分别为1次，2次和3次，合并滤液。按2.1.2项制备供试品溶液，并按2.1.3项在510nm测定吸光度，总黄酮提取率分别为3.65%，4.87%，4.88%。提取两次后，提取率增加并不明显，而且提取次数为非连续变量，故把提取次数固定为两次。料液比精密称取过墙风粉末5份，每份约1.0g，固定乙醇浓度70%，提取温度80℃，提取时间1h，提取两次，分别加入10、15、20、25、30倍量70%乙醇，合并滤液。按照2.1.2和2.1.3项在510nm测定吸光度，计算总黄酮提取率为4.62%，4.96%，4.97%，4.97%，4.96%。料液比在1:20时得率最大，考虑到工艺成本等因素，故将料液比固定为1:20。提取温度精密称取过墙风粉末5份，每份约1.0g，固定料液比1:20，乙醇浓度70%，提取时间1h，提取两次，分别在50、60、70、80、90℃下回流提取，合并滤液。参照2.1.2和2.1.3项测定吸光度，计算总黄酮提取率分别为3.43%，3.8%，3.9%，4.09%，3.99%。在80℃时提取率较高，再增加温度提取率下降。提取时间精密称取过墙风粉末5份，每份约1.0g，固定料液比1:20，乙醇浓度70%，提取温度80℃，提取两次，提取时间分别为30、60、90、120、150min，合并滤液。按照2.1.2项制备供试品溶液，并按2.1.3项在510nm测定吸光度，得总黄酮提取率分别为3.49%，3.83%，本文档来自技高网...

【技术保护点】
过墙风总黄酮的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：取过墙风根，打成粗粉，按1:20的料液比加入54.76%乙醇，提取温度83.92 ℃，回流提取2次，每次102.64 min，合并提取液并过滤，减压回收滤液中的乙醇，浓缩得过墙风浸膏；浸膏加适量的水，充分混匀成混悬液，加盐酸调pH=4.5，采用D102型大孔吸附树脂进行纯化，上样流速3mL·min

【技术特征摘要】
1.过墙风总黄酮的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：取过墙风根，打成粗粉，按1:20的料液比加入54.76%乙醇，提取温度83.92℃，回流提取2次，每次102.64min，合并提取液并过滤，减压回收滤液中的乙醇，浓缩得过墙风浸膏；浸膏加适量的水，充分混匀成混悬液，加盐酸调pH=4.5，采用D102型大孔吸附树脂进行纯化，上样流速3mL·min-1，上样后静止12h，先用2倍...

【专利技术属性】
技术研发人员：段小群，张可锋，高雅，钟明利，曹后康，黄思茂，
申请(专利权)人：桂林医学院，
类型：发明
国别省市：广西,45