一种黑种草子破壁提取总黄酮的方法技术

本发明专利技术公开一种黑种草子破壁提取总黄酮的方法，步骤如下：（1）黑种草子用石油醚脱脂；（2）脱脂后的黑种草子分散于液体介质中，用超声波细胞粉碎机进行破壁处理；（3）破壁处理后的黑种草子用甲醇溶液加热回流提取，提取液浓缩干燥，得到总黄酮。本发明专利技术在提取之前对黑种草子进行破壁处理，可以把药材有效成分充分释放出来，最大限度保存黑种草子的黄酮成分。进一步采用响应面法优化提取工艺条件，使黑种草子总黄酮的提取率变高，其他非黄酮成分的提取率变低，使最终得到的黑种草子总黄酮纯度显著提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药提取领域，具体涉及一种黑种草子破壁提取总黄酮的方法。
技术介绍
黑种草子又名斯亚旦，为毛茛科植物腺毛黑种草NigellaglanduliferaFreyn的干燥成熟种子。具有生干生热、乌发生发、增强色素、强筋健肌、祛寒止痛、补肾健脑，通经，通乳，利尿等功效。在维吾尔医中被应用于治疗湿寒热或粘液质性疾病如耳鸣健忘，经闭乳少，热淋，石淋等。现代医学证实黑种草子具有多种生理活性，如：抗菌、抗氧化、抗血小板聚集、抗肿瘤、降脂、降糖、保肝作用等。研究证实，黑种草子的黄酮类成分具有抗癌的生理活性，其药用价值备受关注。但是利用目前的提取方法得到的黑种草子总黄酮普遍偏低，这一直是制约着黑种草子总黄酮药理和质量控制研究的问题。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种黑种草子破壁提取总黄酮的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了如下的技术方案：一种黑种草子破壁提取总黄酮的方法，步骤如下：（1）黑种草子用石油醚脱脂；（2）脱脂后的黑种草子分散于液体介质中，用超声波细胞粉碎机进行破壁处理；（3）破壁处理后的黑种草子用甲醇溶液加热回流提取，提取液浓缩干燥，得到总黄酮。优选地，步骤（2）破壁处理时，温度≤40℃，超声波频率为300～500Hz，时间60～90min。优选地，步骤（2）所述的液体介质为甲醇溶液。更优选地，步骤（3）回流提取时，温度为62℃，时间为1.5h，甲醇溶液的浓度为63vt%，料液比为1:25g/ml。本专利技术在提取之前对黑种草子进行破壁处理，可以把药材有效成分充分释放出来，最大限度保存黑种草子的黄酮成分。进一步采用响应面法优化提取工艺条件，使黑种草子总黄酮的提取率变高，其他非黄酮成分的提取率变低，使最终得到的黑种草子总黄酮纯度显著提高。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1未破壁黑种草子100倍镜下的图片；图2未破壁黑种草子400倍镜下的图片；图3破壁60min后100倍镜下的的图片；图4破壁60min后400倍镜下的图片；图5甲醇浓度对黄酮提取率的影响曲线；图6提取时间对黄酮提取率的影响曲线；图7提取温度对黄酮提取率的影响曲线；图8料液比对黄酮提取率的影响曲线；图9多元二次回归方程的响应面三维图。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。步骤一：黑种草子脱脂处理黑种草子洗净、烘干（60℃）至恒重，粗粉碎备用。称取100g黑种草子粗粉加入5000ml圆底烧瓶中，按1:30比例加入石油醚3000ml，60℃回流提取4h，趁热抽滤，取滤渣，烘干（60℃），粉碎，过3号筛(50目)，备用。步骤二：黑种草子破壁精密称取10g脱脂后的黑种草子，加入适量溶剂在400Hz条件下使用超声波细胞粉碎机（设备型号：Scientz-11D型）（40℃以下）进行破壁处理60min。步骤三：黑种草子总黄酮的粗提将破壁处理后的黑种草子加入1000ml圆底烧瓶中，按一定比例加入一定浓度的甲醇，在一定温度下回流提取，提取液趁热抽滤，使用旋转蒸发仪将提取液浓缩，并使用真空干燥箱烘干，烘干时间为24h，得到干浸膏。1、黑种草子破壁率的检测1.1细胞计数分别取黑种草子粉末样1、样2加稀甘油适量，其中样1未破壁，样2破壁处理60min，分别置于25ml容量瓶中，混匀，定容至刻度。取干净血球计数板（16×16），加盖玻片，用移液枪精密吸取药液，滴于计数板狭缝中，在荧光倒置显微镜下观察，计完整薄壁细胞数目。从图1～4中可以看出，黑种草子种皮薄壁细胞长方形或不规则形，略切向延长，充满油滴和糊粉粒。故考察黑种草子的细胞破壁率宜选择薄壁细胞测定，破壁60min后除细胞后含物外，纤维、导管等细胞均已被截断，未见完整细胞，因此，以黑种草子粉末中完整的薄壁细胞为显微特征计数物指标，显微观察示其为完整的不规则圆形，此特征具有代表性。1.2破壁率检测分别取黑种草子未破壁、破壁60min混悬液，精密称取，按1.1项下制片，于显微镜下观察，根据两者完整薄壁细胞个数、混悬液体积、称样量，按公式计算黑种草子未破壁、破壁60min的显微特征个数，从而判断黑种草子是否符合破壁要求，结果见表1。表1黑种草子粉末未破壁显微特征（薄壁细胞）个数计算的相关参数（n=16）从上表中可以算出60min破壁率为98.3%，达到破壁标准。黑种草子粉末显微特征个数/mg=XV/V'W公式中：X为计数板每16个格子下的特征数；V为药材混悬液总体积（ml）；V'为盖玻片下混悬液体积（ml）；W为药材称取量（mg）。再根据黑种草子未破壁、破壁60min的显微特征个数，按下列公式计算细胞破壁率：Y=（A-B）/A×100%Y：细胞破壁率；A：黑种草子未破壁的显微特征个数；B：黑种草子破壁60min后的显微特征个数。2、单因素试验分析以总黄酮提取率为指标，依次改变甲醇浓度、提取时间、提取温度、液料比这四个因素进行单因素实验。总黄酮提取率采用NaNO2-Al(NO3)3显色紫外分光光度法测定：将干浸膏使用无水甲醇溶解，并定容到50ml容量瓶中，吸取提取液1ml，加适量蒸馏水，加入浓度为5%NaNO20.5mL，摇匀置6min；再加入浓度为10%A1(NO3)30.5mL，摇匀置6min；加浓度为4%NaOH4mL，用蒸馏水定容至10mL，摇匀15min后测定吸光度，以芦丁为标准品，根据吸光度（Y）和浓度（X）的回归方程y=14.737x-0.0248，R=0.9994，计算出总黄酮提取率=总黄酮的质量/脱脂黑种草子的质量。2.1甲醇浓度对黄酮提取率的影响以提取时间1.5h，提取温度60℃，液料比1:25g/ml，甲醇体积浓度为40%、50%、60%、70%、80%进行回流提取，分别考察甲醇浓度对黄酮提取率的影响，结果见图5。从图5可以看出，在提取时间、提取温度、料液比相同的条件下，当甲醇浓度为60%时，黄酮类化合物的含量最高，当甲醇浓度大于60%时，总黄酮提取率反而降低。这可能是因为甲醇浓度过高时，一些其他类易溶于甲醇的物质也被提取出来，而有效成分的总量变化不大，相比较而言总黄酮提取率呈下降趋势。就黄酮提取率的角度而言，选择甲醇体积浓度为60%为宜。2.2提取时间对黄酮提取率的影响以提取温度60℃，液料比1:25g/ml，甲醇浓度60vt%，提取时间0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h进行回流提取，分别考察提取时间对黄酮提取率的影响，结果见图6。从图6可以看出，在提取温度、料液比、甲醇浓度相同的条件下，随着提取时间的增加，提取所得黑种草子总黄酮提取率先增加，之后开始逐渐减少至趋于平稳，这是因为提取时间可影响提取溶剂与细胞内的活性物质接触，提取时间越长，溶剂越能够充分渗透到细胞内与活性物质接触溶解，从而提高提取的黄酮提取率；而提取时间过长时则会导致细胞内的温度过高，造成提取物的氧化，另外还有其他物质的更多溶出，从而降低总黄酮的含量，故从黄酮提取率的角度来看，提取时间选择1.5h为宜。2.3提取温度对黄酮提取率的影响以提取时间1.5h，液料比1:25g/本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种黑种草子破壁提取总黄酮的方法，步骤如下：（1）黑种草子用石油醚脱脂；（2）脱脂后的黑种草子分散于液体介质中，用超声波细胞粉碎机进行破壁处理；（3）破壁处理后的黑种草子用甲醇溶液加热回流提取，提取液浓缩干燥，得到总黄酮。

【技术特征摘要】
1.一种黑种草子破壁提取总黄酮的方法，步骤如下：（1）黑种草子用石油醚脱脂；（2）脱脂后的黑种草子分散于液体介质中，用超声波细胞粉碎机进行破壁处理；（3）破壁处理后的黑种草子用甲醇溶液加热回流提取，提取液浓缩干燥，得到总黄酮。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）破壁处理时，温...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾尼娃尔·艾克木，杨涛，苗薇薇，周彬，热娜古丽·热依木，孙红雁，
申请(专利权)人：新疆医科大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65