一种岩生忍冬总黄酮提取方法技术

本发明专利技术公开了一种岩生忍冬总黄酮提取方法，采用乙醇回流提取法对岩生忍冬总黄酮浸膏的最佳提取工艺条件为：乙醇浓度80％、浸提温度60℃、浸提次数3次、料液比1:20。在此条件下，3次平行试验平均的总浸膏提取率为24.92％，均值都高于正交试验的浸膏率，总黄酮浸膏率为2.76％，且提取物总黄酮对14种标准菌都有一定的抑制作用，最小抑菌浓度在2.588～10.35mg/mL之间。

A method for extraction of total flavonoids from Caprifoliaceae

The invention discloses a method for extracting total flavonoids from Caprifoliaceae, total flavonoids of Caprifoliaceae extract optimum extraction conditions using ethanol refluxing extraction were 80% ethanol concentration, extraction temperature of 60 DEG C, extraction times 3, solid-liquid ratio 1:20. Under this condition, the 3 parallel test total extract average extraction rate was 24.92%, the average is higher than that of the orthogonal test extract rate of total flavonoids extract rate was 2.76%, and the total flavonoids extract of 14 kinds of standard bacteria have certain inhibition, minimum inhibitory concentration between 2.588 ~ 10.35mg/mL.

【技术实现步骤摘要】
一种岩生忍冬总黄酮提取方法
本专利技术属于总黄酮提取
，尤其涉及一种岩生忍冬总黄酮提取方法。
技术介绍
岩生忍冬(LonicerarupicolaHook.f.&Thomson)，又名西藏忍冬，为忍冬科忍冬属藤本药用植物，主要产于宁夏南部、甘肃(临潭)、青海东南部、四川西部、云南西北部及西藏东部至西南部，生于高山灌丛草甸、流石滩边缘、林缘河滩草地或山坡灌丛中。忍冬属植物俗称金银花，是具有悠久历史的常用中药，常作为金银花入药。其主要的提取活性成分是黄酮类化合物，黄酮类化合物是现代很多药用植物的主要成分，具有抗菌消炎、增加脑血流量及冠脉流量、降压、抗肿瘤和阵痛、抗癌和调节免疫等作用。有关岩生忍冬中的黄酮类化合物研究的报道较少，通过参考了相关文献后，发现国内外文献对岩生忍冬这一资源的乙醇回流提取总黄酮的工艺优化的报道较少，且根据已报道的文献中，同属的药用植物总黄酮的最优提取工艺是乙醇回流提取方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种岩生忍冬总黄酮提取方法，旨在解决国内外文献对岩生忍冬这一资源的乙醇回流提取总黄酮的工艺优化的报道较少的问题。本专利技术是这样实现的，一种岩生忍冬总黄酮提取方法，所述岩生忍冬总黄酮提取方法采用乙醇回流提取法对岩生忍冬总浸膏的最佳提取工艺条件为：乙醇浓度80％、浸提温度60℃、浸提次数3次、料液比1:20。本专利技术的另一目的在于提供一种由所述岩生忍冬总黄酮提取方法提取的岩生忍冬总黄酮制备的抗菌消炎药物。本专利技术的另一目的在于提供一种由所述岩生忍冬总黄酮提取方法提取的岩生忍冬总黄酮制备的增加脑血流量及冠脉流量药物。本专利技术的另一目的在于提供一种由所述岩生忍冬总黄酮提取方法提取的岩生忍冬总黄酮制备的降压药物。本专利技术的另一目的在于提供一种由所述岩生忍冬总黄酮提取方法提取的岩生忍冬总黄酮制备的抗肿瘤药物。本专利技术的另一目的在于提供一种由所述岩生忍冬总黄酮提取方法提取的岩生忍冬总黄酮制备的抗癌药物。本专利技术的另一目的在于提供一种由所述岩生忍冬总黄酮提取方法提取的岩生忍冬总黄酮制备的调节免疫药物。本专利技术提供的岩生忍冬总黄酮提取方法，采用正交设计试验的方法探索岩生忍冬总黄酮乙醇回流提取工艺的最优条件，确定岩生忍冬中黄酮类化合物的乙醇提取法的最优工艺条件和测定其总黄酮的抗菌活性，为合理利用岩生忍冬这一宝贵资源提供理论依据和数据参考。优选岩生忍冬总黄酮乙醇提取工艺的最佳条件及检测其的抗菌活性。以总黄酮的浸膏率为指标，采用正交试验设计L9(34)考察乙醇浓度、温度、浸提次数和料液比对岩生忍冬总黄酮乙醇提取工艺的影响；测定岩生忍冬总黄酮对14种标准菌的最小抑菌浓度(MIC)。岩生忍冬总黄酮乙醇提取法最佳提取工艺条件为：乙醇浓度80％、提取温度60℃、浸提次数3次、料液比1：20，提取的黄酮类化合物为岩生忍冬干重的2.76％；岩生忍冬总黄酮对14种标准菌有一定的抑制作用。该工艺的重现性较好，对岩生忍冬总黄酮的进一步开发利用有参考价值。根据正交试验结果分析表明，采用乙醇回流提取法对岩生忍冬总浸膏的最佳提取工艺条件为：乙醇浓度80％、浸提温度60℃、浸提次数3次、料液比1:20。在此条件下，3次平行试验平均的总浸膏提取率为24.92％。均值都高于正交试验的浸膏率，总黄酮浸膏率为2.76％。且提取物总黄酮对14种标准菌都有一定的抑制作用，最小抑菌浓度在2.588～10.35mg/mL之间。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。下面结合试验对本专利技术的应用原理作进一步的描述。1.材料与方法1.1材料1.1.1药材岩生忍冬采自红原，由西南民族大学药理研究室陈朝喜副教授鉴定为忍冬科忍冬属植物，茎叶晒干后置于恒温干燥箱内备用。1.1.2供试菌株维氏气单胞菌CGMCC3700、大肠杆菌ATCC25922、铜绿假单胞杆菌CGMCCPa3、普通变形杆菌CGMCC1.491、肺炎克雷伯氏菌CGMCC1.1062、痢疾志贺氏菌CGMCC1.1869、中间耶尔森氏菌CGMCC1.6197、肠沙门氏菌肠亚种CGMCC1.10754、粘质沙雷氏菌CGMCC1.4256、金黄色葡萄球菌ATCC25913、F菌(粪肠球菌ATCC25912)、S菌(屎肠球菌ATCC35667)、阪崎肠杆菌CGMCC1.6765、阴沟肠杆菌阴沟亚种CGMCC1.2022，由西南民族大学药理实验室保存提供。1.1.3试剂无水乙醇、80％乙醇、70％乙醇、60％乙醇、石油醚、乙酸乙酯、去离子水、二甲基亚砜、氢氧化钠溶液等。1.1.4主要设备及耗材电子天平、索氏提取器、超纯水仪、RE-3000旋转蒸发仪、循环水真空泵、低温冷却液循环泵、电热鼓风烘干箱、恒温干燥箱、无菌操作台、立式压力蒸汽灭菌器、试管、量筒、烧杯、茄形瓶、玻璃棒、试管架、注射器、记号笔、称量纸、移液枪、枪头、接种环、接种针、圆底锥形瓶、平底锥形瓶、一次性手套、口罩等。1.1.5培养基MH肉汤：按MH肉汤粉、蒸馏水比例为21g/1000mL配制。在电子天平上称取一定量的MH肉粉剂于锥形瓶中，并加入相应比例的蒸馏水，溶解后将一部分分装至试管(每管3mL)，放入立式压力蒸汽灭菌器121℃高压蒸汽灭菌20min后取出，放置于37℃培养箱，24h后做无菌检查，合格者放入4℃冰箱保存备用。1.2方法1.2.1乙醇提取法工艺流程称取5g岩生忍冬茎叶→乙醇回流→趁热过滤→合并滤液→减压、浓缩→鼓风干燥箱烘干10min→计算总净膏率→选取最优工艺条件进行3次平行试验→分别计算其的总净膏率→分别用去离子水溶解→合并溶液→取一定量的溶液NaOH溶液进行碱性显色反应→2BV石油醚脱色→2BV乙酸乙酯萃取→减压、浓缩→鼓风干燥箱烘干10min→计算3次平行试验所得总黄酮的浸膏率。1.2.2正交设计试验称取9份5g岩生忍冬茎叶备用，按照乙醇回流提取因素水平表1和L9(34)正交试验设计表2对岩生忍冬进行乙醇回流提取1h，趁热过滤，合并滤液，用同等浓度的乙醇洗涤药渣2-3次，一并纳入滤液，冷却后定容，摇匀，待用。然后将滤液置于60℃、90r/min的条件下在旋转蒸发仪器上进行减压、浓缩。浓缩成浸膏后置于电热恒温鼓风干燥10min，取出称重，求总浸膏率。总浸膏率计算公式为：总浸膏率(％)＝总浸膏质量/岩生忍冬干重×100％表1：L9(34)正交试验因素水平表1.2.3平行试验为了进一步考察上述提取工艺的最优条件的稳定性和合理性，按照该提取流程的最优工艺条件下进行3次重复性实验，分别称取3份5g的岩生忍冬茎叶进行乙醇回流提取，且分别将滤液置于60℃、90r/min条件下，在旋转蒸发仪器上进行减压、浓缩。浓缩后置于电热恒温鼓风干燥箱烘干10min，取出称重，分别求其总浸膏率。验证该条件是否为最优的提取条件。1.2.4总黄酮的提取和分离将3次平行试验的总浸膏加入适量的去离子水溶解后，定容。用2BV的石油醚脱色，取下层液体，再用2BV的乙酸乙酯萃取，取上层液体，将溶液置于60℃、90r/min条件下，在旋转蒸发仪器上进行减压、浓缩。浓缩后置于电热恒温鼓风干燥箱烘10min，取出称重，计算总黄酮的浸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种岩生忍冬总黄酮提取方法，其特征在于，所述岩生忍冬总黄酮提取方法采用乙醇回流提取法对岩生忍冬总浸膏的提取工艺条件为：乙醇浓度80％、浸提温度60℃、浸提次数3次、料液比1:20。

【技术特征摘要】
1.一种岩生忍冬总黄酮提取方法，其特征在于，所述岩生忍冬总黄酮提取方法采用乙醇回流提取法对岩生忍冬总浸膏的提取工艺条件为：乙醇浓度80％、浸提温度60℃、浸提次数3次、料液比1:20。2.一种由权利要求1所述岩生忍冬总黄酮提取方法提取的总黄酮。3.一种由权利要求2所述总黄酮...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈朝喜，
申请(专利权)人：西南民族大学，
类型：发明
国别省市：四川,51