一种用GDF5基因预示和鉴定秦川牛体尺大小的分子标记方法技术

本发明专利技术公开了一种用ＧＤＦ５基因预示和鉴定秦川牛体尺大小的分子标记方法，该方法根据牛ＧＤＦ５基因序列设计一对引物；利用该引物对牛的基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增；并利用限制性内切酶Ｍｖａ　Ｉ消化扩增的ＰＣＲ产物；然后使用２．５％的琼脂糖凝胶对消化后的ＰＣＲ产物进行电泳分离，检测出ＧＤＦ５基因外显子１的５８６位点处的Ｔ／Ｃ变异位点；分别对牛ＧＤＦ５基因外显子１中变异位点为Ｃ碱基、Ｔ碱基及Ｔ／Ｃ杂合碱基进行命名。根据实验结果表明，具有ＴＴ基因型个体的体长比ＣＣ基因型个体的体长低５．６４～６．８７ｃｍ；具有ＴＴ基因型个体的腰角宽比ＣＣ基因型个体的腰角宽低３．４６～４．００ｃｍ。该方法操作简单、费用低、精确度高，可进行快速检测。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种用ＧＤＦ５基因预示和鉴定秦川牛体尺大小的分子标记方法，其特征在于，包括下列步骤：　步骤一，根据牛ＧＤＦ５基因（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＮＣ＿００７３１１）序列设计一对引物ＧＤＦＦ和ＧＤＦＲ：　ＧＤＦＦ：５’ＴＧＴ　ＣＣＧ　ＡＴ Ｇ　ＣＴＧ　ＡＣＡ　ＧＡＡ　ＡＧＧ　３’（如序列表中序列２所示）　ＧＤＦＲ：５’ＧＡＧ　ＴＧＡ　ＧＧＴ　ＴＡＡ　ＴＣＣ　ＣＡＧ　ＡＴＡ　ＣＣＡ　３’（如序列表中序列３所示）　步骤二，利用该对引物ＧＤＦＦ和ＧＤＦＲ对牛的基因组ＤＮ Ａ进行ＰＣＲ扩增，得到由ＧＤＦＦ和ＧＤＦＲ表示的引物扩增的第一外显子区和第一内含子区的扩增片段，该扩增片段的长度为２３５ｂｐ；　步骤三，利用限制性内切酶Ｍｖａ　Ｉ消化扩增的ＰＣＲ产物；　步骤四，用浓度为２．５％的琼脂糖凝胶对消化 后的ＰＣＲ产物进行电泳分离，检测出ＧＤＦ５基因外显子１的５８６位点处的Ｔ／Ｃ变异位点；　步骤五，通过Ｔ／Ｃ变异位点检测碱基的突变，并根据基因多态性部位分成下面３种基因型：　当Ｔ／Ｃ变异位点为Ｃ碱基时，会产生限制性内切酶Ｍｖａ　Ｉ 的酶切位点即ＣＣ＾ＴＧＧ，Ｍｖａ　Ｉ消化ＰＣＲ产物后会产生的２个片段即１８１ｂｐ和５４ｂｐ，将其命名为ＣＣ基因型；　当Ｔ／Ｃ变异位点为Ｔ碱基即ＣＴＴＧＧ时，则不存在Ｍｖａ　Ｉ酶切位点，Ｍｖａ　Ｉ消化ＰＣＲ产物后只有１个片段即２３５ｂｐ ，将其命名为ＴＴ基因型或野生型；　当Ｔ／Ｃ变异位点为Ｔ／Ｃ杂合时，Ｍｖａ　Ｉ消化ＰＣＲ产物后会产生３个片段即２３５ｂｐ、１８１ｂｐ和５４ｂｐ，将其命名为ＴＣ基因型。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：昝林森，刘永峰，楚秋霞，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]