一种基于多重PCR方法的检测Y染色体AZF区域非整倍性变化的试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种基于多重PCR方法的检测Y染色体AZF区域非整倍性变化的试剂盒，涉及基因检测技术领域。本发明专利技术提供了一种利用多重PCR检测精子二体率和Y染色体非整倍性微小拷贝数变化的方法和试剂盒，检测灵敏度在1％左右，检测下限在5％，高于当前行业20％～30％的灵敏度水平。本专利公开的方法与试剂盒可以通过检测精子的非整倍性微小变化，预测后续辅助诊断的临床结局，提前规避生育风险。本发明专利技术公开的技术实现了当前常规技术所不能实现的检测目的，所公开的技术参数超当前常规技术的技术指标4

【技术实现步骤摘要】
一种基于多重PCR方法的检测Y染色体AZF区域非整倍性变化的试剂盒


[0001]本专利技术涉及基因检测
，尤其涉及一种基于多重PCR方法的检测Y染色体AZF区域非整倍性变化的试剂盒。

技术介绍

[0002]人类Y染色体上携带着负责睾丸发育、男性特征、精子形成与维持的多个基因，这些基因所在区域也称为AZF区域，其中，AZF区域所在的Y染色体长臂(Yq)含有许多重复区域和回文区域、在精子发生过程中容易发生自发重组和染色体局部或者整体的缺失，现在的研究表明，AZF区域的异常变化会导致男性不孕不育、精子数目和形态异常、女性反复流产、胚胎发育不良等临床症状。
[0003]研究资料显示，在对近4万条Y染色体状态的统计分析中发现，全球不育男性中AZF微缺失的患病率为7.5％，而且AZF缺失所引起的症状具有人种差异，例如欧洲男性对Yq微缺失的易感性较低，美国和东亚男性的患病率最高。AZF区域又分为AZFa、AZFb、AZFc、AZFd等4个小区，特别是AZFc位点的部分缺失虽然与不育有关，但其影响范围却与种族有关。4个不同的小区有根据对染色物质的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于多重PCR方法的检测Y染色体AZF区域非整倍性变化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：n1重设置在Y染色体的引物Yplex，n2重设置在X染色体上的引物Xplex，n3重设置在常染色体上的引物IPCplex，n4重设置在PAR区域的引物PARplex，n5重设置在Indel类型SNP上的引物IndelPlex；其中，Yplex、Xplex、IPCplex、PARplex和IndelPlex中各自含有FP组、RPin组和RPout组。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，每个引物组中所述的FP组、RPin组和RPout组满足：在盐浓度为0.25mol/L、温度为55℃时，FP组、RPin组和RPout组的吉布斯自由能ΔG在
‑
20.7073kcal/mol≤ΔG≤
‑
44.6782kcal/mol范围内。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：ΔG通过M1序列进行调节，M1序列为TTCTT或TATCA。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：FP组的序列中含有UMI序列，所述UMI序列为由C、A、T中的一种或集中碱基组成的任意序列。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，检测方法包括以下步骤：S1、将待测DNA样本打断；S2、取打断DNA样本，混合RPout组，FP组和通用PCR引物组，进行UMI PCR和通用PCR，纯化得到产物1；S3、向产物1中混合RPin组引物和通用PCR引物组中的上游引物，对产物1进行半巢式PCR，纯化得到产物2；S4、向产物2中混合index PCR引物组，对产物2进行index PCR，纯化得到产物3；S5、对产物3进行分析。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：通用PCR引物组的上...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗俊峰，赵伟，张宇，刘香琼，
申请(专利权)人：上海阅尔基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：