一种克服微量细胞扩增等位基因脱扣的方法技术

本发明专利技术公开了一种克服微量细胞扩增等位基因脱扣的方法，包括以下步骤：对微量细胞进行基因组核酸扩增；对所述扩增产物进行全基因组建库；用杂交捕获探针对构建的文库进行杂交和靶向捕获；将杂交捕获的文库进行测序，并分析各SNP位点的等位基因突变频率和测序深度；对突变频率低于20％的SNP位点设计至少一对引物和一条抑制探针，用于进行抑制探针置换扩增反应；将抑制探针置换扩增产物进行测序，得到对脱扣等位基因的富集结果。本发明专利技术还公开了一种克服微量细胞扩增等位基因脱扣的检测体系及其在制备植入前胚胎遗传学检测产品中的应用。本发明专利技术方法通过特异性富集突变序列，可对脱扣位置进行直接而准确的富集和检测，显著降低PGT

【技术实现步骤摘要】
一种克服微量细胞扩增等位基因脱扣的方法


[0001]本专利技术涉及基因检测
，尤其涉及一种克服微量细胞扩增等位基因脱扣的方法。

技术介绍

[0002]减少人口出生缺陷是国家基本国策，PGT
‑
M(胚胎植入前单基因遗传病检测)是阻断严重遗传病代际传递的重要手段，也是选择胚胎的唯一依据，现有的胚胎植入前单基因遗传病检测(PGT
‑
M)流程如图1所示。然而，等位基因脱扣(Allele Drop
‑
Out，ADO)现象一直是困扰PGT
‑
M应用的重要原因之一。
[0003]PGT检测利用的是极少量的胚胎活检细胞，由于样本量极少，检测前需要运用分子生物学的方法对极少量的遗传物质进行全基因组扩增，此时等位基因可能发生不对称扩增，即其中一个等位基因被优势扩增，另一个等位基因并未被扩增或扩增较少，导致在后期检测过程中只检测到其中一个等位基因，另一个等位基因未被检测到，这种情况被称为“等位基因脱扣”。PGT检测过程中如果等位基因脱扣，会造成单核苷酸变异检测结果假阳性或者假阴性，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种克服微量细胞扩增等位基因脱扣的方法，其特征在于，包括以下步骤：对微量细胞进行基因组核酸扩增；对所述扩增产物进行全基因组建库；用杂交捕获探针对构建的文库进行杂交和靶向捕获；将杂交捕获的文库进行测序，并分析各SNP位点的等位基因突变频率和测序深度；对突变频率低于20％的SNP位点设计至少一对引物和一条抑制探针，用于进行抑制探针置换扩增反应，所述抑制探针的寡核苷酸链与SNP位点对应的野生型DNA序列碱基互补结合，该抑制探针在野生型DNA序列上的互补结合位置，与所述引物在该野生型DNA序列上的互补结合位置部分重叠；将抑制探针置换扩增产物进行测序，得到对脱扣等位基因的富集结果。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微量细胞包括一个或若干个细胞。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对微量细胞进行基因组核酸扩增包括：采用MDA方法对微量细胞进行基因组核酸扩增。4.一种克服微量细胞扩增等位基因脱扣的检测体系，其特征在于，所述检测体系包括：针对SNP位点设计的至少一对引物和一条抑制探针，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晨明，陈松长，黄荷凤，罗俊峰，汪进平，
申请(专利权)人：上海阅尔基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：