DNA甲基转移酶结合胞嘧啶脱氨酶介导的DNA中5-甲基胞嘧啶的单碱基定位分析方法技术

本发明专利技术提供了一种DNA甲基转移酶结合胞嘧啶脱氨酶介导的DNA中5

【技术实现步骤摘要】
DNA甲基转移酶结合胞嘧啶脱氨酶介导的DNA中5
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甲基胞嘧啶的单碱基定位分析方法


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种DNA甲基转移酶结合胞嘧啶脱氨酶介导的DNA中5
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甲基胞嘧啶的单碱基定位分析方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]5‑
甲基胞嘧啶(5mC)是哺乳动物中最普遍的表观遗传学修饰。5mC在调控基因表达方面发挥着重要的作用。局部或整体水平下DNA甲基化图谱的改变与多种生物进程和病理过程有关，如胚胎发育、X染色体失活和肿瘤发生。在哺乳动物的基因组中，5mC主要存在于CG二核苷酸序列中，由DNA甲基转移酶(DNMTs)利用S
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腺苷
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L
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甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体催化形成。
[0003]在哺乳动物基因组中，大约70
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80％的CG二核苷酸中的胞嘧啶是甲基化修饰的，准确检测5mC对疾病的诊断有着十分深远的意义。目前，5mC的检测分为两类，包括5mC的整体含量检测和测序分析。已有的检测DNA中5m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DNA甲基转移酶结合胞嘧啶脱氨酶介导的DNA中5
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甲基胞嘧啶的单碱基定位分析方法，其特征在于，所述方法包括：采用DNA甲基转移酶对待检DNA进行羧甲基化标记反应，后变性处理以使DNA甲基转移酶灭活而终止反应，获得羧甲基化标记的DNA；采用胞嘧啶脱氨酶对所述羧甲基化标记DNA进行脱氨基反应，后进行高温灭活处理以使胞嘧啶脱氨酶灭活而终止反应，获得脱氨基DNA样品；将所述脱氨基DNA样品进行PCR反应，获得扩增产物；将所述扩增产物测序，获得5
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甲基胞嘧啶的位点信息。2.根据权利要求1所述的一种DNA甲基转移酶结合胞嘧啶脱氨酶介导的DNA中5
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甲基胞嘧啶的单碱基定位分析方法，其特征在于，所述羧甲基化标记反应的条件为：双链DNA在含Tris
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HCl 5～20mM、pH 7.0～8.5、NaCl 20～100mM、二硫苏糖醇0.2～2mM、EDTA 0.2～2mM、羧基
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S
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腺苷
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L
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甲硫氨酸80～640mM、M.MpeI
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N374K蛋白1～10μM的反应体系中，于30～45℃反应0.5～6小时。3.根据权利要求1所述的一种DNA甲基转移酶结合胞嘧啶脱氨酶介导的DNA中5
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甲基胞嘧啶的单碱基定位分析方法，其特征在于，所述变性处理的方法为：在0～60％DMSO存在下，将DNA在90～98℃高温下孵育2～30分钟。4.根据权利要求1所述的一种DNA甲基转移酶结合胞嘧啶脱氨酶介导的DNA中5

【专利技术属性】
技术研发人员：袁必锋，熊军，冯钰锜，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：