一种分析颗粒细胞基因表达的方法技术

本发明专利技术公开了一种分析颗粒细胞基因表达的方法，涉及基因检测技术领域。本发明专利技术通过细胞裂解、逆转录以及PCR扩增等流程制备基因表达文库，利用定量PCR对文库进行质控，纳米孔测序方法检测基因表达。其中，逆转录引物对应序列SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
一种分析颗粒细胞基因表达的方法


[0001]本专利技术涉及生物技术和分子生物学
，尤其涉及一种分析颗粒细胞基因表达的方法。

技术介绍

[0002]原始卵泡由一层扁平的卵泡细胞和一个未分化卵母细胞组成，它的启动生长分为2个阶段。首先，卵泡细胞由扁平变为立方形，开始增殖，同时伴随卵泡抑素表达。随后，形成由单层立方形的颗粒细胞和卵母细胞组成的初级卵泡。初级卵泡的细胞迅速分化增殖形成次级卵泡，此期的颗粒细胞增殖为2～3层。到三级卵泡时，颗粒细胞分化为多层并出现空腔。此后，颗粒细胞分化为两类细胞，即围绕卵泡壁的壁颗粒细胞和围绕卵母细胞的卵丘细胞。排卵后的卵泡细胞迅速转化成黄体细胞。黄体化的颗粒细胞形成大黄体细胞，而黄体化的内膜细胞转化成小黄体细胞。
[0003]在卵泡发生的起始阶段，卵泡细胞还没有形成功能型促性腺激素的受体，所以卵泡生长启动是促性腺激素非依赖性的。颗粒细胞和卵母细胞之间的相互作用可能是卵泡启动生长的原因。卵泡启动生长之后，卵母细胞和颗粒细胞分泌的因子以及来自血浆中的因子对调节卵泡的发育分化起重要作用。卵母细胞分泌的因子指导颗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分析颗粒细胞基因表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、分离颗粒细胞并裂解；S2、逆转录颗粒细胞mRNA为cDNA；S3、PCR扩增cDNA得到文库；S4、检测文库中的基因表达；其中，逆转录引物与PCR扩增引物为同源序列。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：当体系中的颗粒细胞为多个时，在PCR扩增cDNA后、检测基因表达前，还包括对扩增产物进行文库接头标记的步骤。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述文库接头标记为向PCR扩增产物中加入标签序列，所述标签序列长度10
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30bp，GC含量30％～70％。4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：文库接头标记的核苷酸序列为SEQ ID NO.4
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27。5.根据权利要求1所述的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗俊峰，李仁强，
申请(专利权)人：上海阅尔基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：