用于检测肥厚型心肌病突变基因TNNI3、ACTC1和MYPN的试剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因检测技术领域，具体涉及了用于检测肥厚型心肌病突变基因TNNI3、ACTC1和MYPN的试剂，与野生型TNNI3基因的参考序列相比，突变基因TNNI3第414位碱基G突变为碱基C；与野生型ACTC1基因的参考序列相比，突变基因ACTC1第962位碱基C突变为碱基A；与野生型MYPN基因的参考序列相比，突变基因MYPN第3881位碱基T突变为碱基A。本发明专利技术还涉及上述试剂在制备检测试剂盒中的应用。本发明专利技术提供的携带TNNI3 c.414G>C、ACTC1 c.962C>A或MYPN c.3881T>A杂合错义突变的突变基因可以作为临床辅助诊断的生物标志物，对肥厚型心肌病的早期诊断，或者辅助临床诊断、治疗、预后具有重要意义；为有生育需求的患者提供优生优育指导和遗传咨询，能够有效减少患儿出生。能够有效减少患儿出生。能够有效减少患儿出生。

【技术实现步骤摘要】
用于检测肥厚型心肌病突变基因TNNI3、ACTC1和MYPN的试剂及其应用


[0001]本专利技术涉及基因检测
，尤其涉及用于检测肥厚型心肌病突变基因TNNI3、ACTC1和MYPN的试剂及其应用。

技术介绍

[0002]肥厚型心肌病(Hypertrophic cardiomyopathy,HCM)是最常见的遗传性心肌病，就诊量呈逐年上升趋势，在世界范围内的人群发病率约为0.2％，患者年死亡率约为1％。肥厚型心肌病患者的心肌形态学特征和临床表现各不相同，从无症状到猝死、心力衰竭均有发生，是青少年和运动员心源性猝死(Sudden cardiac death,SCD)的最常见原因。肥厚型心肌病的临床表现异质性与基因型、环境因素等相关。
[0003]HCM作为遗传性疾病，目前主要有8个编码肌丝蛋白的基因被证明为HCM的致病基因，包括编码粗肌丝蛋白的MYBPC3、MYH7、MYL2、MYL3和编码细肌丝蛋白的TNNT2、TNNI3、TPM1、ACTC1。其中，MYBPC3和MYH7是最为多见的致病基因，分别导致50％和30～35％的HCM。除了肌丝蛋白基因外，也有很多编码非肌丝蛋白的致病基因被报道，包括编码肌钯蛋白的基因(MYPN)、编码Z盘的基因、编码肌联蛋白的基因、编码细胞骨架蛋白的基因和编码钙调节处理蛋白的基因等。
[0004]基因检测对于患者临床诊断、治疗及患者家系的早期预警非常重要，目前已发现TNNI3、ACTC1和MYPN致病基因的许多突变位点，进一步发现致病基因的新突变位点对于肥厚型心肌病的早期诊断，或者辅助临床诊断、治疗、预后具有重要意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于针对上述缺陷，提供用于检测肥厚型心肌病突变基因TNNI3、ACTC1和MYPN的试剂及其应用。
[0006]本专利技术目的之一在于提供：用于检测肥厚型心肌病突变基因TNNI3、ACTC1和MYPN的试剂，所述试剂包括引物SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:12；与野生型TNNI3基因的参考序列相比，所述突变基因TNNI3的第414位碱基G突变为碱基C，编码核苷酸序列为SEQ ID NO:1，编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:2；与野生型ACTC1基因的参考序列相比，所述突变基因ACTC1的第962位的碱基C突变为碱基A，编码核苷酸序列为SEQ ID NO:3，编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:4；与野生型MYPN基因的参考序列相比，所述突变基因MYPN的第3881位的碱基T突变为碱基A，编码核苷酸序列为SEQ ID NO:5，编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:6。
[0007]突变基因TNNI3、ACTC1和MYPN具体突变信息如下：
[0008][0009]本专利技术目的之二在于提供上述用于检测肥厚型心肌病突变基因TNNI3、ACTC1和MYPN的试剂在制备检测试剂盒中的应用，所述检测试剂盒包括PCR预混液、阴性对照试剂和阳性对照试剂。
[0010]本专利技术的原理和有益效果在于：
[0011]本专利技术提供的TNNI3 c.414G>C、ACTC1 c.962C>A或MYPN c.3881T>A杂合错义突变可以作为临床辅助诊断的生物标志物，对肥厚型心肌病的早期诊断，或者辅助临床诊断、治疗、预后具有重要意义；为有生育需求的患者提供优生优育指导和遗传咨询，能够有效减少患儿出生。
附图说明
[0012]图1为实施例1中携带TNNI3 c.414G>C杂合错义突变患者的Sanger测序图；
[0013]图2为实施例1中携带ACTC1 c.962C>A杂合错义突变患者的Sanger测序图；
[0014]图3为实施例1中携带MYPN c.3881T>A杂合错义突变患者的Sanger测序图；
[0015]图4为实施例2中携带TNNI3 c.414G>C杂合错义突变先证者的家系图；
[0016]图5为实施例2中携带ACTC1 c.962C>A杂合错义突变患病先证者的家系图；
[0017]图6为实施例2中携带MYPN c.3881T>A杂合错义突变患病先证者的家系图。
具体实施方式
[0018]下面通过具体实施方式进一步详细说明：
[0019]试剂来源：PCR Mix：2
×
Taq MasterMix(Dye)，购自江苏康为世纪生物科技有限公司，货号：l01037/70335；包含如下成分：Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg
2+
、dNTPs、PCR稳定剂和增强剂等常规PCR所需要的组分。Agencourt AMPure XP磁珠：购自贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司，货号：311303。扩增用引物均委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成。RNase
‑
Free H2O：购自北京索莱宝科技有限公司。磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒：购自江苏百世诺医疗科技有限公司，批号：20031886
‑
01C。
[0020]实施例1：验证实验
[0021](1)TNNI3 c.414G>C
[0022]在临床诊断为肥厚型心肌病患者(男，24岁)及其家属自愿签署知情同意书的前提
下，寄送5
‑
10mL人类全血EDTA抗凝样本，建立病历资料库，详细记录患者病情、家系情况等资料。本研究已得到本单位伦理委员会批准。
[0023]S1、提取基因组DNA：对患者的人类全血EDTA抗凝样本进行全基因组DNA的提取，采用江苏百世诺医疗科技有限公司磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒，操作步骤按照产品说明书进行。对DNA的浓度和纯度进行检测，作为PCR扩增的模板DNA。
[0024]S2、准备PCR反应体系：该PCR反应体系用于扩增包含目的基因位点在内的一段DNA序列，其组成为：PCR Mix 25μL、正向引物(10μM)2μL、反向引物(10μM)2μL、模板DNA＜1000ng，加RNase
‑
Free H2O补至50μL。所用的正、反向引物信息如下：
[0025]正向引物(TNNI3
‑
E7F1，SEQ ID NO:7)：5'CCTAAGCCGGGAAGAGACTGGTA 3'；反向引物(TNNI3
‑
E7R1，SEQ ID NO:8)：5'CTGAGGACCCCTTACTAGCTG 3'。长度：438bp。
[0026]S3、扩增目的片段：将反应体系混合，在PCR仪上进行目的基因片段的扩增反应，扩增程序为：95℃预变性2min；94℃变性30s，58℃退火20s，72℃延伸30s，共35循环。72℃终延伸2min。
[0027]S4、PCR产物的检测：取本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于检测肥厚型心肌病突变基因TNNI3、ACTC1和MYPN的试剂，其特征在于，所述试剂包括引物SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:12；与野生型TNNI3基因的参考序列相比，所述突变基因TNNI3的第414位碱基G突变为碱基C，编码核苷酸序列为SEQ ID NO:1；与野生型ACTC1基因的参考序列相比，所述突变基因ACTC1的第962位的碱基C突变为碱基A，编码核苷酸序列为SEQ ID NO:3；与野生型MYPN基因的参考序列相比，所述突变基因MYPN的第3881位的碱基T突变为碱基A，编码核苷酸序列为SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘哲，
申请(专利权)人：百世诺北京医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：