用于检测女性原发不孕的TUBA4A基因及检测该基因突变的试剂盒制造技术

本发明专利技术属于基因检测技术领域，具体为用于检测女性原发不孕的TUBA4A基因突变的试剂盒。本发明专利技术涉及的人类TUBA4A基因，它的突变可导致卵子成熟障碍及早期胚胎停滞而致女性不孕的原因。通过检测TUBA4A基因的突变可作为判断因卵子成熟障碍及早期胚胎停滞致女性不孕的标记基因。利用本发明专利技术提供的TUBA4A基因突变可用于评价或制备因卵子成熟障碍及早期胚胎质量低下致女性不孕的筛查试剂盒。利用本发明专利技术提供的TUBA4A基因突变与否，可用于指导临床相应患者是否合适进行试管婴儿术。者是否合适进行试管婴儿术。者是否合适进行试管婴儿术。

【技术实现步骤摘要】
用于检测女性原发不孕的TUBA4A基因及检测该基因突变的试剂盒


[0001]本专利技术属于基因检测
，具体涉及一种用于检测女性原发不孕的TUBA4A基因及检测该基因突变的试剂盒。

技术介绍

[0002]正常怀孕及生殖是维持及延续人类种群的重要环节。对于女性不孕，目前已经有ZP
‑
1，Stag3，FSHR等基因被发现与女性不孕症密切相关(Huang HL et al,Mutant ZP1 in familial infertility.N Engl J Med.2014 370(13):1220
‑
6；de Roux N et al,A family with hypogonadotropic hypogonadism and mutations in the gonadotropin
‑
releasing hormone receptor.N Engl J Med.1997 337(22):1597
‑
602；Caburet S et al,Mutant cohesion in premature ovarian failure.N Engl J Med.2014 370(10):943
‑
9)。但是，均未在临床中应用。
[0003]导致女性不孕症的原因很多，有一些临床报道涉及以卵子不成熟为特征的女性不孕症的描述(Rudak et al,fertility and sterility,1990 54:292
>‑
296；Human Reproduction,1995 10:2343
‑
2349；fertility and sterility 1999 71:567
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570；Human Reproduction 2001 16(10):2136
‑
2138；Human Reproduction 2002 17(6):1604
‑
1609；Human Reproduction 2002 17(10):2556
‑
2559)。这些患者通过反复进行授精
‑
胚胎移植术(试管婴儿)，均因未能获取到成熟卵细胞，而无法完成成功的体外授精操作。如果能发现相关致病基因，则对疾病临床诊断及分型都具有重要意义。最近我们发现了导致人类卵子成熟障碍的致病基因TUBB8(N Engl J Med.2016 Jan 21；374(3):223
‑
32)、PATL2(Am J Hum Genet.2017 Oct 5；101(4):609
‑
615)，导致人类卵子受精障碍致病基因WEE2(Am J Hum Genet.2018 Apr 5；102(4):649
‑
657)，导致卵子死亡致病基因PANX1(Sci Transl Med.2019 Mar 27；11(485):eaav8731)，导致合子分裂失败致病基因BTG4(Am J Hum Genet.2020 Jul 2；107(1):24
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33)及早期胚胎停育致病基因PADI6(Am J Hum Genet.2016 Sep 1；99(3):744
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752)，FBXO43(Hum Reprod.2021 Jul 19；36(8):2392
‑
2402)，MOS(Hum Reprod.2022 Mar 1；37(3):612
‑
620)等。但是，这几个基因仅能解释部分患者的原因，相当多患者的原因依然未知。
[0004]经对现有技术文献的检索发现，发现TUBA4A基因缺陷与神经性疾病相关的研究文章，尚无针对女方不孕疾病相关报道。我们的研究发现，TUBA4A编码一种α
‑
微管蛋白亚型，在小鼠卵子受精及早期胚胎发育过程中特异高表达。TUBA4A变异会导致小鼠卵子第一极体排出比例严重降低，且纺锤体长度明显变短，表明α
‑
微管蛋白TUBA4A在人卵子减数分裂纺锤体组装过程可能发挥重要作用。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种操作方便、效果明确的用于检测女性原发不孕的
TUBA4A基因及检测该基因突变的试剂盒。
[0006]本专利技术提出的用于检测女性原发不孕的TUBA4A基因，其核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]本专利技术涉及筛查因卵子成熟障碍及早期胚胎停滞而致原发性不孕的方法，就是通过检测TUBA4A基因是否发生突变来判断患者是否为卵子成熟障碍及早期胚胎停滞而导致的原发性不孕。患者携带TUBA4A基因突变表现为不孕，表现为卵子成熟障碍，或是卵子受精后反复胚胎停育及试管婴儿失败。
[0008]可见，TUBA4A基因是否发生突变可作为判断因卵子成熟障碍及早期胚胎停滞致女性不孕的标记。
[0009]检测TUBA4A基因是否发生突变方法，具体可从患者的外周血中提取DNA后，用PCR(多聚酶链式反应)法结合DNA测序，来检测TUBA4A基因是否发生了突变。
[0010]其中，检测的样本是DNA，该DNA样本来自于待检人群的外周血。
[0011]或者，检测的样本是RNA、蛋白、细胞或者血清样本，该样本来自于待检人群的外周血。
[0012]本专利技术涉及检测TUBA4A基因是否发生突变的引物。
[0013]TUBA4A基因有4个外显子编码区，用于检测第1外显子编码区的PCR扩增引物对为：
[0014]5’‑
CCTATAAGGGCGGTGCGG
‑3’
(SEQ ID NO.2)
[0015]5’‑
ACTATACGGCTCGGCCAAAG
‑3’
(SEQ ID NO.3)
[0016]测序引物对同上；
[0017]用于检测第2号外显子编码区的PCR扩增引物对为：
[0018]5’‑
GGTGGAAGAGAGACTCGCAA
‑3’
(SEQ ID NO.4)
[0019]5’‑
TGCAGCTTCAAGTACGGCT
‑3’
(SEQ ID NO.5)
[0020]测序引物对同上；
[0021]用于检测第3号外显子编码区的PCR扩增引物对为：
[0022]5’‑
AGTCCTTCCATGCATCTGGC
‑3’
(SEQ ID NO.6)
[0023]5’‑
TCACCTGGCTCCATAAAGCG
‑3’
(SEQ ID NO.7)
[0024]测序引物对同上；
[0025]用于检测第4号外显子编码区的PCR扩增引物对为：
[0026]5’‑
AAACTGTTCTTTCTCGTTCTTGCC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种判断因卵子成熟障碍及早期胚胎停滞致女性不孕的标记基因，其特征在于，为TUBA4A基因，所述TUBA4A基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，判断的依据为TUBA4A基因是否发生突变。2.一种筛查因卵子成熟障碍及早期胚胎停滞而致原发性不孕的方法，其特征在于，通过检测TUBA4A基因是否发生突变来判断患者是否为卵子成熟障碍及早期胚胎停滞而导致的原发性不孕。3.根据权利要求2所述的筛查因卵子成熟障碍及早期胚胎停滞而致原发性不孕的方法，其特征在于，TUBA4A基因发生突变的信息如下：4.用于检测TUBA4A基因是否发生突变的引物，其特征在于，对于TUBA4A基因的4个外显子编码区，检测用的PCR扩增引物对依次为：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7，SEQ ID NO.8...

【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，桑庆，
申请(专利权)人：珠海复旦创新研究院，
类型：发明
国别省市：