一种基因CLCN4复合杂合突变的应用及检测试剂和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种基因CLCN4复合杂合突变的应用及检测试剂和应用，属于医学诊断技术领域。本发明专利技术首次发现了CLCN4:NM_001830.4:exon11:c.1595C>A:p.T532K和CLCN4:NM_001830.4:exon11:c.1873C>T:p.L625F位点复合杂合突变可以导致Raynaud

【技术实现步骤摘要】
一种基因CLCN4复合杂合突变的应用及检测试剂和应用


[0001]本专利技术属于医学诊断
，具体涉及一种基因CLCN4复合杂合突变的应用及检测试剂和应用。

技术介绍

[0002]Raynaud
‑
Claes综合征(MIM 300114)是一种X染色体连锁的显性遗传病。临床特征包括长脸、下巴突出、直鼻等面部畸形，严重的精神运动发育迟缓、智力障碍，肌张力减退，部分患者出现脊柱侧凸、步态异常、癫痫、行为问题、进行性共济失调及大脑异常等。致病基因CLCN4基因(MIM 302910)位于X染色体，男性(46,XY)患者表型明显，女性患者(46,XX)临床表现存在异质性，部分女性影响非常轻微，而另一些则表现出与男性患者表型相似但轻重不一的一系列临床表型。Raynaud
‑
Claes综合征引起智力障碍的范围从临界到严重；行为和精神疾病在儿童和成年期都很常见，包括孤独症特征，情绪障碍，强迫行为以及异性和自发攻击；癫痫病很常见，严重程度从癫痫性脑病到控制良好的癫痫发作不等。部分患者在脑神经影像学上显示出白质变化，并出现进行性神经系统症状，包括运动障碍和痉挛等。
[0003]CLCN4基因(MIM 302910)定位于染色体Xp22.2，基因全长80.7kb，包含13个外显子和12个内含子，编码760个氨基酸组成的CHLORIDE CHANNEL 4蛋白。CLCN4蛋白是电压依赖的2Cl
ˉ
/H+交换体ClC
‑
4。CLCN4基因突变可引起X连锁的智力障碍、癫痫、行为异常和先天性畸形。CLCN4突变导致的癫痫多为药物难治性，发病机制尚不明确，预后差，目前无有效的治疗方法。CLCN4突变谱包括移码，错义和剪接位点变异以及一个单外显子缺失等。
[0004]基因突变是导致Raynaud
‑
Claes综合征发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊Raynaud
‑
Claes综合征的金标准。临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和疾病诊断，现有技术中对基因突变位点基因型的检测，可以采用其他方法限制性酶切片段长度多态性、单链构象多态性、等位基因特异的寡聚核苷酸杂交等等，但这些检测方法均不能同时满足定性、定量及明确突变基因的序列的目的。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种导致Raynaud
‑
Claes综合征的致病基因CLCN4复合杂合突变的应用，开发一种新型的致病基因复合杂合突变可以作为诊断Raynaud
‑
Claes综合征的生物标志物，区分Raynaud
‑
Claes综合征患者、携带者和正常人群。
[0006]本专利技术的目的还在于提供一种检测导致Raynaud
‑
Claes综合征的致病基因CLCN4复合杂合突变的试剂和应用，助力Raynaud
‑
Claes综合征基因突变的筛查和诊断。
[0007]本专利技术提供了一种基因CLCN4复合杂合突变位点在制备Raynaud
‑
Claes综合征诊断试剂或制备防治Raynaud
‑
Claes综合征的药物中的应用，所述致病基因CLCN4复合杂合突变位点为CLCN4:NM_001830.4:exon11:c.1595C>A:p.T532K和CLCN4:NM_001830.4:exon11:c.1873C>T:p.L625F。
[0008]本专利技术提供了一种用于检测Raynaud
‑
Claes综合征的致病基因CLCN4复合杂合突
变位点的试剂，包括检测致病基因CLCN4突变位点c.1595C>A:p.T532K的引物和检测致病基因CLCN4突变位点c.1873C>T:p.L625F的引物；
[0009]所述检测致病基因CLCN4突变位点c.1595C>A:p.T532K的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的CLCN4
‑
1F和核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的CLCN4
‑
1R；
[0010]所述检测致病基因CLCN4突变位点c.1873C>T:p.L625F的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的CLCN4
‑
2F和核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的CLCN4
‑
2R。
[0011]优选的，还包括测序引物；
[0012]所述测序引物包括致病基因CLCN4突变位点c.1595C>A:p.T532K的测序引物和/或致病基因CLCN4突变位点c.1873C>T:p.L625F的测序引物；
[0013]所述致病基因CLCN4突变位点c.1595C>A:p.T532K的测序引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的CLCN4
‑
Seq1F和核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示的CLCN4
‑
Seq1R；
[0014]所述致病基因CLCN4突变位点c.1873C>T:p.L625F的测序引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示的CLCN4
‑
Seq2F和核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示的CLCN4
‑
Seq2R。
[0015]本专利技术提供了一种Raynaud
‑
Claes综合征诊断试剂盒，包括所述试剂和PCR扩增试剂。
[0016]优选的，所述PCR扩增试剂包括dNTP、10
×
PCR缓冲液、镁离子和Tap聚合酶；
[0017]所述10
×
PCR缓冲液包含以下组分的水溶液：500mmol/LKCl、pH 8.3的100mmol/LTris
‑
Cl和15mmol/LMgCl2。
[0018]本专利技术提供了所述试剂在制备检测Raynaud
‑
Claes综合征的致病基因CLCN4突变位点的试剂盒中的应用。
[0019]本专利技术提供了一种检测致病基因CLCN4复合杂合突变位点的引物在制备辅助诊断Raynaud
‑
Claes综合征的试剂盒中的应用，所述致病基因CLCN4复合杂合突变位点为CLCN4:NM_001830.4:exon11:c.1595C>A:p.T532K和CLCN4:NM_001830.4:exon11:c.1873C>T:p.L625F。
[0020]优选的，所述引物为上述方案所述试剂。
[0021]优选的，所述辅助诊断Raynaud
‑
Claes综合征的方法，包括以下步骤：用所述试剂盒检测样本中基因突变位点的基因型来诊断本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因CLCN4复合杂合突变位点在制备Raynaud
‑
Claes综合征诊断试剂或制备防治Raynaud
‑
Claes综合征的药物中的应用，所述基因CLCN4复合杂合突变位点为CLCN4:NM_001830.4:exon11:c.1595C>A:p.T532K和CLCN4:NM_001830.4:exon11:c.1873C>T:p.L625F。2.一种用于检测Raynaud
‑
Claes综合征的致病基因CLCN4复合杂合突变位点的试剂，其特征在于，包括检测致病基因CLCN4突变位点c.1595C>A:p.T532K的引物和检测致病基因CLCN4突变位点c.1873C>T:p.L625F的引物；所述检测致病基因CLCN4突变位点c.1595C>A:p.T532K的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的CLCN4
‑
1F和核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的CLCN4
‑
1R；所述检测致病基因CLCN4突变位点c.1873C>T:p.L625F的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的CLCN4
‑
2F和核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的CLCN4
‑
2R。3.根据权利要求2所述试剂，其特征在于，还包括测序引物；所述测序引物包括致病基因CLCN4突变位点c.1595C>A:p.T532K的测序引物和/或致病基因CLCN4突变位点c.1873C>T:p.L625F的测序引物；所述致病基因CLCN4突变位点c.1595C>A:p.T532K的测序引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的CLCN4
‑
Seq1F和核苷酸序列如SEQ IDNO:6所示的CLCN4
‑
Seq1R；所述致病基因CLCN4突变位点c.1873C>T:p.L625F的测序引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示的CLCN4
‑
Seq2F和核苷酸序列如SEQ IDNO:8所示的CLC...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾桥，陈涵，安灿荣，彭谦，伊宁，
申请(专利权)人：湖南家辉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：