【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，尤其涉及nr5a1突变基因作为检测靶点的应用、试剂及试剂盒。
技术介绍
1、性发育异常(disorders of sex development，dsd)是染色体核型、性腺表型以及性腺解剖结构不一致的一大类遗传异质性疾病的总称。其主要临床表现为内外生殖器模糊可兼有男、女两性特征甚至性别模糊难以确定。据报道，在活产婴儿中，生殖器模糊患儿的患病率接近1/1000。按照染色体核型将dsd大致分为：性染色体dsd、46,xydsd和46,xx dsd等三大类。46,xy dsd的患者具有结构和数目正常的46,xy核型，雄激素分泌减少，表现为从轻度尿道下裂到完全的内外女性生殖器。46,xy dsd主要与雄激素合成/功能障碍及睾丸分化异常相关。46,xy dsd主要包括：(1)性腺发育异常：完全性腺发育不良(cgd)、部分性腺发育不良(pgd)、卵巢型性发育异常、卵睾型性发育异常、睾丸退化等。46,xy cgd的特征是完全雌性外生殖器，明显的苗勒氏结构，性腺由一系列纤维组织组成。由于缺乏睾酮和抗苗勒氏激素的产生导致子宫、输卵管、苗勒氏管存在，外生殖器雌性化。46,xy pgd的特征是部分睾丸发育正常，伴或不伴有发育良好的卵黄管和苗勒氏管，外生殖器不同程度的男性化；(2)雄激素合成/功能障碍：黄体生成素(lh)受体异常、5α-还原酶2型异常、类固醇合成急性调节蛋白异常、先天性肾上腺皮质增生症(cah)、完全雄激素不敏感综合征(cais)、部分雄激素不敏感综合征(pais)等；(3)男性外生殖器模糊。目前已发现40多个基
2、nr5a1基因(mim 184757)是46,xy性反转3型的致病基因，该基因定位于染色体9q33.3，基因全长26.2kb，包含7个外显子和6个内含子，编码461个氨基酸类固醇生成因子1(sf1/nr5a1)，sf1是一个孤核受体，由一个含有两个锌指结构和一个ftz-f1盒的dna结合结构域(dbd)、一个辅助铰链区、一个配体结合结构域(lbd)两个功能激活结构域af-1和af-2组成。sf1作为一种转录因子，它以序列特异性的方式直接与dna结合，并招募辅助因子和/或配体，使下游靶基因能够转录激活或抑制。sf1在发育中胚胎的肾上腺和双潜能性腺中表达，sf1是类固醇合成和生殖发育的关键调节因子，控制着肾上腺和性腺发育的重要过程，在46,xy胚胎发育过程中，它首先在泌尿生殖嵴表达，并与sry、sox9和gata4基因一起促进睾丸分化。nr5a1基因缺失的小鼠表现出肾上腺和性腺完全发育不良；在xy小鼠中，生殖表型包括雌性外生殖器和持久的苗勒氏结构。nr5a1突变与性发育异常有关，同时nr5a1与生育能力相关，这些症状包括伴有或不伴有苗勒氏残留结构的性腺和睾丸发育不良，生殖器含糊不清，轻度和重度尿道下裂，不同严重程度的男性发育不良：如小阴茎、隐睾、无睾症，男性不育。nr5a1错义突变最为常见，其它突变类型有移码突变、无义突变、非移码突变和剪接突变等，突变分布在基因编码序列中，没有明显突变热区。nr5a1基因突变除在46,xy个体中导致46,xy性反转3型，还可以在46,xx个体中导致46,xx性反转4型(mim 617480)、卵巢早衰7型(mim 612964)等。
3、nr5a1基因突变是导致46,xy性反转3型发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊46,xy性反转3型的金标准。临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和疾病诊断，发现与46,xy性反转3型相关的基因突变位点，助力46,xy性反转3型基因突变的筛查和诊断，并为其药物筛选、药效评价及靶向治疗，具有重要意义。现有技术中对基因突变位点的基因型进行检测，可以采用其他方法限制性酶切片段长度多态性、单链构象多态性、等位基因特异的寡聚核苷酸杂交等等，但这些检测方法均不能同时满足定性、定量及明确突变基因的序列的目的，所以需要针对特异突变位点的特异性扩增引物、测序引物，并将通过上述引物进一步对突变基因测序，并应用于治疗46,xy性反转3型。
4、综上所述，急需一种nr5a1突变基因作为检测靶点的应用、试剂及试剂盒。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的是提供一种nr5a1突变基因作为检测靶点的应用、试剂及试剂盒，以解决现有技术中不能同时满足定性、定量及明确突变基因的序列的技术问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种nr5a1突变基因作为检测靶点在制备用于检测46,xy性反转3型的试剂和/或制备用于检测46,xy性反转3型的试剂盒中的应用，所述nr5a1突变基因的序列如seq id no.45所示，其中第4号外显子的第870+1位碱基为a。
3、通过将nr5a1突变基因作为检测靶点用于制备试剂或制备试剂盒，从而丰富了对于46,xy性反转3型的检测手段的种类的同时，能通过试剂或试剂盒直接检测由于nr5a1突变基因导致的46,xy性反转3型，缩短了检测所用时间，方便医生或者患者及时了解病情，并针对性的进行后续治疗。
4、优选的，所述试剂和/或试剂盒包括扩增引物，所述扩增引物包括核苷酸序列如seq id no.1所示的上游引物nr5a1-1f和核苷酸序列如seq id no.2所示的下游引物nr5a1-1r。
5、通过本专利技术提供的扩增引物能够特异性扩增nr5a1突变基因以及野生型nr5a1基因，并能配合其他测序引物实现对目标基因核苷酸序列的检测，用于检测46,xy性反转3型。
6、优选的，所述试剂和/或试剂盒包括测序引物，所述测序引物包括核苷酸序列如seq id no.3所示的上游引物nr5a1-seq1f和核苷酸序列如seq id no.4所示的下游引物nr5a1-seq1r。
7、通过本专利技术提供的测序引物能够特异性检测nr5a1突变基因，从而检测是否患有46,xy性反转3型。
8、本专利技术还提供一种用于检测46,xy性反转3型的试剂，所述试剂包括nr5a1突变基因，所述nr5a1突变基因的序列如seq id no.45所示，其中第4号外显子的第870+1位碱基为a。
9、本专利技术还提供一种用于检测46,xy性反转3型的试剂盒，所述试剂盒包括上述试剂。
10、优选的，所述试剂盒包括预防46,xy性反转3型试剂盒、诊断或辅助诊断46,xy性反转3型试剂盒、孕前和/或产前遗传病筛查试剂盒、孕前和/或产前遗传病诊断试剂盒以及辅助治疗46,xy性反转3型试剂盒中的一种或多种。
11、通过不同种类的试剂盒可以在不同的患病时期，对该基因突变导致的46,xy性反转3型进行干预和治疗。
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1.一种NR5A1突变基因作为检测靶点在制备用于检测46,XY性反转3型的试剂和/或制备用于检测46,XY性反转3型的试剂盒中的应用，其特征在于，所述NR5A1突变基因的序列如SEQ ID NO.45所示，其中第4号外显子的第870+1位碱基为A。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂和/或试剂盒包括扩增引物，所述扩增引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物NR5A1-1F和核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示的下游引物NR5A1-1R。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂和/或试剂盒包括测序引物，所述测序引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的上游引物NR5A1-Seq1F和核苷酸序列如SEQID NO.4所示的下游引物NR5A1-Seq1R。
4.一种用于检测46,XY性反转3型的试剂，其特征在于，所述试剂包括NR5A1突变基因，所述NR5A1突变基因的序列如SEQ ID NO.45所示，其中第4号外显子的第870+1位碱基为A。
5.一种用于检测46,XY性反转3型的试剂盒
...【技术特征摘要】
1.一种nr5a1突变基因作为检测靶点在制备用于检测46,xy性反转3型的试剂和/或制备用于检测46,xy性反转3型的试剂盒中的应用，其特征在于，所述nr5a1突变基因的序列如seq id no.45所示，其中第4号外显子的第870+1位碱基为a。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂和/或试剂盒包括扩增引物，所述扩增引物包括核苷酸序列如seq id no.1所示的上游引物nr5a1-1f和核苷酸序列如seq idno.2所示的下游引物nr5a1-1r。
3.根据权利要求1所述的应...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾桥，徐霞，刘亚宁，范园，何亮波，
申请(专利权)人：湖南家辉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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