用于检测女性原发不孕的KPNA7基因及检测该基因突变的试剂盒制造技术

本发明专利技术属于基因检测技术领域，具体为用于检测女性原发不孕的KPNA7基因及检测该基因突变的试剂盒。本发明专利技术涉及的人类KPNA7基因，它的突变可导致卵子受精后反复胚胎停育而致女性不孕的原因。通过检测KPNA7基因的突变可作为判断因卵子受精后反复胚胎停育致女性不孕的标记基因。利用本发明专利技术提供的KPNA7基因突变可用于评价或制备因卵子受精后反复胚胎停育致女性不孕的筛查试剂盒。利用本发明专利技术提供的KPNA7基因突变与否，可用于指导临床相应患者是否合适进行试管婴儿术。是否合适进行试管婴儿术。是否合适进行试管婴儿术。

【技术实现步骤摘要】
用于检测女性原发不孕的KPNA7基因及检测该基因突变的试剂盒


[0001]本专利技术属于基因检测
，具体涉及一种用于检测女性原发不孕的KPNA7基因及检测该基因突变的试剂盒。

技术介绍

[0002]正常怀孕及生殖是维持及延续人类种群的重要环节。对于女性不孕，目前已经有ZP1，Stag3，FSHR等基因被发现与女性不孕症密切相关（Huang HL et al, Mutant ZP1 in familial infertility. N Engl J Med. 2014 370(13):1220
‑
6;de Roux N et al, A family with hypogonadotropic hypogonadism and mutations in the gonadotropin
‑
releasing hormone receptor. N Engl J Med. 1997 337(22):1597
‑
602;Caburet S et al, Mutant cohesion in premature ovarian failure. N Engl J Med.2014 370(10):943
‑
9）。但是，均未在临床中应用。
[0003]导致女性不孕症的原因很多，有一些临床报道涉及以卵子不成熟为特征的女性不孕症的描述（Rudak et al, fertility and sterility,1990 54:292
‑r/>296;Human Reproduction,1995 10:2343
‑
2349; fertility and sterility 1999 71:567
‑
570;Human Reproduction 2001 16(10):2136
‑
2138;Human Reproduction 2002 17(6):1604
‑
1609;Human Reproduction 2002 17(10):2556
‑
2559）。这些患者通过反复进行授精
‑
胚胎移植术（试管婴儿），均因未能获取到成熟卵细胞，而无法完成成功的体外授精操作。如果能发现相关致病基因，则对疾病临床诊断及分型都具有重要意义。最近我们发现了导致人类卵子成熟障碍的致病基因TUBB8(N Engl J Med. 2016 Jan 21;374(3):223
‑
32)、PATL2（Am J Hum Genet. 2017 Oct 5;101(4):609
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615），导致人类卵子受精障碍致病基因WEE2（Am J Hum Genet. 2018 Apr 5;102(4):649
‑
657），导致卵子死亡致病基因PANX1（Sci Transl Med. 2019 Mar 27;11(485):eaav8731），导致合子分裂失败致病基因BTG4（Am J Hum Genet. 2020 Jul 2;107(1):24
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33）及早期胚胎停育致病基因PADI6（Am J Hum Genet. 2016 Sep 1;99(3):744
‑
752）、FBXO43（Hum Reprod. 2021 Jul 19;36(8):2392
‑
2402），MOS（Hum Reprod. 2022 Mar 1;37(3):612
‑
620）但是，这几个基因仅能解释部分患者的原因，相当多患者的原因依然未知。
[0004]经对现有技术文献的检索发现，仅有少数几篇围绕KPNA7基因功能的研究文章。这些研究报道该基因表达一种核转运蛋白，在小鼠早期胚胎发育过程中起着重要作用，且纯合敲除雌鼠育性下降。但是，至今未见关于KPNA7基因突变与人类疾病之间关系的任何报道,也未发现其与女性不孕症相关的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种操作方便、效果明确的用于检测女性原发不孕的KPNA7基因及检测该基因突变的试剂盒。
[0006]本专利技术提出的用于检测女性原发不孕的KPNA7基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]本专利技术涉及筛查因卵子受精后反复胚胎停育而致原发性不孕的方法，就是通过检测KPNA7基因是否发生突变来判断患者是否为卵子受精后反复胚胎停育而导致的原发性不孕。患者携带KPNA7基因突变表现为不孕，表现为卵子可以成熟，但受精后反复胚胎停育及试管婴儿失败。
[0008]可见，KPNA7基因是否发生突变可作为判断因卵子受精后反复胚胎停育致女性不孕的标记。
[0009]检测KPNA7基因是否发生突变方法，具体可从患者的外周血中提取DNA后，用PCR（多聚酶链式反应）法结合DNA测序，来检测KPNA7基因是否发生了突变。
[0010]其中，检测的样本是DNA，该DNA样本来自于待检人群的外周血。
[0011]或者，检测的样本是RNA、蛋白、细胞或者血清样本，该样本来自于待检人群的外周血。
[0012]本专利技术涉及检测KPNA7基因是否发生突变的引物。
[0013]KPNA7基因有10个外显子编码区，用于检测第1外显子编码区的PCR扩增引物对为：5
’‑ꢀ
GCTCCACTGTGAGCCCTTTA
‑3’
（SEQ ID NO.2）5
’‑ꢀ
TTCCACAGTTGTCTGGCTCC
‑3’
（SEQ ID NO.3）测序引物对同上；用于检测第2号外显子编码区的PCR扩增引物对为：5
’‑ꢀ
CCGAAAAGGCCTGGGTACAT
‑3’
（SEQ ID NO.4）5
’‑ꢀ
CCTCTCCATCCCCCACTAGA
‑3’
（SEQ ID NO.5）测序引物对同上；用于检测第3号外显子编码区的PCR扩增引物对为：5
’‑ꢀ
ACAGCATGCAAGATGGGACA
‑3’
（SEQ ID NO.6）5
’‑ꢀ
TGCCCTCAAGGACAGTGTAG
‑3’
（SEQ ID NO.7）测序引物对同上；用于检测第4号外显子编码区的PCR扩增引物对为：5
’‑ꢀ
CTTAAGTAGCTCCGGCCCAG
‑3’
（SEQ ID NO.8）5
’‑ꢀ
GTACCCTTGCCAGCACTTCT
‑3’
（SEQ ID NO.9）测序引物对同上；用于检测第5号外显子编码区的PCR扩增引物对为：5
’‑ꢀ
CATCAGGACTGTCCACCCAC
‑3’
（SEQ ID NO.10）5
’‑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. KPNA7基因作为判断因卵子受精后反复胚胎停育致女性原发性不孕的标记的应用，所述KPNA7基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种筛查因卵子受精后反复胚胎停育而致女性原发性不孕的方法，其特征在于，通过检测KPNA7基因是否发生突变来判断患者是否为卵子受精后反复胚胎停育而导致的原发性不孕。3. 用于检测KPNA7基因是否发生突变的引物，其特征在于，对于KPNA7基因的10个外显子编码区，检测用的PCR扩增引物对依次为：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7，SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9，SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11，SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13，SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15，SEQ ID NO.16、SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，桑庆，
申请(专利权)人：珠海复旦创新研究院，
类型：发明
国别省市：