检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法与应用，属于生物医药检测技术领域。本发明专利技术所述的试剂盒，包括卡壳、位于所述卡壳内的试纸条；所述试纸条包括PVC底板、吸水垫、反应膜、结合垫和样品垫，所述结合垫上负载有胶体金标记的羊抗鼠IgG抗体和检测抗原；所述反应膜上设有检测线和质控线；所述检测线上包被有捕获抗原，所述质控线上包被有质控物；所述捕获抗原和检测抗原均为S

【技术实现步骤摘要】
检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物医药检测
，尤其涉及一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒肺炎(COVID
‑
19)暴发流行对全球公众健康构成了严重威胁。COVID
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19患者与2003年严重急性呼吸综合征和2012年中东呼吸系统综合征患者症状相似，表现出一系列包括干咳、发热、头痛、呼吸困难等症状，病死率达3
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5％。截至2021年8月31日，全球超过2.1亿人确诊COVID
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19，453万人死亡，同时该病给全球带来严重的经济损失。2020年1月20日，卫健委发布2020年1号公告，将新型冠状病毒感染的肺炎纳入乙类传染病，并采取甲类传染病的预防、控制措施。将新型冠状病毒感染的肺炎纳入检疫传染病管理。
[0003]新型冠状病毒(severeacute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS
‑
CoV
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2)中有个重要的棘突S蛋白(spike protein)，S蛋白上有一个受体结合结构域，叫做Receptorbinding domain(RBD)，是与人体细胞上ACE2直接结合的位点。研究证实S
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RBD是中和抗体主要的抗原表位，针对S
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RBD产生的特异性抗体可以阻断新型冠状病毒与ACE2结合，从而使病毒不能入侵宿主细胞，起到“中和”病毒的作用，故称为中和抗体。
[0004]新型冠状病毒已形成全球大流行，对公共健康、社会经济等造成严重负担，迫切需要有效的控制手段。疫苗成为世界各国对抗新型冠状病毒的重要手段。据卫生健康委，截至2021年8月31日，全国累计报告接种新型冠状病毒疫苗206758.9万剂次。新型冠状病毒中和抗体的检测可以反映群体的感染率、个人的康复情况以及疫苗的效果，但传统的病毒中和实验需使用活病毒和细胞，且对实验室安全性及操作人员技能要求较高。这种耗时长、要求高的传统中和检测方法显示不适用于传播速度快、感染覆盖范围广的新型冠状病毒。因此，建立快速检测中和抗体的方法十分有意义。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法与应用。通过S
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RBD特异性结合中和抗体的双抗原夹心法，这种方法只采用S
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RBD作为抗原来检测总中和抗体，包括针对S
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RBD中和表位的IgG、IgM、IgA总抗体，其灵敏度和特异性比单独检测IgG或IgM更高。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，包括卡壳、位于所述卡壳内的试纸条；所述试纸条包括PVC底板、吸水垫、反应膜、结合垫和样品垫；所述结合垫上负载有胶体金标记的羊抗鼠IgG抗体和检测抗原；所述反应膜上设有检测线T线和质控线C线；所述检测线靠近所述结合垫一侧，所述质控线靠近所述吸水垫一侧；所述检测线上包被有捕获抗原，所述质控线上包被有质控物；编码所述捕获抗原和检测抗原均为S
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RBD蛋白；所述S
‑
RBD蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述S
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RBD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
[0007]所述SEQ ID No.1的序列如下：
[0008]AGGGTACAACCGACGGAGTCCATCGTACGGTTTCCGAACATCACTAACTTATGCCCATTCGGAGAAGTTTTCAATGCAACGAGATTCGCATCCGTCTATGCATGGAACCGAAAGCGAATTAGCAATTGCGTGGCCGATTATAGCGTACTATACAATTCAGCTAGCTTCTCCACGTTCAAATGCTATGGGGTATCGCCCACCAAGTTGAATGACCTATGTTTTACTAACGTCTATGCCGACAGTTTTGTAATAAGAGGAGACGAGGTACGGCAAATCGCACCGGGGCAAACTGGAAAAATTGCGGATTATAACTACAAGCTTCCGGACGATTTTACGGGTTGTGTGATAGCATGGAACTCGAATAACTTAGACAGCAAGGTCGGTGGCAACTACAACTACCTTTATAGGTTGTTTCGGAAATCAAATTTAAAGCCATTCGAGAGAGACATAAGTACGGAGATATACCAAGCCGGTAGTACACCCTGTAATGGTGTTGAAGGGTTCAATTGCTATTTCCCGTTGCAGTCGTATGGTTTTCAACCAACAAACGGTGTTGGATATCAGCCGTACCGGGTGGTTGTTCTATCCTTCGAGCTCCTACACGCCCCAGCTACGGTCTGTGGTCCAAAGAAGTCGACAAACCTAGTCAAGAATAAATGTGTTAACTTT。
[0009]所述SEQ ID No.2的序列如下：
[0010]RVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNF。
[0011]在本专利技术的一个实施例中，所述S
‑
RBD将新型冠状病毒S蛋白的RBD序列连接到载体上，5
’
端加入序列及信号肽序列，3
’
端加入6个组氨酸(His
‑
tag)的编码序列，构建好的表达载体通过质粒大量提取获得高纯度质粒，形成新型冠状病毒S
‑
RBD蛋白。
[0012]在本专利技术的一个实施例中，所述新型冠状病毒S
‑
RBD蛋白的制备方法，具体包括以下步骤，
[0013](1)将新型冠状病毒S蛋白的RBD序列连接到载体上，5
’
端加入序列及信号肽序列，3
’
端加入6个组氨酸(His
‑
tag)的编码序列和翻译终止密码子；
[0014](2)构建好的表达载体通过质粒提取获得高纯度质粒，将质粒瞬时转染悬浮细胞HEK293F细胞，于4
‑
6天收集细胞培养液的上清液；将所有的细胞上清液混合后通过滤膜过滤，除去细胞碎片，得到滤过液；
[0015](3)使用镍离子亲和层析纯化细胞上清液，以含20mM咪唑的咪唑缓冲液洗涤亲和柱，以除去非特异结合蛋白，然后本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，包括卡壳、位于所述卡壳内的试纸条；所述试纸条包括PVC底板、吸水垫、反应膜、结合垫和样品垫，其特征在于，所述结合垫上负载有胶体金标记的羊抗鼠IgG抗体和检测抗原；所述反应膜上设有检测线和质控线；所述检测线靠近所述结合垫一侧，所述质控线靠近所述吸水垫一侧；所述检测线上包被有捕获抗原，所述质控线上包被有质控物；所述捕获抗原和检测抗原均为S
‑
RBD蛋白；编码所述S
‑
RBD蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述S
‑
RBD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。2.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，其特征在于，所述反应膜设置于所述PVC底板中部位置，所述吸水垫设置于所述PVC底板一端并叠压搭接在所述反应膜的一端上，所述结合垫设置于所述PVC底板另一端并叠压搭接在所述反应膜的另一端上，所述样品垫挨着结合垫设置于所述PVC底板上并叠压搭接在所述结合垫上。3.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，其特征在于，所述捕获抗原的划膜浓度为0.5
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1.5mg/mL；所述检测抗原的金标浓度为0.1
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0.3mg/mL。4.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，其特征在于，所述质控物为羊抗鼠IgG抗体。5.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，其特征在于，所述反应膜的制备方法包括以下步骤，将羊抗鼠...

【专利技术属性】
技术研发人员：胥传来，叶丽雅，匡华，徐丽广，孙茂忠，吴晓玲，刘丽强，马伟，朱建平，郝昌龙，宋珊珊，胡拥明，吴爱红，郭玲玲，胥欣欣，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：