一种新冠总抗体和中和抗体乳胶快速检测试纸及制备方法技术

本发明专利技术提供了一种新型冠状病毒总抗体和中和抗体乳胶快速检测试纸及其制备方法和应用。本发明专利技术的试纸由包括固相有鼠抗人IgG/IgM抗体检测线T1、基因重组新型冠状病毒ACE2蛋白检测线T2和质控线的的层析膜，预先喷涂有不同颜色微球偶联的基因重组新型冠状病毒刺突蛋白RBD

【技术实现步骤摘要】
一种新冠总抗体和中和抗体乳胶快速检测试纸及制备方法


[0001]本专利技术属于检验医学体外检测
，具体涉及一种新型冠状病毒总抗体和中和抗体乳胶法快速检测试纸及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]当新冠病毒浸入人体后，人体在与病毒对抗的后期产生了可以特异性中和病毒的抗体，这种抗体属于IgG这个抗体类别(其他类别比如IgM抗体，是在早期产生的、用来应急的，特异性不强的抗体)，且特异性的是被病毒表面表面RBD蛋白，故被称为RBD抗体。
[0003]RBD是新型冠状病毒颗粒外壳表面的刺突蛋白(spike)的受体结合区上的一个区域，是病毒的特异性所在。中和抗体检测一般用于新型冠状病毒感染康复者、新型冠状病毒疫苗免疫者的样本中的总中和抗体，包括IgA、IgM和IgG。

技术实现思路

[0004]本专利技术主要目的在于提供一种总抗体和中和抗体联合检测试剂盒。要解决的技术问题在于用户接种疫苗后需要检测自己的中和抗体，出现非特异性的结果。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了一种通过捕获法判断样本中是否针对新型冠状病毒的IgG/IgM抗体，结合夹心法进行确认是否有含有新型冠状病毒中和抗体
[0006]一方面，本申请提供了一种新型冠状病毒总抗体和中和抗体乳胶快速检测试纸，所述试纸包含层析膜、缓冲垫、结合垫；所述结合垫上预先吸附有稀释的彩色微球偶联的蛋白结合物，所述层析膜上沿液体层析方向依次设有检测线T和质控线C，同时在层析膜2和结合垫4之间有缓冲垫。
[0007]进一步地，检测线为T1和T2线，其中T1线为鼠抗人IgG和IgM混合包被线，T2线为基因重组新型冠状病毒SARS
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COV2
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RBD
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HIS包被线。
[0008]进一步地，质控线的包被物为羊抗兔IgG抗体、羊抗鼠IgG抗体。
[0009]进一步地，结合垫的一端喷涂有蓝色微球偶联的基因重组新型冠状病毒SARS
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COV2
‑
RBD
‑
mFC。
[0010]进一步地，缓冲垫3为滤血膜或玻璃纤维。
[0011]进一步地，检测线和质控线对应的彩色微球颜色不同，可以为蓝色、红色、黑色。
[0012]进一步地，T1线的包被原料使用含有1
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5％蔗糖的磷酸盐缓冲液稀释浓度值0.5
‑
1mg/mL；T2线的包被原料使用含有0.3
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0.6％牛血清白蛋白的0.05M MES缓冲液稀释；质控线C的包被原料使用含有0.3
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0.6％牛血清白蛋白的PH8.0 Tris
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盐酸缓冲液稀释。
[0013]进一步地，彩色微球偶联步骤包括：
[0014]使用0.05M PH6.0
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6.5MES溶液作为反应缓冲液，对微球进行清洗后，稀释至浓度为1％；采用常规的EDC
‑
NHS二步法进行活化，加入标记原料按照每毫克微球80
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160微克的比例加入，反应3
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4小时后，加入乙醇胺进行终止，经10000rpm离心，弃上清，留沉淀，使用含有0.5
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1％诺蛋白、0.1
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1％PVP K30、0.5
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1％PEG6000的0.1M PH8.0的Tris
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盐酸缓冲液稀
释至需要浓度。
[0015]另一方面，本申请提供了上述快速检测试纸在制备新冠抗体检测试剂盒或新冠疫苗效果检测试剂盒中的应用。
[0016]所述层析膜2上沿着样本流动的方向，依次鼠抗人IgG抗体/鼠抗人IgM抗体(T1线)、喷涂有SARS
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COV2
‑
RBD
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HIS(T2线)和羊抗兔IgG抗体(质控线)。
[0017]所述结合垫4喷涂有蓝色乳胶偶联的SARS
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COV2
‑
RBD
‑
mFC和红色乳胶偶联的兔IgG抗体。
[0018]所述mFc标签可以为其他带有氨基的基因重组标签。
[0019]所述的层析膜2和结合垫4使用的质控线系统只要不影响检测线体系，不带入非特异性都可以使用，包括兔血清和羊抗兔血清、鼠血清和羊抗鼠血清，以及其它DNP
‑
BSA和兔抗DNP抗体。
[0020]所述的缓冲垫3可以对样本进行聚集，减少样本通过层析膜2的时间，能够确保在结果判断时间内结果的稳定性。
[0021]本专利技术产品测试时，在样品垫上依次加入待测血液样本和样本稀释液。若样本中含有新型冠状病毒中和抗体，则分别与结合垫上蓝色微球偶联的SARS
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COV2
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RBD
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mFC结合，形成中和抗体
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RBD蛋白复合物。该复合物沿着试纸条向前移动，依次经过T1线、T2线和质控线。其中，中和抗体
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蓝色微球标记RBD被T1线包被的鼠抗人IgG和IgM抗体捕获，形成一条蓝色T1线，剩余的中和抗体
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RBD复合物经过T2线时，该复合物被T2线固相的RBD捕获，同时形成一条蓝色线条。红色乳胶标记的兔IgG抗体被质控线上包被的羊抗兔IgG抗体结合，形成一条红色线条。
附图说明
[0022]图1为本专利技术实施例1中所提供试纸条的结构示意图；其中1为吸收垫、2为层析膜(2a
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质控线、2b
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检测线T2、2c
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检测线T1)、3为阻挡垫、4为结合垫、5为样品垫、6为粘贴板(表面有胶粘剂，正常情况下使用离型纸覆盖)。
具体实施方式
[0023]实施例1试纸条的制备
[0024]按照以下方法制备图1所示结构的试纸条
[0025]1.层析膜
[0026]1.1硝酸纤维素膜
[0027]本产品使用汕头伊能膜业有限公司生产的YN
‑
80背衬膜。选择的膜宽度应为2.2厘米。
[0028]2.2主要原料
[0029]分别使用不同的稀释液对检测线和质控线的包被原料进行稀释，其中T1线为鼠抗人IgG和IgM，使用含有4％蔗糖的磷酸盐缓冲液稀释浓度值0.60mg/mL；检测线T2为RBD
‑
HIS，使用含有0.50％牛血清白蛋白的MES缓冲液稀释(0.05M)浓度值为0.80mg/mL；质控线为羊抗兔IgG抗体，使用含有0.50％牛血清白蛋白的Tris
‑
盐酸(PH8.0)缓冲液稀释浓度值为1.0mg/mL。
[0030]2.3包被操作
[0031]对包被机的喷液量进行设定，一般为0.085μl/mm至0.120μl/mm，导轨速度60mm/s，进行包被。
[0032]包被好的硝酸纤维素反应膜本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒总抗体和中和抗体乳胶快速检测试纸，其特征在于：所述试纸包含层析膜、缓冲垫、结合垫；所述结合垫上预先吸附有稀释的彩色微球偶联的蛋白结合物，所述层析膜上沿液体层析方向依次设有检测线T和质控线C，同时在层析膜2和结合垫4之间有缓冲垫。2.根据权利要求1所述的快速检测试纸，其中检测线为T1和T2线，其中T1线为鼠抗人IgG和IgM混合包被线，T2线为基因重组新型冠状病毒SARS
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COV2
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RBD
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HIS包被线。3.根据权利要求1或2所述的快速检测试纸，其中质控线的包被物为羊抗兔IgG抗体、羊抗鼠IgG抗体。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的快速检测试纸，其中结合垫的一端喷涂有蓝色微球偶联的基因重组新型冠状病毒SARS
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COV2
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RBD
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mFC。5.根据权利要求4所述的快速检测试纸，其中结合垫的另一端喷涂有红色乳胶偶联的兔IgG抗体。6.根据权利要求1
‑
5任一项所述的快速检测试纸，其中缓冲垫为滤血膜或玻璃纤维。7.根据权利要求1
‑
6任一项所述的快速检测试纸，检测线和质控线对应的彩色微球颜色不同，微球颜色可选蓝色、红色、黑色。8.根据权利要求2
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7任一项所述的快速检测试纸，其中T...

【专利技术属性】
技术研发人员：高克谨，林朝琨，
申请(专利权)人：润和生物医药科技汕头有限公司，
类型：发明
国别省市：