一种流感病毒A型和B型量子点联检试纸条及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及医学检验技术领域，尤其涉及一种流感病毒A型和B型量子点联检试纸条及其制备方法和应用。本发明专利技术公开了一种以量子点为标记物，可同时检测流感病毒A型和B型的联检试纸条及其制备方法和应用，所述联检试纸条包括底板，以及在所述底板上从左往右依次搭接的样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫上包被有量子点标记的流感病毒A型检测抗体和量子点标记的流感病毒B型检测抗体。本发明专利技术以量子点作为标记物，易于与抗体分子偶联，激发后荧光强度高，稳定性强不易衰减，故检测具有更高的灵敏度，便于流感病毒感染的早期筛查。联检试纸条与免疫层析技术相结合可制备成条状结构，配合手持式激发器，适用于现场筛查及床旁检测。床旁检测。床旁检测。

【技术实现步骤摘要】
一种流感病毒A型和B型量子点联检试纸条及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及医学检验
，尤其涉及一种流感病毒A型和B型量子点联检试纸条及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]流行性感冒病毒(Influenza virus)，简称流感病毒，是引起流行性感冒(Influenza)的主要病原体。该病毒属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，进一步基于其NP(核糖核蛋白)和MP(基质蛋白)的抗原性的不同分为甲(A)，乙(B)，丙(C)，丁(D)四型(mBio.2014；5(2):e00031
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14；JVirol.2015；89(2):1036
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42)。流感病毒感染后的临床症状有，急性高热、全身疼痛、显著乏力和呼吸道症状等。其传播主要通过空气中的飞沫、易感者与感染者之间的接触，或与被污染物品的接触而传播，秋冬季节高发。由于其基因结构、病毒体结构、抗原变异种类和主要感染群体等不同，感染后机体的严重程度都各有不同。人的流感主要是A型和B型流感病毒引起。A型流感病毒最为常见，也容易造成大规模性传染。B型病毒相对只在地区流行，而C型病毒由于抗原性非常稳定所以不太容易广泛传播，它的症状很轻。A型流感病毒常发生抗原的变异，进一步分为H1N1、H3N2、H5N1、H7N9等亚型(其中的H和N分别代表流感病毒两种表面糖蛋白)。因此，临床上，病原体的检测，常以检测A和B型流感病毒为主。
[0003]流感的确诊有赖于实验室检出流感病毒或其特异性抗体，流感病毒的检测方法包括病毒核酸的检测、病毒的培养分离、病毒特异抗原检测，以及血清学检测病毒特异抗体。前2种均是基于呼吸道标本(鼻、咽拭子、痰、鼻咽或气管吸取物)进行病毒检测；后2种则是通过免疫学检查，间接证明病毒感染。近年，已经开发了多种呼吸道病原体的联合检测平台，但技术平台需要特殊仪器设备和专业人员进行操作，且耗时相对较长，成本较高，难以适用于大规模，以及基层现场的筛查。POCT，即时检验(point
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of
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care testing)，指在病人旁边进行的临床检测及床边检测(bedside testing)，已广泛应用于临床标本的检测中，其中，目前最主流的技术是，以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应的检测技术，但胶体金示踪技术的敏感性较低，广受行业诟病，特别是疾病早期病原体数量较低的情况下，存在漏检的风险。
[0004]近年来，以量子点(quantum dot)为代表的新型示踪物，指半径小于或接近激子波尔半径的半导体纳米晶体，其荧光发射波长具有尺寸大小的依赖性，科研人员可通过调整其粒径的大小，进而获得具有不同发射波长的特殊量子点；同时，量子点的激发光谱较宽，用一种激发波长可激发多种具有不同发射波长的量子点；并且，量子点的荧光半峰宽窄，可减少不同的荧光发射光谱之间的重叠干扰；更为重要的是，量子点的荧光稳定性非常好，与生物分子(蛋白、抗体、核酸等)偶联后，其可以作为一种新型的检测探针，常用于POCT等。近年来，以量子点为示踪物的免疫层析技术，制备成条状结构，可制成POCT产品。现场应用时，用紫外线灯光或者专用的设备光源照射激发后，肉眼可见反应条带，用特殊仪器可定量检
测其强度，该类POCT具有结构简单、灵敏度高、检测快速，以及使用方便等特点，在大规模筛查或基层现场，应用前景广阔。但目前，尚未见基于量子点标记联合检测流感病毒A型和B型抗原的相关产品。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种流感病毒A型和B型量子点联检试纸条及其制备方法和应用。
[0006]本专利技术旨在提供一种流感病毒A型和B型量子点联检试纸条及其制备方法和应用，该试纸条可对流感病毒A型和B型抗原进行联合检测，还可提高流感病毒检测的灵敏度和稳定性，同时成本低，操作简便，所用操作时间短的试剂盒，使其更适用于现场筛查及床旁检测。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下解决方案：提供一种流感病毒A型和B型量子点联检试纸条，包括底板，以及在所述底板上从左往右依次搭接的样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫上包被有量子点标记的流感病毒A型检测抗体和量子点标记的流感病毒B型检测抗体。
[0008]进一步地，所述硝酸纤维素膜设置有第一检测线、第二检测线和质控线，所述第一检测线上包被有小鼠或兔流感病毒A型捕获单克隆抗体；所述第二检测线上包被有小鼠或兔流感病毒B型捕获单克隆抗体；所述质控线上包被有抗鼠多克隆抗体或抗兔多克隆抗体。
[0009]进一步地，所述流感病毒A型检测抗体为小鼠或兔流感病毒A型单克隆抗体；所述流感病毒B型检测抗体为小鼠或兔抗流感病毒B型单克隆抗体。
[0010]进一步地，所述量子点为羧基水溶性量子点，粒径8nm
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20nm，最大发射波长在600
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630nm，激发波长450nm。
[0011]进一步地，所述量子点标记的流感病毒A型检测抗体和量子点标记的流感病毒B型检测抗体采用量子点复溶液稀释后再按一定比例混合后包被到结合垫上。
[0012]进一步地，所述量子点复溶液为含有含松三糖1
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12wt％、氨基乙酸0.15
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1.2wt％、硫酸庆大霉素0.05
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1.5wt％、肉桂醛0.02
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1.2wt％和TritonX
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1000.05
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0.15wt％的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液浓度为0.01
‑
0.05M，pH 7.0
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7.3。
[0013]进一步地，所述样本垫经样本垫处理液处理后，烘干制得；所述样本垫处理液为PVP10(聚乙烯吡咯烷酮)0.05
‑
1.5wt％、聚乙二醇
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3000.8
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3.2wt％、TritonX
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1000.5
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2.6wt％和2
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羟基乙胺0.3
‑
2.6wt％的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液浓度为0.01
‑
0.05M，pH 7.0
‑
7.3。
[0014]本专利技术另一目的在于提供一种制备所述的流感病毒A型和B型量子点联检试纸条的方法，包括以下步骤：
[0015]S1.将所述样本垫采用样本处理液处理，烘干；
[0016]S2.将流感病毒A型检测抗体和流感病毒B型检测抗体以共价偶联的方式偶联到量子点上；将上述量子点采用量子点复溶液稀释后包被到结合垫上；
[0017]S3.使用抗体稀释缓冲液将流感病毒A型捕获抗体、流感病毒B型捕获抗体以及羊抗鼠或兔IgG抗体稀释后分别包被到硝酸纤维素膜的第一检测线、第二检测线和质控线上；
[0018]S4.在底板上从左往右依次相互交错地贴上样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种流感病毒A型和B型量子点联检试纸条，其特征在于，包括底板，以及在所述底板上从左往右依次搭接的样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫上包被有被量子点标记的流感病毒A型检测抗体和被量子点标记的流感病毒B型检测抗体。2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜设置有第一检测线、第二检测线和质控线，所述第一检测线上包被有流感病毒A型捕获抗体，所述第二检测线上包被有流感病毒B型捕获抗体；所述质控线上包被有羊抗鼠或兔IgG。3.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述量子点为羧基水溶性量子点或聚乙二醇功能化水溶性量子点，粒径为8nm
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20nm，最大发射波长为600
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630nm，激发波长为450nm。4.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述被量子点标记的流感病毒A型检测抗体和被量子点标记的流感病毒B型检测抗体采用量子点复溶液稀释后再按一定比例混合后包被到结合垫上。5.如权利要求4所述的试纸条，其特征在于，所述量子点复溶液包括：松三糖1
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12wt％、氨基乙酸0.15
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1.2wt％、硫酸庆大霉素0.05
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1.5wt％、肉桂醛0.02
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1.2wt％和TritonX
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100 0.05
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0.15wt％的磷酸盐缓冲液。6.如权利要求5所述的试纸条，其特征在于，所述样本垫经样本垫处理液处理后，烘干制得。7.如权利要求6所述的试纸条，其特征在于，所述样本垫处理液包括：聚乙烯吡咯烷酮0.05
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【专利技术属性】
技术研发人员：潘庆军，廖淑珍，吴晗，沈康远，汪书婷，
申请(专利权)人：广东医科大学附属医院，
类型：发明
国别省市：