一种山茱萸多种成分的提取分离纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种山茱萸多种成分的提取分离纯化方法，涉及制药技术领域，本发明专利技术所述提取分离纯化方法先将山茱萸粉与水进行搅拌提取、离心甩滤得到粗滤液，再错流过滤得到精滤液；以大孔吸附树脂对精滤液吸附，先以亲水性有机溶剂的水溶液梯度洗涤和洗脱，收集合有莫诺苷的第一洗脱液；再继续提高亲水性有机溶剂的水溶液浓度进行梯度洗脱，收集含有马钱苷的第二洗脱液；将第一洗脱液和第二洗脱液分别富集、干燥，即得莫诺苷和马钱苷。本发明专利技术所述方法不加热或极少加热，有效减少能源消耗，显著降低生产成本。利用本发明专利技术所述方法能够同时分离得到纯度高、提取率高的莫诺苷和马钱苷，简便快捷，可有效降低劳动强度，减少安全风险。

【技术实现步骤摘要】
一种山茱萸多种成分的提取分离纯化方法
本专利技术涉及制药
，尤其涉及一种山茱萸多种成分的提取分离纯化方法。
技术介绍
中药山茱萸(Fructuscorni)为山茱萸科植物山茱萸(CornusofficinalisSieb.etZucc.)的干燥成熟果肉，别名蜀枣、鼠矢、鸡足、山英肉、实枣儿、枣皮、英肉等。山茱萸是中医临床常用的名贵传统中药之一，始载于《神农本草经》，并被其列为中品。山茱萸性酸、涩，微温，归肝、肾经，补益肝肾、收敛固涩，用于治疗腰膝酸软、头晕耳鸣、遗精遗尿、崩漏、大汗不止等症。山茱萸的主要成分有环稀醚萜、三萜、鞣质、黄酮、有机酸、多糖、挥发性成分等，其中环烯醚萜苷类是山茱萸中主要活性成分之一。山茱萸中环稀醚萜类的活性成分主要是马钱苷和莫诺苷，其中马钱苷在2005版《中国药典》开始正式作为山茱萸的质量指标之一。马钱苷作为其主要活性成分近年来被广泛研究，有研究表明，马钱苷能促进Bcl-2蛋白表达，抑制Bax蛋白表达和Caspase-3酶活性，具有促进心肌细胞增殖、抑制心肌细胞凋亡、保护心肌细胞的作用。马艳霞等研究发现，马钱苷可以提高胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(bF-GF)的分泌，启动并激活下游的MEK/ERK信号转导通路，进一步激活下游转录因子入核调节相关基因的转录，修复神经元，发挥神经保护作用。此外，马钱苷还有抑制黑色素[6]、降血糖的作用。马钱苷在水中极易溶解，较少溶于95％乙醇，微溶于无水乙醇，几乎不溶于乙醚、乙酸乙酯、丙酮和氯仿。提取方法通常考虑固液比、溶剂、提取次数和时间，也有用超声提取、纤维素酶酶解提取；分离纯化有用大孔树脂、正向硅胶柱、反响硅胶柱、聚酰胺柱、凝胶柱、中压或高压制备色谱等。现有技术的不足主要在3个方面：(1)现有提取方法多用50℃低温提取2～3次，每次1～3小时，提取液或纯化液多用热浓缩，耗费大量能源，人称中药制药是“煤老虎”，排出大量二氧化碳和酸性气体；(2)提取多用有机溶液或溶剂热提取，然后浓缩水沉，此举不仅耗费大量有机溶剂，增加成本，而且增加安全风险；(3)纯化多是多柱联用，多管齐下，每种方法都没有用到极致，致使工艺繁杂冗长，生产周期较长。
技术实现思路
本专利技术为了克服现有山茱萸有效成分提取方法的各种缺陷，提供了一种山茱萸多种成分的提取分离纯化方法，是一种绿色化、智能化、数字化的制备工艺，操作简便快捷，产品质量稳定可控，节能减排，高收率，高质量，低成本，适合中药工业化生产。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种山茱萸多种成分的提取分离纯化方法，包括以下步骤：(1)将山茱萸粉与水混合，25～45℃下搅拌提取3次，离心甩滤，合并3次提取的滤液，得到粗滤液；(2)将粗滤液静置1～3h后经错流过滤，得到精滤液；(3)以大孔吸附树脂柱对精滤液进行吸附，以体积浓度0～30％的亲水性有机溶剂的水溶液对大孔树脂进行梯度洗脱，收集莫诺苷的纯度≥98％的区间洗脱液，为莫诺苷稀洗脱液；以体积浓度30～50％亲水性有机溶剂的水溶液为洗脱液梯度洗脱，收集马钱苷纯度≥98.5％的区间洗脱液，为马钱苷稀洗脱液；(4)分别对莫诺苷稀洗脱液和马钱苷稀洗脱液进行富集、干燥，分别得到莫诺苷和马钱苷。优选的，步骤(1)中，第一次提取时的料液比为1∶6～9，第二次提取、第三次提取时的料液比独立的为1∶4～6。优选的，所述搅拌提取的时间为5～10min。优选的，步骤(3)中，所述大孔吸附树脂独立地选自D101型大孔吸附树脂、D301型大孔吸附树脂、FL-2型大孔吸附树脂、SP-3型大孔吸附树脂或SP-7型大孔吸附树脂。优选的，步骤(3)中，所述大孔吸附树脂为FL-2或SP-3型大孔吸附树脂。优选的，步骤(3)中，所述亲水性有机溶剂选自乙醇、甲醇、有机酸酯类或卤代烃类。优选的，步骤(4)中，所述富集的方法为大孔吸附树脂富集或纳滤。优选的，步骤(4)中，所述干燥为喷雾干燥或冷冻干燥。优选的，所述喷雾干燥为负压喷雾干燥，所属负压喷雾干燥的条件包括：进风温度95～105℃，喷头转速250～300Hz，进料速度15～30rp/min。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种山茱萸多种成分的提取分离纯化方法，将山茱萸粉与水混合，在25～45℃下充分搅拌提取3次，离心甩滤得到粗滤液，再进行错流过滤，得到精滤液；以大孔吸附树脂柱对精滤液进行吸附，先以亲水性有机溶剂的水溶液作为洗脱剂梯度洗脱，收集含有符合要求的区间莫诺苷洗脱液；再继续提高亲水性有机溶剂的水溶液进行梯度洗脱，收集含有符合要求的区间马钱苷洗脱液；将莫诺苷洗脱液和马钱苷洗脱液分别富集、干燥，即得莫诺苷和马钱苷。本专利技术所述提取分离纯化方法及稀溶液富集都不加热或极少加热，大量减少能源消耗，大量减少二氧化碳和酸性气体排放，显著降低生产成本。利用本专利技术所述方法能够同时分离得到纯度高、提取率高的莫诺苷和马钱苷，简便快捷，可有效降低劳动强度，绿色环保，减少安全风险。附图说明图1为实施例1中精滤液的HPLC图；图2为实施例1制备得到的莫诺苷的HPLC图；图3为实施例1中莫诺苷对照品的HPLC图；图4为实施例1制备得到的马钱苷的HPLC图；图5为实施例1中马钱苷对照品的HPLC图。具体实施方式本专利技术提供了一种山茱萸多种成分的提取分离纯化方法，包括以下步骤：(1)将山茱萸粉与水混合，25～45℃下搅拌提取3次，离心甩滤，合并3次提取的滤液，得到粗滤液；(2)将粗滤液静置1～3h后经错流过滤，得到精滤液；(3)以大孔吸附树脂柱对精滤液进行吸附，以体积浓度0～30％的亲水性有机溶剂的水溶液对大孔树脂进行梯度洗脱，收集莫诺苷的纯度≥98％的区间洗脱液，为莫诺苷稀洗脱液；以体积浓度30～50％亲水性有机溶剂的水溶液为洗脱液梯度洗脱，收集马钱苷纯度≥98.5％的区间洗脱液，为马钱苷稀洗脱液；(4)分别对莫诺苷稀溶液和马钱苷稀稀溶液进行富集、干燥，分别得到莫诺苷和马钱苷。本专利技术将山茱萸粉与水混合，25～45℃下搅拌提取3次，离心甩滤，合并3次提取的滤液，得到粗滤液。本专利技术采用多次低温(25～45℃)充分搅拌提取的方式，在满足尽可能提取有效物质的基础上降低能源消耗，减少加热步骤，节能减排。在本专利技术中，所述山茱萸在与水混合前进行粉碎是为了实现充分提取，因为山茱萸为坚果，不进行粉碎的情况下难以通过搅拌实现充分、快速提取。在本专利技术中，所述山茱萸细粉或中粉与水混合的质量比优选为1∶5～9，25～45℃下进行第一次充分搅拌提取，离心甩滤，得到滤渣1和滤液1。在本专利技术中，所述山茱萸粉与水混合的质量比优选为1∶7～8。在本专利技术中，所述第一次搅拌提取的时间优选为12min，更优选为10min；第一次搅拌提取的搅拌速率优选为50～70rpm，更优选为60rpm本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种山茱萸多种成分的提取分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将山茱萸粉与水混合，25～45℃下搅拌提取3次，离心甩滤，合并3次提取的滤液，得到粗滤液；/n(2)将粗滤液静置1～3h后经错流过滤，得到精滤液；/n(3)以大孔吸附树脂柱对精滤液进行吸附，以体积浓度0～30％的亲水性有机溶剂的水溶液对大孔树脂进行梯度洗脱，收集莫诺苷的纯度≥98％的区间洗脱液，为莫诺苷稀洗脱液；以体积浓度30～50％亲水性有机溶剂的水溶液为洗脱液梯度洗脱，收集马钱苷纯度≥98.5％的区间洗脱液，为马钱苷稀洗脱液；/n(4)分别对莫诺苷稀洗脱液和马钱苷稀洗脱液进行富集、干燥，分别得到莫诺苷和马钱苷。/n

【技术特征摘要】
1.一种山茱萸多种成分的提取分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将山茱萸粉与水混合，25～45℃下搅拌提取3次，离心甩滤，合并3次提取的滤液，得到粗滤液；
(2)将粗滤液静置1～3h后经错流过滤，得到精滤液；
(3)以大孔吸附树脂柱对精滤液进行吸附，以体积浓度0～30％的亲水性有机溶剂的水溶液对大孔树脂进行梯度洗脱，收集莫诺苷的纯度≥98％的区间洗脱液，为莫诺苷稀洗脱液；以体积浓度30～50％亲水性有机溶剂的水溶液为洗脱液梯度洗脱，收集马钱苷纯度≥98.5％的区间洗脱液，为马钱苷稀洗脱液；
(4)分别对莫诺苷稀洗脱液和马钱苷稀洗脱液进行富集、干燥，分别得到莫诺苷和马钱苷。


2.根据权利要求1所述的提取分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，第一次提取时的料液比为1∶6～9，第二次提取、第三次提取时的料液比独立的为1∶4～6。
搅拌提取得到滤渣1和滤液1；将滤渣1与水按照质量比1∶4～6混合，进行第二次提取，得到滤渣2和滤液2；将滤渣2与水按照质量比1∶4～6混合，进行第三次提取，得到滤渣3和滤液3；合并滤液1、滤液2和滤液3，得到粗滤液。


3.根据权利要求1或2所述的提...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱子凡，邢宸，乔鑫，吴祖栋，杨丽，丁宗堃，邢为藩，
申请(专利权)人：南京宸翔医药研究有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32