一种高纯度胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法及其质量控制技术技术

本发明专利技术公开了一种高纯度胡椒酚β‑D‑吡喃葡萄糖苷的制备方法及其质量控制技术，是以棒柄花的干燥叶为原料提取胡椒酚β‑D‑吡喃葡萄糖苷，包括乙醇回流提取、过滤浓缩、萃取、上柱、洗脱，再浓缩等工艺步骤，最后得到纯度大于98%的高纯度胡椒酚β‑D‑吡喃葡萄糖苷；本发明专利技术工艺设计合理，工艺简单，分离速度快，生产周期短，所得产品纯度高，质量可控，适合工业化生产，具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法及其质量控制技术
本专利技术涉及化合物制备
，具体是一种高纯度胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法及其质量控制技术。
技术介绍
化学对照品又称标准品，是中药质量标准研究、质量检测和质量控制的实物对照，中药化学对照品的研究，是中药标准化、现代化研究的一个非常重要的部分，对产品的质量评价，特别是在药品生产的质量控制中，中药化学对照品起着极其重大的作用，是中药质量控制的基础与核心。胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷是一种苯丙素类化学成分，是棒柄花等植物的活性成分之一，存在于大戟科、松科、姜科等多种植物中，可作为许多植物、药材和药品标准质量控制的指标性成分。目前无相应的国家药品标准物质，国内外对胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷中药化学对照品的系统研究未见报道，参照中药化学对照品（供含量测定用）的技术要求，对胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷化学对照品进行研究，建立胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷化学对照品的批量提取工艺、纯度与含量以及杂质检查的分析测定方法，从而建立胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷化学对照品的技术标准，为其作为中药化学对照品以及药材和制剂的质量标准研究提供科学基础和保证。胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷是从大戟科植物棒柄花中分离得到的活性物质，从公开文献所知，胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷的提取分离过程和含量测定方法，如：1.【题名】棒柄花的化学成分研究（英文）：干燥植物全株（8.0kg）用95%乙醇10L室温浸提4次，每2天提取一次。合并提取液，真空浓缩。提取物用水混悬，用乙酸乙酯（5L×3）、正丁醇（5L×3）依次萃取。正丁醇部位（60.0g）经硅胶柱色谱（1kg,100～200目）分离，氯仿-甲醇（30:1-0:1）梯度洗脱，得到15个流份，流份1-3经硅胶柱色谱分离，氯仿-丙酮（10:1-0:1）梯度洗脱得到胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷（56mg）。（文献来源：李翠红,周红娇,羊晓东,赵静锋,李良.棒柄花的化学成分研究(英文)[J].天然产物研究与开发,2004(06):514-515.）。2.【题名】Anti-inflammatoryEllagitanninsfromCleidionbrevipetiolatumfortheTreatmentofRheumatoidArthritis：棒柄花干燥枝叶（15kg）用60L乙醇于70°C提取3次，每次2h，得到粗提物（940g）。粗提物混悬于4L水中，然后依次用等体积的正己烷、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取分比萃取3次。乙酸乙酯萃取物经柱色谱（ODS,50μm），甲醇-水系统梯度洗脱（20%→40→60%→80%→100%），得到5个流份（A-E）。流份B（21.4g）经半制备液相色谱纯化，40%甲醇-水系统洗脱，得到胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷（9.0mg，tR32.2min）。（文献来源：MinZhao,XueYuan,Ying-HePei,etal.Anti-inflammatoryEllagitanninsfromCleidionbrevipetiolatumfortheTreatmentofRheumatoidArthritis.J.Nat.Prod.，2019，doi:10.1021/acs.jnatprod.8b00984.）。3.【题名】Isolationandstructuralelucidationofsomeglycosidesfromtherhizomesofsmallergalanga（AlpiniaofficinarumHance）：新鲜高良姜根茎（4.0kg）粉碎均匀，加入甲醇，用热甲醇连续提取3次，每次3h。回收溶剂，甲醇提取物（260g）经大孔吸附树脂（安伯来特XAD-2）柱（20×6.0cm）分离。色谱柱用3L蒸馏水冲洗，除去糖、酸及其他水溶性成分。然后用3L甲醇洗脱。甲醇洗脱液真空浓缩干燥。洗脱物（40g）溶解混悬于250mL水中，氯仿萃取3次，每次400mL。水层冻干得到糖苷结合流份（30g）。该流份经反相硅胶（ODS-A120-S150，YMC有限公司，东京，日本））柱色谱（18×4.0cm）分离，甲醇-水梯度洗脱（10,20,30,40,50,100%;每个梯度900mL）。流份经薄层色谱（TLC）检识，硅胶G60薄层板，0.25mm厚度（默克,达姆施塔特,德国），氯仿/甲醇/水（65:25:4,v/v）展开，喷以香草醛浓硫酸加热显色。2个主要流份，20%甲醇洗脱物（1.16g）和30%甲醇洗脱物（2.17g），经硅胶（BW-820MH,70-200目，富士硅化学株式会社，春日井，日本）柱色谱（18×3.4cm）进一步分离，氯仿-甲醇系统梯度洗脱（甲醇浓度逐渐增加）。流份经同样的薄层色谱检识方式合并得到5个流份（I-V）。流份I（320mg）从20%甲醇洗脱物经氯仿-甲醇（90:10,v/v）洗脱得到，流份II-V从30%甲醇洗脱得到:II（90.3mg）氯仿-甲醇（95:5,v/v）洗脱，III（73.5mg）氯仿-甲醇（90:10,v/v）洗脱，IV（69mg）和V（195mg）氯仿-甲醇（80:20,v/v）洗脱。流份I-V经高效液相色谱（HPLC）进一步纯化，色谱柱（250×10mm水相C18柱，YMC有限公司，东京，日本），流份I乙腈/水（15:85,v/v）洗脱，流份II-V乙腈/水（21:79,v/v）流份5.0mL/min，检测波长205nm，得到胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷（33.0mg）。（文献来源：LyT.N.，YamauchiR.，ShimoyamadaM.，etal.Isolationandstructuralelucidationofsomeglycosidesfromtherhizomesofsmallergalanga（AlpiniaofficinarumHance）.J.Agric.FoodChem.2002,50（17）：4919-4924.）。4.【题名】Chavicolβ-D-glucoside,aphenylpropanoidheteroside,benzyl-β-D-glucosideandglycosidicallyboundvolatilesfromsubspeciesofCedronellacanariensis：新鲜地上部分（1200gssp.anisata/2000gssp.canariensis）粉碎，用液氮冻干后（干重：312/518g），用2L甲醇室温提取3次，提取液减压浓缩得到提取物（18.4/31.5g），混悬于100ml水中。悬浮液于4℃放置10h，离心（5min,4000rpm）除去叶绿素。上清液用汽油萃取6次，直到有机相中非挥发性物质能通过气相（GC）检测。红棕色水相减压浓缩，经中性氧化铝柱（默克1077,50×2.5cm）分离，2L水洗脱。80-400ml的洗脱物通过紫外和薄层色谱（TLC）检识（检测:UV，显色剂：茴香醛浓硫酸）。蒸干后残渣（5.3/9.7g）通过中压柱色谱（MPLC）分离（步琪,弗拉维尔，瑞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高纯度胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：/n1）取棒柄花的干燥叶，粉碎，用乙醇回流提取，提取液滤过，合并滤液，回收乙醇，得浸膏；/n2）浸膏用1～1.5倍体积的蒸馏水混悬后，再依次经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，静置，合并正丁醇层，浓缩得正丁醇萃取物；/n3）正丁醇萃取物经硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇系统梯度洗脱，收集含胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷的流分；所述的氯仿-甲醇系统梯度洗脱条件为：0～A分钟，洗脱系统为氯仿-甲醇，比例为95:5；A～B分钟，洗脱系统为氯仿-甲醇，比例为90:10～85:15；所述A为60～120，B为90～200；/n4）流分用薄层色谱法检测后合并，浓缩，即得纯度为重量含量80～90％的胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷粗结晶；/n5）将胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷粗结晶用高效制备液相色谱法分离纯化，收集胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷组分；/n6）对所收集的每一份洗脱液利用HPLC检测，合并保留时间相同而且纯度在90%-98%之间和纯度大于98%的胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷，减压浓缩，得到纯度90%-98%之间以及大于98%的胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷。/n...

【技术特征摘要】
1.一种高纯度胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）取棒柄花的干燥叶，粉碎，用乙醇回流提取，提取液滤过，合并滤液，回收乙醇，得浸膏；
2）浸膏用1～1.5倍体积的蒸馏水混悬后，再依次经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，静置，合并正丁醇层，浓缩得正丁醇萃取物；
3）正丁醇萃取物经硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇系统梯度洗脱，收集含胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷的流分；所述的氯仿-甲醇系统梯度洗脱条件为：0～A分钟，洗脱系统为氯仿-甲醇，比例为95:5；A～B分钟，洗脱系统为氯仿-甲醇，比例为90:10～85:15；所述A为60～120，B为90～200；
4）流分用薄层色谱法检测后合并，浓缩，即得纯度为重量含量80～90％的胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷粗结晶；
5）将胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷粗结晶用高效制备液相色谱法分离纯化，收集胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷组分；
6）对所收集的每一份洗脱液利用HPLC检测，合并保留时间相同而且纯度在90%-98%之间和纯度大于98%的胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷，减压浓缩，得到纯度90%-98%之间以及大于98%的胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷。


2.根据权利要求1所述的高纯度胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：所述步骤1）中乙醇的加入量为药材重量的5～15倍，乙醇浓度为50～75%，回流提取次数为3～5次，每次1～3h。


3.根据权利要求1所述的高纯度胡椒酚β-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法，其特征在于：步骤4）所述的薄层色谱法参数如下：
薄层板：硅胶G；
3种展开剂系统：系统（1）：醋酸乙酯-甲醇体积比为16:1，系统（2）：氯仿-甲醇体积比为5:1，系统（3）：氯仿-丙酮体积比为1：2；
点样：用甲醇制成1mg/mL的溶液，在同一硅胶G板上，按不同的点样量梯度点样，点样量分别为20μg、40μg、60μg、80μg、100μg；置展开缸分别展开，展距：8～10cm；
定位：喷以10%乙醇磷钼酸溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：柴玲，陈明生，刘布鸣，黄艳，袁健童，冯军，
申请(专利权)人：广西壮族自治区中医药研究院，
类型：发明
国别省市：广西;45