从岩白菜中大批量分离化合物的方法及抗氧化性检测方法技术

本发明专利技术涉及中药有效成分的制备方法，具体提供从岩白菜中大批量分离化合物的方法及抗氧化性检测方法。所述从岩白菜中大批量分离化合物的方法包括如下步骤：对岩白菜进行提取，得到提取物，对提取物进行逆流色谱分离，得到单体成分β‑熊果苷、岩白菜素、6‑O‑没食子酰熊果苷、没食子酸、11‑O‑没食子酰岩白菜素、(‑)‑表儿茶素3‑O‑没食子酸酯。解决现有技术中高速逆流色谱法往往一次性分离一个化合物，效率较低，且高速逆流色谱尚未应用于岩白菜的化合物提取分离中的问题。

【技术实现步骤摘要】
从岩白菜中大批量分离化合物的方法及抗氧化性检测方法
本专利技术涉及中药有效成分的制备方法，具体提供从岩白菜中大批量分离化合物的方法及抗氧化性检测方法。
技术介绍
这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然构成现有技术。岩白菜(虎耳草科)是一种多年生草本植物，位于海拔2700-4700米的喜马拉雅地区。在巴基斯坦吉尔吉特地区，该植物已被用作治疗糖尿病的草药。据报道，一种含有岩白菜的草药可治疗痤疮、糖尿病、肥胖症和病毒感染。此外，也有报道称该植物可用于治疗肾结石、伤口等，并且具有抗真菌作用、抗氧化剂、抗菌和免疫调节作用。岩白菜报道的主要化学成分包括岩白菜素或其衍生物萜烯、类黄酮等。高速逆流色谱是近30年发展起来的一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液-液分配色谱分离技术，它避免了固态支持体或载体带来的样品易被死吸附、损耗和变性等各种问题。使用其它液相色谱法进行制备型分离时，其分配效率会显著降低，溶剂消耗量大，高速逆流色谱保证较高峰型分辨度，分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和，节约溶剂。高速逆流色谱能直接进大量粗提样品或合成混合物，分离结果能达到相当高的纯度，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。现有技术中提供了高速逆流色谱对矮地茶等药材进行化合物分离纯化的方法，但专利技术人发现，现有技术中采用高速逆流色谱法往往一次性分离一个化合物，效率较低，且每分离一种化合物，都要重新更换参数，对操作人员要求较高。且现有技术中高速逆流色谱尚未应用于岩白菜的化合物提取分离中。
技术实现思路
针对现有技术中高速逆流色谱法往往一次性分离一个化合物，效率较低，且高速逆流色谱尚未应用于岩白菜的化合物提取分离中的问题，本公开主要提供一种制备成本低于现有技术，操作简便，效率高，可以较大批量从岩白菜中分离制备出纯度大于95％的单体化合物方法。本公开一个或一些实施方式中，提供一种从岩白菜中大批量分离化合物的方法，包括如下步骤：对岩白菜进行提取，得到提取物，对提取物进行逆流色谱分离，得到单体成分β-熊果苷、岩白菜素、6-O-没食子酰熊果苷、没食子酸、11-O-没食子酰岩白菜素和(-)-表儿茶素3-O-没食子酸酯。本公开一个或一些实施方式中，提供一种对岩白菜中分离出的化合物抗氧化性检测方法，用过氧化氢处理待测细胞，分别将上述任一项从岩白菜中大批量分离化合物的方法分离得到的化合物处理待测细胞，分别对H2O2、6种不同单体对处理前后细胞的活性进行检测，从而判断6个单体化合物的抗氧化性。本公开一个或一些实施方式中，提供6-O-没食子酰熊果苷在制备预防或治疗氧化性疾病药物中的应用。本公开一个或一些实施方式中，提供6-O-没食子酰熊果苷在制备预防或治疗氧化性疾病药物中的应用。上述技术方案中的一个或一些技术方案具有如下优点或有益效果：1)本公开采用高速逆流色谱法与紫外色谱结合，根据紫外色谱峰值出料，一次性分离得到六个化合物，大大提高了化合物的分离效率，避免了高速逆流色谱法每次分离都需要更换大量参数，每分离一个化合物都需要重新进料，提高分离效率的同时，还降低了操作难度。2)本公开以岩白菜为原料进行分离，岩白菜廉价易得，分离出的化合物纯度高，应用范围广泛。3)本公开进一步对分离得到的六个，并得出化合物β-熊果苷(1)和6-O-没食子酰熊果苷(3)对细胞活力具有显着的保护作用，6-O-没食子酰熊果苷尤其是在高剂量下对抗H2O2引起的氧化损伤有着非常显著的效果。附图说明构成本公开一部分的说明书附图用来提供对本公开的进一步理解，本公开的示意性实施例及其说明用于解释本公开，并不构成对本公开的不当限定。图1为实施例1、3的研究思路流程图。图2为实施例1岩白菜粗提物的逆流色谱分离图。图3为实施例1岩白菜粗提物与逆流色谱分离单体的高效液相色谱图。图4为实施例3岩白菜粗提物和单体的细胞活力测试图。图5为实施例3岩白菜粗提物和单体的抗氧化测试图。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部实施例。基于本专利技术的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。本公开一个或一些实施方式中，提供一种从岩白菜中大批量分离化合物的方法，包括如下步骤：对岩白菜进行提取，得到提取物，对提取物进行逆流色谱分离，得到单体成分β-熊果苷、岩白菜素、6-O-没食子酰熊果苷、没食子酸(4)、11-O-没食子酰岩白菜素、(-)-表儿茶素3-O-没食子酸酯。优选的，岩白菜得到提取液的操作包括如下步骤：将岩白菜药材浸泡，并用提取溶剂提取，重复多次，合并所有提取液，旋转蒸发至干，得到岩白菜粗品。优选的，所述提取剂为乙醇。进一步优选的，所述乙醇质量分数为80％。优选的，所述提取时间为24h。优选的，重复次数为3次。优选的，在40℃下旋转蒸发。优选的，提取物储存在4℃的冰箱中待用。优选的，逆流色谱分离包括如下步骤：将岩白菜粗品分别溶解于溶剂相的上下两相，采用高速液相色谱仪，将固定相灌满色谱分离柱，设置流动相流速，达到流体力学平衡后进料，根据紫外光谱图接收6个单体组分，最终分离6个单体。优选的，将两相溶剂体系叔丁基甲醚/正丁醇/甲醇/水配制溶剂系统，置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡一段时间后将上下两相分开，取岩白菜粗品，分别溶解于上相和下相中待用。优选的，采用高速逆流色谱仪，首先使进样阀处于进样状态，将固定相用泵以一定流速灌满色谱分离柱，停泵。优选的，开启速度控制器，使高速流色谱仪的色谱分离柱正转，达到一定转速后，设置流动相流速，开始泵流动相，当达到流体动力学平衡后将溶解好的样品用注射器注入逆流色谱仪进样阀中，旋转进样阀为接柱状态，使样品进入色谱分离柱，然后根据检测器紫外光谱图接收6个单体组分，最终分离6个单体。优选的，叔丁基甲醚、正丁醇、甲醇、水的体积比为1:3:1:5。优选的，高速流色谱仪的色谱分离柱正转转速达到800转/min时，再设置流动相流速。进一步优选的，设置流动相流速为2.0mL/min。优选的，第5个峰分离后，快速顶出第6个峰。优选的，利用高效液相色谱对分离得到的6个单体进行纯度检测。优选的，液相条件：WatersSymmetryC18column(5columnymme250mm,i.d.)，紫外检测波长254nm，流速：1.0mL/min，进样量：10μL；流动相采用水(A)和乙腈(B)，0-5min,88％A；5-15min，88％-70％A；15-20min，70％A；20-21min，70％-88％A；21-25min，12％B。本公开一个或一些实施方式中，提供一种对岩白菜中分离出的化合物抗氧化性检测方法，用H2O2处理待本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从岩白菜中大批量分离化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：对岩白菜进行提取，得到提取物，对提取物进行逆流色谱分离，得到单体成分β-熊果苷、岩白菜素、6-O-没食子酰熊果苷、没食子酸、11-O-没食子酰岩白菜素、(-)-表儿茶素3-O-没食子酸酯。/n

【技术特征摘要】
1.一种从岩白菜中大批量分离化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：对岩白菜进行提取，得到提取物，对提取物进行逆流色谱分离，得到单体成分β-熊果苷、岩白菜素、6-O-没食子酰熊果苷、没食子酸、11-O-没食子酰岩白菜素、(-)-表儿茶素3-O-没食子酸酯。


2.如权利要求1所述的从岩白菜中大批量分离化合物的方法，其特征在于，岩白菜得到提取液的操作包括如下步骤：将岩白菜药材浸泡，并用提取剂提取，重复多次，合并所有提取液，旋转蒸发至干，得到岩白菜粗品；
优选的，所述提取剂为乙醇；
进一步优选的，所述乙醇质量分数为80％；
优选的，所述提取时间为24h；
优选的，重复次数为3次；
优选的，在40℃下旋转蒸发；
优选的，提取物储存在4℃的冰箱中待用。


3.如权利要求1所述的从岩白菜中大批量分离化合物的方法，其特征在于，逆流色谱分离包括如下步骤：将岩白菜粗品分别溶解于溶剂相的上下两相，采用高速液相色谱仪，将固定相灌满色谱分离柱，设置流动相流速，达到流体力学平衡后进料，根据紫外光谱图接收6个单体组分，最终分离6个单体；
优选的，将两相溶剂体系叔丁基甲醚/正丁醇/甲醇/水配制溶剂系统，置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡一段时间后将上下两相分开，取岩白菜粗品，分别溶解于上相和下相中待用；
优选的，采用高速逆流色谱仪，首先使进样阀处于进样状态，将固定相用泵以一定流速灌满色谱分离柱，停泵；
优选的，开启速度控制器，使高速流色谱仪的色谱分离柱正转，达到一定转速后，设置流动相流速，开始泵流动相，当达到流体动力学平衡后将溶解好的样品用注射器注入逆流色谱仪进样阀中，旋转进样阀为接柱状态，使样品进入色谱分离柱，然后根据检测器紫外光谱图接收6个单体组分，最终分离6个单体；
优选的，叔丁基甲醚、正丁醇、甲醇、水的体积比为1:3:1:5；
优选的，高速流色谱仪的色谱分离柱正转转速达到800转/min时，再设置流动相流速...

【专利技术属性】
技术研发人员：王岱杰，伊夫蒂哈尔·阿里，沙希德·阿齐兹，施树云，崔莉，郭莹，李晓骄阳，吕其刚，
申请(专利权)人：山东省分析测试中心，巴基斯坦喀喇昆仑国际大学，
类型：发明
国别省市：山东;37