一种检测弓形虫IgM抗体的化学发光免疫分析测定试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种ＦＩＴＣ－抗ＦＩＴＣ间接包被技术与化学发光免疫分析技术相结合的弓形虫ＩｇＭ抗体测定试剂盒及其制备方法。本发明专利技术的试剂盒由阴性对照、阳性对照、抗ＦＩＴＣ抗体的固相载体、ＦＩＴＣ标记的抗人μ链单抗、辣根过氧化物酶标记的弓形虫抗原、化学发光底物和浓缩洗涤液组成。本发明专利技术的试剂盒可以作为产前优生优育诊断的辅助检测指标，对于提高出生人口素质，搞好计划生育和优生优育具有极其重要的意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学免疫学与体外诊断
，具体地，本专利技术提供了一种 FITC-抗FITC抗体间接包祐j支术结合化学发光免疫分析技术测定弓形虫IgM抗体 测定试剂盒及其制备方法。
技术介绍
弓形虫(Toxoplasma gondii)是猫科动物的肠道球虫，由法国学者Nicolle及 Manceaux在刚地梳趾鼠(Ctenodactylus gondii)的脾脏单核细胞内发现，虫体呈 弓形，故命名为刚地弓形虫。弓形虫病(toxoplasmosis)又称弓形体病，是由弓形虫 所引起的一种人畜共患寄生虫病。据文献报道，弓形虫可感染多种哺乳动物，家 畜感染率可达10-50%。全球约有10亿人感染了弓形虫，我国人群平均感染率为 5.16%。弓形虫是孕妇宫内感染导致胚胎畸形的五大病原体之一，先天性弓形虫病 患者可导致智力发育障碍、神经系统病变如脑瘫、癫痫、脑膜炎、弱智等症状。 我国每年约有9万名新生儿受弓形虫病损害，年均耗资上亿元，给社会和家庭带 来了沉重的负担，同时也严重地影响了我国的出生人口素质。弓形虫感染后最早出现的抗体为IgM抗体，若在血清中检测到IgM抗体则提 示为急性弓形虫感染，随后出现的IgG抗体在感染后2-5个月逐渐达到高峰，并 可持续较长时间存在，IgG抗体阳性说明曾感染弓形虫， 一般多为慢性感染。目前， 对弓形虫致畸已引起普遍认识，对异常产史、异常接触史或有临床症状者进行监 测、制定有效的防治措施以有效地加强对育龄妇女弓形虫感染的检测，对于提高 出生人口素质，搞好计划生育和优生优育具有极其重要的意义。目前，弓形虫的实验室诊断方法主要包括病原学试验和血清学试验。病原学 试验具有确诊意义，但存在操作较困难、灵敏度低等缺点。因而，血清学试验是目前广泛应用的重要辅助诊断手段。常用的血清学诊断方法主要包括染色试验 (Sabin-Feldman DT )、间接血凝试验(IHA)、放射免疫分析(RIA)以及酶联免疫 分析(EIA)等。其中染色试验存在需要活虫操作的缺点，间接血凝试验虽然与DT 符合率高但重复性差、致敏红细胞不稳定，放射免疫分析虽然高灵敏、高特异但 存在有效期短、放射性污染的缺点，酶联免疫分析虽然有效期长、特异性强但存 在底物大部分有毒或为致癌等缺点。化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay, CLIA)是近十年来在 世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析，是继放射免疫分析和酶免疫分析 之后发展起来的一种超高灵敏度的微量测定技术。具有高灵敏度、检测范围宽、 操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免 疫分析与普通酶免疫分析理想的取代者，是目前免疫定量分析最理想的方法，异硫氰酸荧光素(FITC)是一种很稳定的荧光素，极易结合在蛋白分子上，不仅 标记简单，而且标记物十分稳定。FITC作为半抗原结合到蛋白质载体上具有很强 的免疫原性，抗FITC单克隆抗体与标记在的蛋白质上FITC反应，不仅特异性高， 而且亲和力也高于抗原抗体的结合。本专利技术以抗FITC抗体包被固相载体，通过 FITC-抗FITC抗体系统间接包被FITC标记的蛋白，不仅便于放大生产、易于监控 生产过程，而且避免了直接包被固相存在的活性损失大、工艺优化繁瑣等缺点， 同时保证了批次间的稳定性。本专利技术解决了目前临床上病原学试验操作不方便、灵敏度低，放免试剂有效 期短、放射性废弃物污染危害以及酶免试剂受多种因素干扰、底物大部分有毒等 不足。本专利技术的弓形虫IgM抗体化学发光测定试剂盒，经临床实验证明，操作简 便，灵敏度高，特异性好，与病原学检验结果符合度极高，提供了一种高效、灵 敏、稳定、特异的弓形虫急性感染的血清学诊断技术。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种FITC-抗FITC抗体间接包被技术结合化学发光免疫 分析测定弓形虫IgM抗体的化学发光测定试剂盒及其制备方法。本专利技术的试剂盒由弓形虫IgM抗体阴性对照、阳性对照、抗FITC抗体包被的 固相载体、FITC标记的抗人p链单克隆抗体、辣^^过氧化物酶标记的弓形虫抗原、 化学发光底物以及浓缩洗涂液组成。本专利技术的另一目的为提供了上述试剂盒的制备方法。(1) 阴性对照的制备收集经ELISA法检测弓形虫IgM抗体、HIV(l+2)抗体、HCV抗体、TP抗体、 HBsAg为阴性的正常人血清6份以上，过滤除菌、分装、低温储存。(2) 阳性对照的制备收集经ELISA法;险测弓形虫IgM抗体阳性，HIV(l+2)抗体、HCV抗体、TP抗 体、HBsAg阴性的患者血清6份以上，过滤除菌、分装、低温储存。 (3 )抗FITC抗体包被固相载体的制备用0. 020M pH值为7. 4的磷酸盐緩冲液配制成所需浓度的抗FITC抗体包被液， 并将包被液负栽于固相载体上，用含20%新生牛血清、5。/。L-岩藻糖的0. 02MpH7. 4 磷酸盐緩冲液封闭后，抽湿干燥，铝箔袋密闭，2-8。C保存。其中，所迷包被抗FITC 抗体的固相载体为微孔板或磁性颗粒。(4) FITC标记抗体的制备将抗体用pH9. 6 0. 05M碳酸盐緩冲液透析后，与FITC的DMSO溶液避光反应， 经50mM Nm:i终止反应后，0. 02M pH7. 4磷酸盐緩冲液透析、低温、避光保存。(5) 酶标弓形虫抗原的制备用简易的过^*酸钠氧化法将辣#>过氧化物酶与弓形虫抗原偶联。 (6 )化学发光底物的制备基于1000mL所述化学发光底物A液，包括1. 7716g鲁米诺、0. 051g 4-羟基 联苯、0. 012g 4-硤苯硼酸、11. 4g硼酸、4. 9g硼砂，其pH值为8. 0 ~ 10. 0;基于lOOOmL所述化学发光底物B液，包括0. 329g过氧化脲、lml Tween20、 51. 58g Na2HP04 . 12H20、 8. 74g NaH2P04 . 2H20，其pH值为7. 0 ~ 7. 6。 (7)浓缩洗涤液的制备配制含16% NaCl、 0. 4% KC1、 0. 1%吐温20、 0. "/。 Proclin300的0. 2M pH7. 4 Tris-HCl緩沖液作为浓缩洗涂液，使用时按20倍稀释使用。本专利技术的试剂盒釆用FITC-抗FITC抗体间接包被技术与化学发光技术相结合， 避免了直接物理吸附存在免疫活性损失大、空间位阻、精密性差等缺点，而且简 化工艺优化、便于监控生产过程。本专利技术的试剂盒利用FITC-抗FITC抗体系统间接包被抗人n链单抗，与待测样 本中弓形虫IgM抗体反应形成固相抗FITC抗体-FITC标记的抗人ja链单抗复合物， 再与辣根过氧化物酶标记的弓形虫抗原反应形成固相抗FITC抗体-FITC标记的抗 人H链单抗-辣根过氧化物酶标记的弓形虫抗原夹心复合物，然后催化底物化学发 光，通过检测发光底物产生的光信号代替酶免疫分析中的显色底物从而检测血清 中弓形虫IgM抗体的含量，大大提高了检测灵敏度，避免了酶免试剂存在的底物 大部分有毒或致癌等缺点，并具有反应速度快、成本低、易储存等优势。本专利技术 的试剂盒可以非常专一地检测出急性感染弓形虫后人体中的弓形虫I gM抗体含量。 具体实施例方式实施例1制备本专利技术的弓形虫IgM抗体化学发光免疫分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种弓形虫ＩｇＭ抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由阴性对照、阳性对照、抗ＦＩＴＣ抗体的固相载体、ＦＩＴＣ标记的抗人μ链单抗、辣根过氧化物酶标记的弓形虫抗原、化学发光底物和浓缩洗涤液组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：彭京胜，应希堂，宋胜利，胡国茂，郑金来，唐宝军，
申请(专利权)人：北京科美东雅生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]