组织多肽抗原化学发光免疫分析定量测定试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种组织多肽抗原化学发光免疫分析定量测定试剂盒及其制备方法，属于免疫分析医学领域。本发明专利技术试剂盒由组织多肽抗原校准品、组织多肽抗原抗体包被的固相载体、碱性磷酸酶标记物、化学发光底物液、浓缩洗涤液组成。进一步，试剂盒的制备包括以下步骤：配制校准品、包被固相载体、以酶标记抗体、配制化学发光底物液、配制浓缩洗涤液以及分装上述各组分最后组装为成品。本发明专利技术的试剂盒具有简便、快速、灵敏、稳定等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供了一种组织多肽抗原化学发光免疫分析定量测定试剂盒及其制 备方法，属于免疫分析医学领域。
技术介绍
TPA是瑞典科学家Bjorklund于1957年从各种肿瘤组织中分离出来的一种 不含糖和脂肪的蛋白质，系单链多肽，分子量约17 45 KD其结构与细胞角蛋白— 和细胞骨痂蛋白相类似，尤其与中角蛋白同源性较高，是Cytokeratins8，18,19的 组织多肽片段的复合物，可作为肿瘤增殖分化的标志。TPA的水平反映了细胞增殖、分化和肿瘤的浸润程度。大量临床资料表明， TPA在癌症病人血清中浓度异常升高，但与肿瘤的病理类型关系不密切，可反映 癌症病人肿瘤细胞增殖以及死亡状况。在一定程度上可根据血清中TPA浓度的 高低来判断癌症病人的病程。血清TPA在肝癌、胰腺癌、卵巢癌和肺癌中有较高 阳性率，从血清中定量测定TPA，对肝癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌有较高的辅助 诊断价值，可用于临床诊断及预后的观察，同时可以鉴别诊断转移癌和非转移癌、 腺癌和鳞癌，对临床病人治疗方案的选择及实施化疗方案有重要的参考价值，是 一个极具有推广价值的肿瘤标志物。对TPA的定量分析，目前常用的是放射免疫分析(RIA)和酶联免疫吸附分 析(ELISA)，其中RIA必须用1251等放射性元素标记，其放射性核素的半衰期短， 不能长期保存，同时也给实验操作人员带来了放射性伤害。ELISA检测灵敏度不 够高，检测范围窄，影响因素较多，易造成假阴性和假阳性等缺点也不能满足临 床的要求。化学发光法作为一种高灵敏度、线性范围宽的检测方法，它的优越性逐渐为 科学家们所重视，目前已被广泛应用于医药、生物、食品、环境、微生物等各个领域。肿瘤作为一类严重危害人们生命健康的恶性疾病，其早期诊断与治疗，对 其预后具有十分重要的意义，对其复发与预后的监控是提高肿瘤患者生存率的一 个重要方面。TPA作为现在临床中诊断肿瘤的重要指标，应被广泛应用于临床， 与其它分析方法相比，化学发光法具有检测灵敏度高、线性范围宽、检测仪器简 单等诸多优点，既没有前面所述的放射免疫分析法的诸多缺点，又没有荧光免疫 分析法实验仪器价格昂贵、需要专业人员进行操作、试剂保存要求严格、容易受 到样品中自然荧光的干扰等缺点；与分光光度酶免疫测定法相比，其线性范围更宽o化学发光免疫分析技术是把高灵敏的化学发光分析方法和特异性强的免疫分 析方法相结合发展起来的一项具有化学发光分析的高灵敏度和免疫分析法的高选 择性的新的免疫分析技术。本专利技术采用"双抗体夹心法"在酶联免疫分析的基础上应用酶催化发光底物， 通过检测发光底物产生的光信号代替酶联免疫分析中的显色底物，因而其灵敏度 大大提高，并且操作简便适用性广，既可应用于开放式的半自动化学发光测量仪， 也可用于全自动的测量系统，可实现大批量快检测，使用成本低，更易推广应用。
技术实现思路
本专利技术目的是提供了一种能够简便、快速、灵敏、特异、稳定地检测 组织多肽抗原的试剂盒。根据本专利技术的组织多肽抗原化学发光免疫分析定量测定试剂盒由组织多 肽抗原校准品、组织多肽抗原单克隆抗体或多克隆抗体包被的固相载体、碱性 磷酸酶标记的抗组织多肽抗原单克隆抗体或多克隆抗体、碱性磷酸酶所作用的 化学发光底物液1,2-二氧乙烷类衍生物以及浓縮洗涤液组成。上述试剂盒中，所述固相载体为微孔板、塑料珠、磁性颗粒。上述试剂盒中，所述1,2-二氧乙烷类衍生物为(金刚垸)-1,2-二氧乙烷、 3-(2'-螺旋金刚垸)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-l， 2-二氧乙烷。上述试剂盒中，所述浓縮洗涤液为Tris-HCl洗漆液。本专利技术的另一目的是提供一种组织多肽抗原化学发光免疫分析定量测定 试剂盒的制备方法。本专利技术试剂盒具体制备过程如下配制组织多肽抗原校准品、以组织多 肽抗原单克隆抗体或多克隆抗体包被固相载体、以碱性磷酸酶标记抗组织多肽 抗原单克隆抗体或多克隆抗体、配制碱性磷酸酶所作用的化学发光底物液、 配制浓縮洗涤液、分装上述各组分以及组装为成品。根据本专利技术的方法，优选，所述包被固相载体包括以下步骤包被板制备在包被缓冲液中加入组织多肽抗原单克隆抗或多克隆抗制成工作液， 将其负载于固相载体上，然后洗去液体，用封闭液封闭。 其中包被缓冲液选用碳酸盐缓冲液。碳酸盐缓冲液由Na2C03l.5g、NaHC03 2.9g、蒸馏水1000ml组成，pH9.6。洗涤液选用生理盐水。封闭液选用PBS-BSA缓冲液。在上述方法中，所述固相载体为微孔板、塑料珠、磁性颗粒。 在上述方法中，所述酶为碱性磷酸酶。 在上述方法中，碱性磷酸酶标记的抗体，采用戊二醛法连接。 在上述方法中，所述化学发光底物为1,2-二氧乙烷类衍生物。 在上述方法中，所述1,2-二氧乙烷类衍生物为(金刚垸)-1，2-二氧乙烷、 3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-l， 2-二氧乙烷。本专利技术是针对临床实验室和中小型医院，为其提供一种既能手工操作，又可 适用于某些全自动检测仪器的诊断试剂盒，其操作简便，成本低廉，反应迅速， 重复性好。本专利技术采用化学发光免疫分析法，利用碱性磷酸酶催化发光底物，当 标记的组织多肽抗原抗体与相应抗原结合后，发光底物受碱性磷酸酶作用，发生氧化还原反应，反应中释放可见光或者该反应激发荧光物质发光，最后用化学发 光仪进行检测。本专利技术避免放射性元素污染同时，较酶联免疫吸附实验的灵敏度 有了大幅度的提高。组织多肽抗原单克隆抗体包被固相通过物理吸附作用完成。本专利技术人考察了 不同缓冲体系对组织多肽抗原单克隆抗体在固相上的物理吸附效率。本专利技术的试剂盒具有简便、快速、灵敏、稳定等优点，其各项指标均达到同 类进口试剂盒的分析法水平。并且，根据本专利技术的检测系统为开放式操作，简便 快速，不需要昂贵的全自动化学发光测量仪，特别适合广大的中小医院推广使用， 为临床诊断和科研工作提供一种非常有价值的检测手段。根据本专利技术的试剂盒， 既有效地利用了化学发光技术原理，又确保了检测的灵敏度。另外，这种模式还 便于操作和生产。附图说明图1为实施例1所制备的试剂盒中的校准品线性图。图2为分别使用本专利技术的试剂盒与酶联免疫试剂盒测定临床血样对比图。具体实施例方式实施例1组织多肽抗原化学发光免疫分析定量测定试剂盒的制备 一、酶标抗体制备酶标组织多肽抗原抗体采用戊二醛法制备，用酶标抗体稀释液以h 2000工 作浓度稀释酶标抗体。(1) 戊二醛法制备过程组织多肽抗原抗体用戊二酸与碱性磷酸酶偶联，对PBS充分透析，加等体积 甘油，一2(TC以下保存。(2) 酶标抗体稀释液配方 Tris 12.120g BSA 5gProclin300 lmL双蒸水 定容至1000mL二、 组织多肽抗原校准品的配制以动物血清或蛋白缓冲液为基质，加入组织多肽抗原纯品配制而成。制备的 最终浓度为0ng/mL、 0.5ng/mL、 2ng/mL、 5ng/mL、 20ng/mL。三、 固相包被板的制备(1) 包被包被液选用碳酸盐缓冲液。碳酸盐缓冲液配方Na2C03 1.5g NaHC03 2.9g 双蒸水 定容至lOOOmL调整pH值至9.6。 碳酸盐缓冲液以1: 5000工作浓度稀释组织多肽抗原包被抗体，混匀 后每孔加入llOpL，' 4'C放本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组织多肽抗原化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由组织多肽抗原校准品、组织多肽抗原单克隆抗体或多克隆抗体包被的固相载体、碱性磷酸酶标记的抗组织多肽抗原单克隆抗体或多克隆抗体、碱性磷酸酶所作用的化学发光底物液１，２－二氧乙烷类衍生物以及浓缩洗涤液组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：矫黎明，应希堂，宋胜利，胡国茂，郑金来，于尚永，
申请(专利权)人：北京科美东雅生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]