弓形虫IgM和IgG抗体联合检测试纸制造技术

本实用新型专利技术公开了一种弓形虫IgM和IgG抗体联合检测试纸。特征在于塑料支撑板(8)一端粘贴上样垫(1)，上样垫(1)的一端紧密压接含有标记弓形虫特异性的抗原P30或P22的胶体金垫(2)，胶体金垫(2)一端紧密压接硝酸纤维素NC膜(3)，硝酸纤维素膜包被有相互分离的检测线T1(5)、检测线T2(6)和质控C线，检测线T1(5)为抗人IgM抗体，检测线T2(6)为抗人IgG抗体，质控C线(7)为抗弓形虫P30或P22抗体。检测时将样品加在上样垫上，15分钟内肉眼直接观察，判定检测结果。具有操作简便、快速、适合现场检测和经济实用等优点。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术是涉及生物应用
，特别是涉及一种以胶体金免疫层析法快速检测弓形虫IgM和IgG抗体联合检测试纸
技术介绍
弓形虫病(toxoplasmosis)是由刚地弓形虫(Toxophasma gondii)感染所引起的人畜共患病。在人体多为隐性感染；发病者临床表现复杂，其症状和体征又缺乏特异性，易造成误诊。孕妇受染后，病原可通过胎盘感染胎儿，直接影响胎儿发育，致畸严重，其危险性较未感染孕妇大10倍、影响优生，成为人类先天性感染中最严重的疾病之一，已引起广泛重视，世界上许多发达国家已经将弓形虫感染的检查列为孕期常规检查项目，在优生优育方面发挥着重要作用。目前对弓形虫检测的主要方法是弓形虫特异性抗体检测。检测弓形虫IgM判定是否为现症感染，检测IgG判定是否曾经感染过。检测两种抗体有利于对被检对象的进行全面的判定，指导优生优育。目前弓形虫抗体的检测方法主要是ELISA等检测方法。在胶体金的检测方法中，有单独检测弓形虫IgM或IgG的报道，但用胶体金类免疫层析技术同时检测弓形虫IgM和IgG抗体的检测试纸尚未有相关报道。和用两种试剂分别检测IgM和IgG 抗体相比，同时检测IgM和IgG抗体能减少检测人员的工作量，节约成本；同时减少采血量， 减少患者的痛苦。免疫层析胶体金技术是新型的诊断技术，在抗体检测方面已得到较为广泛运用， 基本原理如下利用胶体金标记一种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，形成肉眼可见的检测T线， 通过检测线的有无实现对结果的判定。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种弓形虫IgM和IgG抗体检测试纸，具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。本技术提供一种弓形虫IgM和IgG抗体联合检测试纸，塑料支撑板(8) —端粘贴上样垫(1)，上样垫(1)的一端紧密压接含有标记弓形虫特异性的抗原P30或P22的胶体金垫O)，胶体金垫( 一端紧密压接硝酸纤维素NC膜(3)，硝酸纤维素膜包被有相互分离的检测线Tl (5)、检测线T2 (6)和质控C线，检测线Tl (5)为抗人IgM抗体，检测线T2 (6) 为抗人IgG抗体，质控C线(7)为抗弓形虫P30或P22抗体，硝酸纤维素膜的另一端连接吸样垫(4)形成试纸。所述的弓形虫IgM和IgG抗体联合检测试纸，其特征在于所述的抗原为弓形虫特异性的主要抗原P30或P22抗原，抗原可以利用基因工程重组表达或在培养虫体中纯化。所述的弓形虫IgM和IgG抗体联合检测试纸，其特征在于所述的上样垫(1)为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫由吸水滤纸构成。所述的弓形虫IgM和IgG抗体联合检测试纸，所述的抗原的包被方法为以0. OlM PH 7. 2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgM抗体配制成Ι-aiig/ml的溶液，以0. OlM pH 7. 2磷酸盐缓冲液(PBQ将抗人IgG抗体配制成l-2mg/ml的溶液，用喷膜仪在NC膜下部以1-1. 5ul/ cm的参数进行划线，包被Tl、T2线，同时在NC膜上部包被抗弓形虫P30抗体作为C线，划线后将NC膜在干燥间，温度20-25°C，湿度小于30%，干燥2_5小时。所述的弓形虫IgM和IgG抗体联合检测试纸，所述的抗原标记胶体金颗粒的方法为以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30-50nm的胶体金溶液，制备完成后取IOOml 胶体金液放在烧杯内，用0. 2M K2CO3调至pH8. 0，按IOOml胶体金溶液加入0. 5-2mg弓形虫 P30和(或)P22抗原，室温搅拌2小时，加入牛血清白蛋白BSA，聚乙二醇PEG20000 封闭20min，12000r/m离心30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至100ml，按Iml溶液铺20cm2的比例均勻地铺在玻璃纤维膜或无纺布上，再置干燥间，温度20-25°C，湿度小于 30 %，干燥2-5小时，制成胶体金垫。所述的弓形虫IgM和IgG抗体联合检测试纸，所述的试纸的装配方法为在干燥室内，温度20-25°C，湿度小于40%，取塑料支撑板板，将已包被的NC膜放置在塑料支撑板的中部粘贴，在NC膜T线一侧搭接胶体金垫(搭胶体金垫的1/ 粘贴，在胶体金垫另一侧搭接粘贴上样垫，搭胶体金垫的1/5 ；在NC膜C线一侧搭接吸样垫，搭吸样垫的1/10 ；最后用裁剪机将贴好塑料板切成2-5mm宽的试纸条，切好的试纸条可以再装入塑料卡内，形成检测卡。所述的弓形虫IgM和IgG抗体联合检测试纸，检测方法为将被检血清或血浆平衡至温室，将试纸条或试剂卡平放，在上样垫上加入5-20ul被检样品，再加入50-100ul的样品稀释液，使胶体金溶解并在NC膜上层析，然后用肉眼直接观察在15分钟内C、T1、T2线的出现情况，并判定检测结果。本技术的有益效果是提供一种利用免疫层析胶体金技术检测弓形虫IgM和 IgG抗体的新型试纸。采用胶体金标记弓形虫特异性抗原，包被抗人IgM和IgG抗体实现对血液中抗弓形虫抗体的检测，一次检测获得两种检测指标，节约时间和成本，减轻患者的痛苦。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。附图说明图1是弓形虫IgM和IgG抗体联合检测试纸结构示意图。附图符号说明1 上样垫；2 胶体金垫；3 =NC膜；4 吸样垫5 检测线Tl ；6 检测线T2 ；7 质控C线；8 塑料支撑板具体实施方式实施例制备弓形虫IgM和IgG抗体联合检测试纸1主要材料1. 1弓形虫特异性P30抗原、P30抗体香港先进技术工业有限公司产品，为重4组抗原，P30抗原用于胶体金标记，P30抗体用于NC膜质控线包被；鼠抗人IgM和IgG抗体Arista公司产品，用于NC膜包被；氯金酸Sigma公司产品；硝酸纤维素(NC)膜 Millipore公司产品；牛血清白蛋白(BSA)，聚乙二醇PEG20000，水解酪蛋白=Sigma产品。 其它常用试剂均为分析纯试剂。1. 2临床血清由公司在相关医院获得，其中弓形虫IgG抗体阳性样本60份，IgM抗体阳性样本10份，其中包括两种抗体均阳性样本5份。两种抗体全为阴性正常人样本50 份。1. 3弓形虫IgM抗体检测试剂盒(ELISA法)，弓形虫IgG抗体检测试剂盒(ELISA 法)国内已注册的商用产品。2 方法2. 1弓形虫P30重组抗原的胶体金标记氯金酸一柠檬酸三钠还原法制备直径为 40nm的胶体金溶液，制备完成后取三份胶体金，分别用0. 2MK2C03将溶液调到pH7. 0、pH8. 0 和pH9. 0。然后将溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，按每IOOml溶液加入0. 5mg、lmg、l. 5mg 将重组抗原将蛋白缓慢滴加到胶体金溶液中，继续搅拌2小时，再滴加入到终浓度为0. 1% 的PEG2000和1 %的BSA进行封闭20min，标记结束后以12000r/m离心，弃上清，沉淀按原体积复溶至不同配比的胶体金工作液硼酸盐缓冲液，PH8. 0，含BSA、羊血清，蔗糖和表面活性剂中。然后将标本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：霍五奎，岳晓燕，马雪明，刘寅，王晶，罗云萍，张有青，
申请(专利权)人：正元盛邦天津生物科技有限公司，
类型：实用新型
国别省市：