肿瘤相关抗原５０化学发光免疫分析定量测定试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明专利技术提供了一种肿瘤相关抗原５０化学发光免疫分析定量测定试剂盒及其制备方法。根据本发明专利技术的试剂盒包括：１）肿瘤相关抗原５０校准品；２）肿瘤相关抗原５０的单克隆抗体包被载体；３）肿瘤相关抗原５０的单克隆抗体酶标记物；以及４）化学发光底物。进一步，根据本发明专利技术制备上述试剂盒的方法包括以下步骤：１）以肿瘤相关抗原５０纯品配制肿瘤相关抗原５０校准品；２）以肿瘤相关抗原５０的单克隆抗体包被载体；３）分装上述肿瘤相关抗原５０校准品和化学发光底物；以及４）组装为成品。本发明专利技术的试剂盒具有简便、快速、灵敏、稳定等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫分析医学领域，具体地，本专利技术提供了一种肿瘤相关抗原50 (CA50)化学发光免疫分析定量测定试剂盒及其制备方法。
技术介绍
肿瘤是一类严重威胁人类生命和健康的恶性疾病。冊0指出及早诊断和治疗 是对抗癌症的有效手段之一，肿瘤的早期诊断是非常重要的。目前发现的肿瘤标志物已经有一百多种，由于大多数情况下体内肺瘤标志物 的含量都非常低， 一般的检测方法很难对其进行精确的定量。CA50是一种非特异 性的广谱肿瘤标志物，其对胰腺、肝脏、结肠等消化系统肿瘤的诊断有较高的价 值。因此，如何能够有效地在肿瘤诊断中应用CA50—直是人们关注并希望解决的 问题。近十年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速，已广泛应用于生物医学 基础理论研究及临床疾病诊断各领域。其中技术工艺成熟，具有先进性且实用性 强，易于推广的主要有放射免疫分析、酶免疫分析、时间分辨荧光免疫分析和 化学发光免疫分析等四种。这些超微量检测技术的基本理论大体相同，但是所用 示踪剂及所发出的信号各不相同。根据大量的实验结果及临床应用资料，从实用 性、稳定性、准确性及发展前景来看，依次为化学发光免疫分析、时间分辨荧 光免疫分析、放射免疫分析以及酶免疫分析。放射免疫分析法存在诸多缺点，如 操作复杂、测定结果不稳定、试剂保存时间短、放射性污染、仪器昂贵等。化学发光免疫分析法是一种较先进而有效的方法，然而，目前化学发光免疫 分析技术在CA50免疫分析产品的应用方面仍是空白。 一方面，产业应用需要解决 成品的高效性和稳定性问题。另一方面，现有技术中的化学发光免疫分析试剂盒 均为封闭式全自动化学发光测量系统，需要昂贵的全自动化学发光测量仪，从而 限制了推广使用，无法广泛地应用于临床诊断和科研工作。本专利技术的试剂盒可应 用于开放式的化学发光测量仪，使用成本低，更易推广应用。
技术实现思路
本专利技术同时解决了上述问题，即将化学发光技术与CA50的免疫分析学有效地 结合，提供了一种能够简便、快速、灵敏、稳定地检测CA50的试剂盒，该试剂盒 适于在产业上有效地推广应用。本专利技术的目的是提供一种肿瘤相关抗原50 ( CA50)化学发光免疫分析定量测 定试剂盒。本专利技术的再一 目的是提供一种制备上述试剂盒的方法 根据本专利技术的试剂盒包括1 )肿瘤相关抗原50校准品；2)包被有肿瘤相关 抗原50的单克隆抗体的载体；3 )酶标记的肺瘤相关抗原50的单克隆抗体；以及 4)上述酶所作用的化学发光底物。进一步，根据本专利技术的制备上述试剂盒的方法包括以下步骤1 )以肺瘤相关抗原50纯品配制肺瘤相关抗原50校准品；2)用酶标记肿瘤相关抗原50的单克隆抗体；3 )以肿瘤相关抗原50的单克隆抗体包被栽体；4 )分装上述肿瘤相关抗原50校准品、酶标记的肿瘤相关抗原50的单克隆抗 体和该酶所作用的化学发光底物；以及5)組装为成品。在上述根据本专利技术的试剂盒及其制备方法中，所述载体可以为固相栽体、优 选微孔板、塑料珠、塑料管或磁性颗粒。所述酶可以为碱性磷酸酶或辣根过氧 化物酶。所述化学发光底物可以为1,2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米 诺，其中所述1，2-二氧乙烷类衍生物可以为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2'-螺 旋金刚烷)-4-曱氧基-4-(3〃-磷酰氧基)苯基-1, 2-二氧乙烷(AMPPD)、 CSPD或 CDP- Star。在根据本专利技术的方法中，其中所述包被栽体的步骤3)包括以下步骤 1 )包被配制包被液，基于1000mL所述包被液包含7.30g的柠檬酸三钠和4.45g 的柠檬酸，所迷包被液的pH值为4.5~4.8，然后将制备的包被液与肿瘤相 关抗原50的单克隆抗体混合，并将所得混合液负栽于栽体上；2) 用生理盐水洗涤上述载体；以及3) 封闭配制封闭液，基于 1000mL 所述封闭液包含 0.2gNaH2PO4 2H20,2.9gNaH2P04 . 12H20、 10gBSA、和lmL生物防腐剂，所述 封闭液的pH值为7.0-7.5，然后将所得封闭液负栽于上述洗涤后的载体上。具体的上述试剂盒可以包括CA50校准品、抗体包被板、酶标记物与化学发光 底物液、20倍浓缩洗涤液等。其中，所述CA50校准品为标准级，纯度不低于90%、抗体包被板为48或96孔的微孔板条、酶标记CA50单抗为偶联碱性磷酸酶、化学 发光底物液为AMPPD、浓缩洗涤液为Tris-HCl。本专利技术"肿瘤相关抗原50化学发光免疫分析定量测定试剂盒"可以非常专一 地定量检测出病人CA50的含量，可以根据CA50含量的多少判断治疗胰腺、肝脏、 结肠等消化系统肿瘤病人药物的效果及其病情的变化。它具有简便、快速、灵敏、 稳定等优点。该CA50测定试剂盒(化学发光法)的各项指标均达到酶联免疫分析 法。并且，根据本专利技术的检测系统为开放式操作，简便快速，不需要昂贵的全自 动化学发光测量仪，特别适合广大的中小医院推广使用，为临床诊断和科研工作 提供一种非常有价值的检测手段。根据本专利技术的试剂盒，酶标记的CA50单抗与载 体上包被的CA50单抗和^皮测样品的CA50抗原形成"双抗体夹心"结构，因此本 专利技术采用的"双抗体夹心一步法"反应模式，既有效地利用了化学发光技术原理、 又确保了检测的灵敏性。另夕卜，这种模式还便于操作和生产。本专利技术的试剂盒应用的是酶催化发光底物，通过检测发光底物产生的光信号 代替酶联免疫分析中的显色底物，因而具有与酶联免疫分析同等的特异性，而灵 敏度大大提高，比现今的酶联免疫吸附分析灵敏度提高约10倍，可为乳腺癌的 诊断提供更为特异、快速、可靠的依据。附图说明图1说明了本专利技术的肿瘤相关抗原50定量测定试剂盒临界值的确定。图2显示了天坛医院用本专利技术的定量测定试剂盒和PerkinElmer试剂盒检测69 份肿瘤病人相关性的结果。其中，PerkinElmer试剂盒的测定值为X轴，本专利技术的试剂盒的测定值为Y 轴，结果经统计学处理得相关系数r = 0.9卯2, y = 0.9569x + 3.0073。图3显示了友谊医院用本专利技术的试剂盒和PerkinElmer试剂盒检测50份肿瘤 病人相关性的结果。其中，PerkinElmer试剂盒的测定值为X轴，本专利技术肿的试剂盒的测定值为Y 轴，结果经统计学处理得相关系数r = 0.9835, y = 0.8940x + 0.5785。图4显示了北华医院用本专利技术的试剂盒杏PerkinElmer试剂盒检测63份肿瘤 病A^目关性的结果。其中，PerkinElmer试剂盒的测定值为X轴，本专利技术肿瘤相关抗原50定量测 定试剂盒(化学发光法)的测定值为Y轴，结果经统计学处理得相关系数r = 0.9829， y = 0.9872x +0.1394。具体实施例方式实施例1制备本专利技术的CA50定量测定试剂盒一、 酶标抗体制备CA50单抗用戊二醛法与碱性磷酸酶偶联，对PBS充分透析，加等体积甘油， -20。C以下保存。二、 CA50校准品的制备用CA50纯品配制，分装O、 10、 20、 40、 80、 140U/ml共6瓶。三、 酶标抗体浓度选定采用方阵法选择酶标抗体的工作浓度大于1: 6000。四、 固相包被板的制备 (1)包被拧檬酸三钠 2.92g柠檬酸 1.78g双蒸水 400ml溶解混勾后，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肿瘤相关抗原５０定量测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：１）肿瘤相关抗原５０校准品；２）包被有肿瘤相关抗原５０的单克隆抗体的载体；３）酶标记的肿瘤相关抗原５０的单克隆抗体；以及４）上述酶所作用的化学发光底物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：唐宝军，胡国茂，应希堂，
申请(专利权)人：北京科美东雅生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]