人类免疫缺陷病毒抗体化学发光免疫分析诊断试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明专利技术提供了一种人类免疫缺陷病毒抗体化学发光免疫分析诊断试剂盒及其制备方法。本发明专利技术的试剂盒包括：抗－ＦＩＴＣ抗体包被的固相载体、ＦＩＴＣ标记的ＨＩＶ重组抗原、酶标记的ＨＩＶ抗原、上述酶所作用的化学发光底物、以及阴性和阳性对照液。制备上述试剂盒的方法包括以下步骤：１）以抗－ＦＩＴＣ抗体包被的固相载体；２）用ＦＩＴＣ标记ＨＩＶ重组抗原，获得ＦＩＴＣ标记的ＨＩＶ重组抗原；３）用酶标记ＨＩＶ抗原，获得酶标记的ＨＩＶ抗原；４）分装和组装。本发明专利技术的试剂盒成本低、灵敏度高，与已有的化学发光免疫分析检测方法相比，可以提高分析的灵敏度，重现性，减少使用重组抗原的量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫分析医学领域，具体地，本专利技术提供了一种人类免疫缺陷病 毒(HIV)抗体化学发光免疫分析诊断试剂盒及其制备方法。
技术介绍
获得性免疫缺陷综合征，又称艾滋病(AIDS)，是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感 染所引起的一种免疫缺陷性疾病。由于该病目前尚无有效的治疗方法和预防疫苗， 目前正以大约1. 4万人受感染的速度扩大流行。据估计，我国HIV感染者已近100 万，如不采取积极有效的控制措施，到2010年我国HIV感染者将达1000万，因 此形式非常严峻。HIV感染诊断进而识别出早期感染的人群是AIDS预防控制工作 的首要任务。因此，建立敏感实用的检测方法对于检测、诊断或血液筛查，控制 艾滋病的流行就显得非常重要。目前检测HIV的方法有100多种，其中HIV抗体检测的血清学诊断M展最早、 最便宜和最简单的HIV感染分析方法。最常用的检测HIV抗体的方法有酶联免疫试验 (ELISA)、明胶颗粒凝集i緣(PA)、免疫荧光分析(IFA)和斑点印迹等。其中ELISA由 于具有操作简单、快速、适合大量样品的筛选和检测等优点，是目前临床上通用的初 筛检测方法。但由于其灵敏度低从而受到了限制，后来又a了灵敏度较高的化学发 光免疫分析方法。这些方法在检测HIV抗体的原理上大多应用的是双抗原夹心法，这 种方法具有很好的特异性，在方法学上也具有很大的优势。但当前检测HIV抗体的方法均是将HIV重组抗原通过物理吸附的方法直接包 被在固相栽体，然后通过洗涤除去未结合上去的分析物或样品基质。这种直接包 被方法会对分析参数有一些影响(1)抗原通过物理吸附作用直接包被在固相上， 会引起抗原在固相上结合的不均一性，因此，重现性差，温育时间长；(2)与在液 相中抗原-抗体的结合反应不同，包被在固相上的蛋白(抗体或抗原)，其结合位点 更不易被接近，因此会导致蛋白的免疫活性部分失活，有时活性甚至只达到包被 蛋白量的10%左右；(3)结合到固相上抗原的量不仅与抗原自身的性质诸如疏水 性、等电点等有关，还受抗原溶液的配制及保存等外在条件的影响。而本专利技术采 用抗-FITC抗体与FITC标记的HIV抗原将HIV抗原结合到固相栽体上，从而克 服了物理吸附法直接包被HIV抗原的许多缺点。近十年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速，已广泛应用于生物医学 基础理论研究及临床疾病诊断各领域。其中技术工艺成熟，具有先进性且实用性 强，易于推广的主要有放射免疫分析、酶免疫分析、时间分辨焚光免疫分析和 化学发光免疫分析等四种。这些超微量检测技术的基本理论大体相同，它们的共 同特点是灵敏度好、特异性强；不同之处是所用示踪剂及所发出的信号各异。根 据大量的实验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看， 依次为化学发光免疫分析、时间分辨荧光免疫分析、放射免疫分析以及酶免疫 分析。放射免疫分析法存在诸多缺点，如操作复杂、测定结果不稳定、试剂保存 时间短、放射性污染、仪器昂贵等。然而，现有技术中的化学发光免疫分析试剂盒均为封闭式全自动化学发光测 量系统，需要昂贵的全自动化学发光测量仪，从而限制了推广使用，无法有效广 泛地应用于临床诊断和科研工作。
技术实现思路
为了解决上述问题提出并完成了本专利技术。具体地，本专利技术解决了现有技术中 的诊断试剂盒均一性、重现性差等问题。本专利技术的目的是提供一种人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体化学发光免疫分析诊 断试剂盒。本专利技术的再一目的是提供一种制备上述试剂盒的方法。 根据本专利技术的HIV抗体诊断试剂盒包括以下组分1) 抗-FITC抗体包被的固相栽体；2) FITC标记的HIV重组抗原；3) 酶标记的HIV抗原；4) 上述酶所作用的化学发光底物；以及5) 阴性对照液，所述阴性对照液为正常人血清。6) 阳性对照液，所述阳性对照液为新生牛血清稀释的阳性混合浆。其中，所述固相栽体为微:JU1、塑料珠、塑料管或磁汰颗粒。所述酶为碱性磷酸 酶或辣根过氧化物酶。上述酶所作用的化学发光底物为(金刚烷)-l，2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚烷)-4-曱氧基-4-(3"-磷酰ltJ0苯基-l, 2-二氧乙烷、CSPD或CDP- Star、鲁 米诺或异鲁米诺。此外，所述HIV重组抗原为gp41，gp^0，gp36。本专利技术还提供了 一种制备上述试剂盒的方法，该方法包括以下步骤1) 以抗-FITC抗体包被的固相载体；2) 用FITC标记HIV重组抗原，获得FITC标记的HIV重组抗原；3) 用酶标记HIV抗原，获得酶标记的HIV抗原；4) 分装上述获得的FITC标记的HIV重组抗原、酶标记的HIV抗原、该酶所 作用的化学发光底物、作为阴性对照液的正常人血清、和作为阳性对照液的新生 牛血清稀释的阳性混合浆；以及5) 组装为成品。其中，通过以下方法用抗-FITC抗体包被的固相栽体l)将包被用抗-FITC抗体加到pH-4.4 5.0、优选4.8的柠檬酸盐緩冲溶液中混 匀，用所得混合液包被固相栽体；2) 洗涤步骤l)中包被的固相栽体；以及3) 使用牛血清白蛋白封闭经洗涤的固相栽体。根据本专利技术的方法，其中，所述固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁 性颗粒。所述酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。该酶所作用的化学发光底 物可以为(金刚烷)-1 ，2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基) 苯基-1, 2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star、鲁米诺或异鲁米诺。本专利技术的试剂盒可以采用如下具体形式，其包括抗-FITC抗体包被的96孔或 48孔不透明微孔板、FITC标记的gp41 、 gpl20和gp36重组抗原、辣根过氧化物 酶标记的HIV重组抗原、正常人血清的阴性对照液、样品稀释液为pH 7.4的0.1 M Tris-HCl緩冲液+0.1% BSA+0.1% Proclin300、新生牛血清稀释的阳性混合浆、20 倍浓缩洗涤液为含有10%生理盐水的pH 8.5的2MTris-HCl緩沖液、化学发光底 物A、 B液分别为鲁米诺溶液、过氧化氢及其特效增强剂(对^f典苯酚)溶液，各1瓶。根据本专利技术，当使用二抗体系如FITC与抗-FITC抗体体系固定蛋白时，固定 抗原蛋白的免疫活性在很大程度上可以得到保存。 一个抗-FITC抗体分子也可以结 合3~4个FITC分子，并且特异性和亲和力都很强。两者一经结合就极为稳定。FITC- 抗-FITC抗体系统作为固相时，在固相上先预包被抗-FITC抗体，通过FITC-抗 -FITC抗体反应而使FITC标记的HIV抗原固相化。这种包被方法不仅可增加固相 载体上的抗原量，而且还可以使抗原上的结合点充分暴露。因此，使用二抗体系 作为固相，不但会提高分析的灵敏度，均一性和重现性，还可以减少HIV重组抗 原的使用量。并且抗-FITC抗体的包被微孔板可以作为统一的固相载体应用于许多 分析4企测对象。根据本专利技术的试剂盒采用二抗体系作为固相载体，双抗原夹心模式原理， 高灵敏度的鲁米诺-过氧化氢-辣根过氧化物酶及其增强剂的化学发光体系作 为信号检测体系，建立了一种高灵敏、低成本的二抗固相化学发光免疫分析 方法，并制备成测定血液或血浆中人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体的诊断试剂 盒，与ELISA检测试剂盒相比，本文档来自技高网...

【技术保护点】
人类免疫缺陷病毒抗体化学发光免疫分析诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：１）抗－ＦＩＴＣ抗体包被的固相载体；２）ＦＩＴＣ标记的ＨＩＶ重组抗原；３）酶标记的ＨＩＶ抗原；４）上述酶所作用的化学发光底物；以及５）阴性对照，所述阴性对照液为正常人血清。６）阳性对照，所述阳性对照液为新生牛血清稀释的阳性混合浆。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：应希堂，詹先发，胡国茂，
申请(专利权)人：北京科美东雅生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]