本发明专利技术公开了通过葡聚糖特异性抗体辅助诊断自身免疫性疾病的试剂盒。本发明专利技术公开的辅助诊断系统性红斑狼疮的ＥＬＩＳＡ试剂盒和类风湿性关节炎的ＥＬＩＳＡ试剂盒，均包括用于包被的抗原；所述用于包被的抗原可为α－１，４－葡聚糖，优选黄芪多糖；所述用于包被的抗原也可为α－１，６－葡聚糖，优选右旋糖苷。本发明专利技术的试剂盒可以用于辅助诊断系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎，具有重要的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及通过葡聚糖特异性抗体辅助诊断自身免疫性疾病的试剂盒。技术背景免疫系统最基本的功能是识别自我与非我，进而达到保护自身免受外界病原微 生物侵扰的目的。自身免疫是机体免疫系统对自身成分发生免疫应答的能力，这种现象存在于所有个体。在正常情况下的自身免疫应答并不引起病理性损伤；但在某 些条件下免疫系统仍然会对自身细胞或组织成分产生过度免疫应答，造成自身组织 或器官炎症性损伤，这种机体对自身成分发生过度免疫应答而导致的疾病状态称之 为自身免疫病。自身免疫病可分为器官特异性自身免疫病和全身性自身免疫病。与其它疾病相比，自身免疫病的特点包括①患者体内可检测到自身抗体或自身反应 性T细胞；②病情的进程与自身免疫反应强度密切相关；③多为慢性进行性疾病， 反复发作，慢性迁延，严重影响患者的工作能力和生活质量；④有明显的遗传倾 向和性别趋向，女性病人较男性病人为多；⑤有不同的诱因，病的表现形式也复杂 多样。健康人血清中含有天然自身抗体，包括IgM， IgG和IgA，其识别对象包括 DNA、肌动蛋白以及IgG等。天然抗体的产生并不依赖于外源性抗原的刺激，这些 抗体的产生有可能源自于胃肠道内的常驻菌丛诱导产生的，也可能与机体本身死亡 的自身反应性B1细胞有关，这些自身抗体与自身抗原的亲和力相对较低并具有交 叉反应性。与正常人自身抗体不同，引起自身免疫病造成病理性损伤的自身抗体的 特异性较强，与自身抗原亲和力较高，多数抗体为IgG，它们也是受抗原刺激产生 的。研究表明，自生抗体可通过多种机制使机体造成病理损伤，这些机制包括①抗体介导的细胞毒作用自身抗体与细胞表面的自身抗原相结合，通过调理作用使 靶细胞黏附于吞噬细胞表面进而被吞噬裂解；②抗体的中合作用自生抗体与体内有生物活性的抗原或受体结合，使其灭活或丧失功能而导致病理反应症状的出现。 作为自身免疫病之一的重症肌无力患者体内出现的抗乙酰胆碱受体抗体就是这一作用机制的典型代表。③自身抗体与抗原结合形成免疫复合物而造成组织损伤自身抗体与处于游离状态的抗原结合形成免疫复合物，在一定的条件下沉积于局部或全身血管壁基底膜或组织间隙；免疫复合物可激活补体而引起炎症反应。系统性 红斑狼疮就体现这一发病特点。系统性红斑狼疮患者体内抗DNA抗体在皮下、关节 和肾小球基底膜等处沉积造成炎症反应；④激活细胞表面受体而弓I起自身免疫病 毒性弥漫行甲状腺肿是由血清中促甲状腺激素受体特异性自身抗体引起的自身免 疫病，患者体内的自身抗体持续作用于甲状腺细胞的TSH受体，刺激甲状腺细胞分 泌过多的甲状腺素而引起患者甲状腺机能亢进。天然自身抗体可能具有一定的生理 功能，而在病理状态下自身抗体却会引起自身免疫病；也有一些自身抗体本身一 般不引起自身免疫病，但对于一些疾病的辅助诊断可提供帮助，如自身抗线粒体 抗体对原发性胆管硬化有辅助诊断意义。自身抗体水平已成为诊断自身免疫病的重要指标之一。比如，系统性红斑狼拖 (Systemic Lupus Erythematosus ， SLE)是一种涉及许多系统和脏器的自身免疫 性疾病，由于细胞和体液免疫功能障碍，产生多种自身抗体。可累及皮肤、浆膜、 关节、肾和中枢神经系统等，并以自身免疫为特征，患者体内存在多种自身抗体， 不仅影响体液免疫，亦影响细胞免疫，补体系统也有变化；发病机理主要是由于免 疫复合物形成；病情呈反复发作与缓解交替过程；此病以青年女性多见；我国患病 率高于西方国家，可能与遗传因素有关。自身抗体的异常是系统性红斑狼痛的重要 诊断指标。在临床内科疾病中，自身免疫类疾病的误诊率和漏诊率是较高的，主要原因主 要包括自身免疫类疾病发病较隐匿；临床表现不明确易与其它内外科疾病相混淆； 病程长，往往确诊时疾病已到较严重阶段。另外自身免疫类疾病的诊断标准以评分 式为主，有一定的主观因素，缺乏能够直接作为诊断标准的实验室指标。这些诊断 上的困难直接导致治疗的延误和预后差。因此，灵敏而特异的实验室指标对于自身 免疫类疾病的正确诊断、早期发现和预后评估非常重要。比如，对于系统性红斑狼 疮和类风湿关节炎，目前常用的实验室诊断指标为抗核抗体和类风湿因子，但是它 们依然有很高的漏检率和错检率，所以寻找并鉴定新的实验室指标用来诊断或辅助 诊断自身免疫类疾病是很重要的。多糖是由10个以上单糖聚合而成的大分子，分子量由数万至数百万，是构成生 命活动的四大基本物质之一，与多种生理功能密切相关。葡聚糖是最具生理活性的一种多糖，由D-吡喃葡萄糖单体组成，广泛存在于微 生物、植物和动物中。为评价一个指标在诊断疾病中的应用价值，需要对这一指标的敏感性、特异性 分别作出检验，只有同时具备很高的敏感性和特异性才能作为诊断指标。用统计学的方法同时检测敏感性和特异性即为ROC曲线，ROC曲线又称受试者工作特征曲线 (receive operating characteristic curve),是反映检测指标敏感性禾口牛寺异性连 续变量的综合指标。计算R0C曲线下面积AUC来评价诊断效率，面积大于0.5可认 为该指标有诊断意义，面积越大，判断价值越高。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供通过葡聚糖特异性辅助诊断自身免疫性疾病的试剂盒。 本专利技术提供的辅助诊断系统性红斑狼疮(SLE)的ELISA试剂盒，包括用于包 被的抗原；所述用于包被的抗原可为a-1，4-葡聚糖，优选黄芪多糖；所述用于包被 的抗原还可为a-l， 6-葡聚糖，优选右旋糖苷。所述试剂盒还可包括酶标的二抗；所述酶标的二抗是抗人IgG。 所述酶标的二抗可为任何抗人IgG，如山羊抗人IgG、兔抗人IgG或鼠抗人IgG。 所述试剂盒还包括ELISA常规试剂，如如下试剂牛血清白蛋白、PBS缓冲液、 PBST溶液、PBST-BSA溶液、0PD-磷酸柠檬酸缓冲液、硫酸和96孔酶标板；所述PBS 缓冲液的浓度为O. 15mol/L， pH为7.2;所述PBST溶液为在所述PBS缓冲液中加入 Tween 20得到的溶液，所述Tween 20和所述PBS缓冲液的体积比为O. 05%;所述 PBST-BSA溶液为在所述PBST缓冲液中加入牛血清白蛋白得到的溶液，所述牛血清白 蛋白的终浓度为1克/L;所述OPD-磷酸柠檬酸缓冲液为在磷酸柠檬酸缓冲液加入磷 苯二胺得到的溶液，所述邻苯二胺的质量百分比浓度为0.06%，所述磷酸柠檬酸缓 冲液的pH为5. 0，磷酸的浓度为O. lmol/L，柠檬酸的浓度为O. 05mol/L。本专利技术提供的辅助诊断类风湿性关节炎(RA)的ELISA试剂盒，包括用于包被的 抗原；所述用于包被的抗原可为a-l，4-葡聚糖，优选黄芪多糖；所述用于包被的抗 原还可为a-l， 6-葡聚糖,优选右旋糖苷。所述试剂盒还可包括酶标的二抗；所述酶标的二抗是抗人IgG。 所述酶标的二抗可为任何抗人IgG，如山羊抗人IgG、兔抗人IgG或鼠抗人IgG。 当所述用于包被的抗原为a-l， 4-葡聚糖时，所述试剂盒还可包括酶标的二抗； 所述酶标的二抗是抗人IgA。所述酶标的二抗可为任何抗人IgA，如山羊抗人IgA、兔抗人IgA或鼠抗人IgA。 所述试剂盒还包括ELISA常规试剂，如如下试剂牛血清白蛋白、PBS缓冲液、PBST溶液、PBST-BSA溶液本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种辅助诊断系统性红斑狼疮的ＥＬＩＳＡ试剂盒，包括用于包被的抗原；所述用于包被的抗原为α－１，４－葡聚糖，优选黄芪多糖；所述用于包被的抗原为α－１，６－葡聚糖，优选右旋糖苷。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高晓明，戴慧，董红亮，龙锴，张岩，徐晓军，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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