用于肌钙蛋白分析的高灵敏系统和方法技术方案

本发明专利技术提供了灵敏检测心肌肌钙蛋白的方法、组合物、试剂盒和系统，这样的方法、组合物、试剂盒和系统可用于对涉及心肌肌钙蛋白释放的状态进行诊断、预后和治疗方法的确定。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】交叉参考该申请基于35USC§119要求以下申请的优先权2006年04月04日提出的美国临时申请60/789304号、2006年04月19日提出的美国临时申请60/793664号、2006年05月26日提出的美国临时申请60/808662号、2006年11月28日提出的美国临时申请60/861498号和2006年12月04日提出的美国临时申请60/872986号，本文完整引入所有以上专利申请作为参考。
技术介绍
在美国每年有差不多600万人因患有胸痛出现在急诊部门。尽管这些病人中仅有15％-20％最终诊断为患有急性冠状动脉综合征(ACS)，但大约一半的病人被收入院以进行评估。相反，2％的患有ACS的病人被错误地排除了。由于患有ACS的病人短期内具有相对高的发生严重的心血管不良事件的风险，显然需要对他们进行识别的精确客观的工具。 目前使用的心肌损伤的标志物的缺点在于其临床应用受到了限制。心肌酶分析已经形成为确定是否有心肌损伤的基础。遗憾的是，标准的肌酸激酶-MB(CK-MB)分析在直至胸痛开始后10-12小时后才能可靠地排除梗塞形成。更早期的诊断对于纤维蛋白溶解治疗和治疗类选方面将具有非常独特的优势。 专利技术概述 本专利技术的一方面提供了方法。 在某些实施方式中，本专利技术提供了测定样品中是否存在肌钙蛋白的单一分子或其片段或复合物的方法，包括i)用标记物标记可能存在的所述分子、片段或复合物；和ii)检测是否存在所述标记物，其中，检测到标记物的存在表明样品中存在肌钙蛋白的单一分子、片段或复合物。在本专利技术方法的某些实施方式中，肌钙蛋白是肌钙蛋白的心肌异型体。在本专利技术方法的某些实施方式中，肌钙蛋白可以是心肌肌钙蛋白I(cTnI)或心肌肌钙蛋白C(cTnC)。在本专利技术方法的某些实施方式中，肌钙蛋白是cTnI。在本专利技术方法的某些实施方式中，肌钙蛋白的单一分子可以以低于约100pg/ml的检测限被检测到。在本专利技术方法的某些实施方式中，肌钙蛋白的单一分子可以以低于约20pg/ml的检测限被检测到。在本专利技术方法的某些实施方式中，标记物包括荧光部分。在某些实施方式中，荧光部分在被以其激发波长发射光的激光器激发时，能够发射至少约200个光子，其中激光聚焦于包含荧光部分的直径不小于约5微米的点上，而且其中激光指向该点的总能量不超过约3微焦耳。在本专利技术方法的某些实施方式中，荧光部分包括含有至少一个取代的吲哚环系统的分子，其中，在吲哚环3位碳上的取代基含有化学反应性的基团或偶联物质基团。在本专利技术方法的某些实施方式中，荧光部分包括染料。染料的例子包括但不限于AlexaFluor 488、AlexaFluor 532、AlexaFluor647、AlexaFluor 680及AlexaFluor 700。在本专利技术方法的某些实施方式中，荧光部分包括AlexaFluor 647。在某些实施方式中，荧光部分包括含有至少一个取代的吲哚环系统的分子，其中，在吲哚环3位碳上的取代基含有化学反应性的基团或偶联物质基团。在本专利技术方法的某些实施方式中，标记物进一步包括肌钙蛋白分子、片段或复合物的结合伴体(partner)。在本专利技术方法的某些实施方式中，结合伴体包括对肌钙蛋白分子、片段或复合物特异性的抗体。在本专利技术方法的某些实施方式中，抗体对于肌钙蛋白分子的特定区域是特异性的。在本专利技术方法的某些实施方式中，抗体对于包含心肌肌钙蛋白I的氨基酸27-41的区域是特异性的。在本专利技术方法的某些实施方式中，抗体可以是多克隆抗体。在本专利技术方法的某些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在本专利技术方法的某些实施方式中，所述方法进一步包括在固体载体上捕获肌钙蛋白或肌钙蛋白复合物。在本专利技术方法的某些实施方式中，固体载体可以是微量滴定板或顺磁性珠。在本专利技术方法的某些实施方式中，固体载体包括连接在固体载体上的对于肌钙蛋白或肌钙蛋白复合物特异性的捕获伴体。在本专利技术方法的某些实施方式中，捕获伴体与固体载体的连接是非共价的。在本专利技术方法的某些实施方式中，捕获伴体与固体载体的连接是共价的。在本专利技术方法的某些实施方式中，捕获伴体的共价连接使得捕获伴体以特定取向连接到固体载体上。在本专利技术方法的某些实施方式中，特定取向使得肌钙蛋白或肌钙蛋白复合物和捕获伴体的特异性结合最大化。在本专利技术方法的某些实施方式中，捕获伴体包括抗体。在本专利技术方法的某些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在本专利技术方法的某些实施方式中，抗体对于心肌肌钙蛋白I的氨基酸87-91是特异性的。在本专利技术方法的某些实施方式中，抗体对于心肌肌钙蛋白I的氨基酸41-49是特异性的。在本专利技术方法的某些实施方式中，样品是血液、血清或血浆样品。在本专利技术方法的某些实施方式中，样品是血清样品。在本专利技术方法的某些实施方式中，标记物包括荧光部分，且步骤ii)包括使标记物穿过单分子检测器。在本专利技术方法的某些实施方式中，单分子检测器包括a)激发荧光部分的电磁辐射源；b)供荧光部分穿过的毛细流动池；c)用于在毛细流动池中移动荧光部分的动力源；d)限定在毛细流动池内部的用于接收由电磁源发射的电磁辐射的探询空间；e)可操作地连接于探询空间的、用于测量激发的荧光部分的电磁特征的电磁辐射检测器；和f)位于探询空间和检测器之间的显微镜物镜，其中，该物镜是高数值孔径透镜。 在某些实施方式中，本专利技术提供了确定个体的诊断、预后或治疗方法的方法，包括i)测定该个体的样品中的心肌肌钙蛋白浓度，或测定该个体的系列样品中的心肌肌钙蛋白浓度，其中，通过对样品中心肌肌钙蛋白的检测限低于约50pg/ml的心肌肌钙蛋白分析方法测定浓度；和ii)根据样品的浓度或系列样品的浓度确定个体的诊断、预后或治疗方法。在本专利技术方法的某些实施方式中，步骤ii)包括分析步骤，例如，将所述浓度或系列浓度与浓度的正常值比较，将所述浓度或系列浓度与预定的阈水平比较，将所述浓度或系列浓度与基线值比较，和确定系列浓度的浓度变化率。在本专利技术方法的某些实施方式中，步骤ii)包括比较样品中肌钙蛋白的浓度与预定的阈浓度，并且，如果样品浓度高于阈水平，则确定诊断、预后或治疗方法。在本专利技术方法的某些实施方式中，通过测定正常个体组中肌钙蛋白的第99百分位数(percentile)浓度，并设定阈浓度为该第99百分位数浓度而确定阈浓度。在本专利技术方法的某些实施方式中，在心脏应力试验过程中或之后，采集至少一个样品。在本专利技术方法的某些实施方式中，心肌肌钙蛋白选自心肌肌钙蛋白I和心肌肌钙蛋白T。在本专利技术方法的某些实施方式中，心肌肌钙蛋白是心肌肌钙蛋白I。在本专利技术方法的某些实施方式中，心肌肌钙蛋白的浓度是总心肌肌钙蛋白浓度。在本专利技术方法的某些实施方式中，心肌肌钙蛋白的浓度是心肌肌钙蛋白复合物、心肌肌钙蛋白片段、磷酸化的心肌肌钙蛋白、氧化的心肌肌钙蛋白或其组合的浓度。在本专利技术方法的某些实施方式中，心肌肌钙蛋白的浓度相比于总心肌肌钙蛋白。在本专利技术方法的某些实施方式中，诊断、预后或治疗方法是心肌梗塞的诊断、预后或治疗方法。在本专利技术方法的某些实施方式中，诊断、预后或治疗方法包括心肌梗塞风险水平的危险分级。在本专利技术方法的某些实施方式中，在个体向医疗专业人员呈现一种或多种表明心肌缺血或心肌梗塞或其可能性的症状时或在接近该时间的时刻测定所述浓度或系列浓度。在本文档来自技高网...

【技术保护点】
测定样品中是否存在肌钙蛋白的单一分子或其片段或复合物的方法，包括：　ｉ）用标记物标记可能存在的所述分子、片段或复合物；和　ｉｉ）检测是否存在所述标记物，其中，检测到所述标记物的存在表明所述样品中存在所述肌钙蛋白的单一分子、片段或 复合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：P戈伊克斯，R普斯卡斯，J托德，R利文格斯顿，D赫尔德，
申请(专利权)人：神谷来克斯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]