用于分子的高灵敏性检测的方法和组合物技术

本发明专利技术公开了使用高灵敏性分子检测来检测和监测受试对象中的病况的方法。本发明专利技术提供了检测或监测受试对象中的病况的方法，所述方法包括检测来自该受试对象的第一样品中的第一标记物和检测第二标记物，其中所述第一标记物包括如心脏肌钙蛋白－Ｉ（ｃＴｎＩ）或血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）等生物标记物，且其中所述第一标记物的检出限小于约１０ｐｇ／ｍｌ。第二标记物可以为生物标记物、生理学标记物、分子标记物或遗传标记物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于分子的高灵敏性检测的方法和组合物相关申请的交叉引用本申请要求于2008 年 3 月 5 日提交的题为 “Methods and Compositions for Highly Sensitive Detection of Molecules” 的美国临时申请第 61/033,897 号和于 2008 年 3 月 21 日 提交的题为 “Ultrasensitive Assays and Methods of Use for the Detection VEGF 的美国临时申请第61/038,714号的优先权权益；本文通过引用并入这两个申请的全部内容。
技术介绍
生物医学研究、医学诊断、预后、监测和治疗选择、生物恐怖检测和其它涉及 分析物的多个低体积、低浓度样品的分析的领域中的进展已经导致了能灵敏地检测在不 断降低的浓度的样品中的颗粒的样品分析系统的发展。美国专利第4,793,705和5,209,834 号描述了此前的实现极为灵敏的检测的系统。本专利技术提供了该领域中的进一步进展。
技术实现思路
在一个实施方式中，本专利技术提供了一种用于检测或监测受试对象的病况的方 法，所述方法包括检测来自受试对象的第一样品中的第一标记物并检测第二标记物，其 中第一标记物包含心脏肌钙蛋白I(CTnI)或血管内皮生长因子(VEGF)，且其中第一标记 物的检出限小于约20pg/ml。在某些实施方式中，对至少一个标记物的检测包括使样品与 标记物的标记接触并检测该标记的存在或缺失，其中检测到标记存在表明相应的标记物 的存在。在某些实施方式中，所述标记包含荧光部分，并且所述检测包括使标记通过单 分子检测器，其中所述单分子检测器包括(a)用于刺激荧光部分的电磁辐射源；(b)用 于接收从电磁源发出的电磁辐射的询查空间；和(C)与所述巡查空间可操作地连接的电 磁辐射检测器，该检测器用于确定受激荧光部分的电磁特性。在某些实施方式中，第一标记物的检出限为约10pg/ml 约0.01pg/ml。在某 些实施方式中，第一标记物的检出限小于约lOpg/ml。在某些实施方式中，第一标记物 的检出限小于约5pg/ml。在某些实施方式中，第一标记物的检出限小于约lpg/ml。在 某些实施方式中，第一标记物的检出限小于约0.5pg/ml。在某些实施方式中，第一标记 物的检出限小于约O.lpg/ml。在某些实施方式中，第一标记物的检出限小于约0.05pg/ ml。在某些实施方式中，第一标记物的检出限小于约O.Olpg/ml。在某些实施方式中， 第一标记物的检出限小于约0.005pg/ml。在某些实施方式中，第一标记物的检出限小 于约0.001pg/ml。在某些实施方式中，检出限变差系数(coefficient of variation) (CV)为 约20% 约1%。在某些实施方式中，检出限变差系数(CV)为约100% 约1%。在 某些实施方式中，检出限变差系数(CV)为约75% 约1%。在某些实施方式中，检出 限变差系数(CV)为约50% 约1%。在某些实施方式中，检出限变差系数(CV)为约 25% 约1%。在某些实施方式中，检出限变差系数(CV)为约20% 约1%。在某些 实施方式中，检出限变差系数(CV)为约15% 约1%。在某些实施方式中，检出限变 差系数(CV)为约10% 约1%。在某些实施方式中，检出限变差系数(CV)为约5% 约1%。在某些实施方式中，样品尺寸为约10μ1 约Ο. μ 。在某些实施方式中，样 品尺寸为约100 μ 1 约0.1 μ 1。在某些实施方式中，样品尺寸为约75 μ 1 约0.1 μ 1。 在某些实施方式中，样品尺寸为约50 μ 1 约0.1 μ 1。在某些实施方式中，样品尺寸为 约25 μ 1 约0.1 μ 1。在某些实施方式中，样品尺寸为约20 μ 1 约0.1 μ 1。在某些实 施方式中，样品尺寸为约5μ1 约Ο. μ 。在某些实施方式中，样品尺寸为约Ιμ 约 0.1 μ L在某些实施方式中，样品尺寸小于约ΙΟΟμΙ。在某些实施方式中，样品尺寸小 于约75 μ 1。在某些实施方式中，样品尺寸小于约50 μ 1。在某些实施方式中，样品尺寸 小于约25 μ 1。在某些实施方式中，样品尺寸小于约20 μ 1。在某些实施方式中，样品尺 寸小于约15 μ 1。在某些实施方式中，样品尺寸小于约10 μ 1。在某些实施方式中，样品 尺寸小于约5 μ 1。在某些实施方式中，样品尺寸小于约2 μ 1。在某些实施方式中，样品 尺寸小于约ι μ 1。在某些实施方式中，样品尺寸小于约0.5 μ 1。在某些实施方式中，样 品尺寸小于约0.1 μ 1。在某些实施方式中，样品尺寸小于约0.05 μ 1。在某些实施方式 中，样品尺寸小于约0.01 μ 1。在某些实施方式中，所述方法还包括将第一样品分为两个以上的等分样品并在 这两个以上的等分样品种检测至少一个标记物。在某些实施方式中，样品包括血浆、 血清、细胞溶解产物或组织样品。在某些实施方式中、样品包含支气管肺泡灌洗液 (BAL)、血液、血清、血浆、尿液、鼻拭子、脑脊液、胸腔积液、滑膜液、腹膜液、羊 水、胃液、淋巴液、组织间液、组织勻浆、细胞提取物、唾液、痰液、粪便、生理分泌 物、眼泪、粘液、汗液、乳汁、精液、精液、阴道分泌物、来自溃疡和其它表面疹的液 体、水泡液和脓肿、以及组织提取物(包括正常的、恶性的和怀疑的组织或身体的任何 其它可能含有所关注的靶标颗粒的组成部分的活组织检查)。如细胞或组织培养物或培养 液等其它类似样本也是所关注的。在某些实施方式中，第二标记物包括生物标记物、生理学标记物或遗传标记 物。在某些实施方式中，第二标记物包括蛋白。在某些实施方式中，第一标记物与第二 标记物中的至少一个以小于lOpg/ml的浓度见于来自正常个体的样品中。在某些实施方 式中，第一标记物与第二标记物中的至少一个以小于lOOpg/ml的浓度见于来自正常个体 的样品中。在某些实施方式中，第一标记物与第二标记物中的至少一个以小于75pg/ml 的浓度见于来自正常个体的样品中。在某些实施方式中，第一标记物与第二标记物中的 至少一个以小于50pg/ml的浓度见于来自正常个体的样品中。在某些实施方式中，第一 标记物与第二标记物中的至少一个以小于25pg/ml的浓度见于来自正常个体的样品中。 在某些实施方式中，第一标记物与第二标记物中的至少一个以小于20pg/ml的浓度见于 来自正常个体的样品中。在某些实施方式中，第一标记物与第二标记物中的至少一个以 小于15pg/ml的浓度见于来自正常个体的样品中。在某些实施方式中，第一标记物与第 二标记物中的至少一个以小于10pg/ml的浓度见于来自正常个体的样品中。在某些实施 方式中，第一标记物与第二标记物中的至少一个以小于5pg/ml的浓度见于来自正常个体 的样品中。在某些实施方式中，第一标记物与第二标记物中的至少一个以小于2pg/ml的 浓度见于来自正常个体的样品中。在某些实施方式中，第一标记物与第二标记物中的至 少一个以小于lpg/ml的浓度见于来自正常个体的样品中。在某些实施方式中，第一标记 物与第二标记物中的至少一个以小于0.5pg/ml的浓度见于来自正常个体的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测或监测受试对象中的病况的方法，所述方法包括检测来自所述受试对象的第一样品中的第一标记物和检测第二标记物，其中所述第一标记物包含心脏肌钙蛋白－Ｉ（ｃＴｎＩ）或血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ），且其中所述第一标记物的检出限小于约２０ｐｇ／ｍｌ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2008-3-5 61/033,897;US 2008-3-21 61/038,7141.一种检测或监测受试对象中的病况的方法，所述方法包括检测来自所述受试对 象的第一样品中的第一标记物和检测第二标记物，其中所述第一标记物包含心脏肌钙蛋 白-I(CTnI)或血管内皮生长因子(VEGF)，且其中所述第一标记物的检出限小于约20pg/ ml ο2.如权利要求1所述的方法，其中对至少一个标记物的检测包括使所述样品与用于所 述标记物的标记接触并检测所述标记的存在或缺失，其中检测到所述标记的存在表明相 应的标记物的存在。3.如权利要求2所述的方法，其中所述标记包含荧光部分，且其中所述检测包括使所 述标记通过单分子检测器，其中所述单分子检测器包含(a)用于刺激所述荧光部分的电磁辐射源；(b)用于接收从所述电磁源发出的电磁辐射的巡查空间；和(c)与所述询查空间可操作地连接的电磁辐射检测器，该检测器用于确定受到刺激的 荧光部分的电磁特性。4.如权利要求1所述的方法，其中所述第一标记物的检出限为约lOpg/ml 约 0.01pg/ml。5.如权利要求1所述的方法，其中检出限的变差系数(CV)为约20% 约1%。6.如权利要求1所述的方法，其中所述样品的大小为约10μ 1 约0.1 μ 1。7.如权利要求1所述的方法，还包括将所述第一样品分为两个或更多个等分样品，并 在所述两个或更多个等分样品中检测至少一个标记物。8.如权利要求1所述的方法，其中所述样品包括血浆、血清、细胞溶解产物或组织样品。9.如权利要求1所述的方法，其中所述第二标记物包括生物标记物、生理学标记物或 遗传标记物。10.如权利要求1所述的方法，其中所述第二标记物包括蛋白。11.如权利要求10所述的方法，其中所述第一标记物与所述第二标记物中的至少一个 以小于lOpg/ml的浓度见于来自正常个体的样品中。12.如权利要求10所述的方法，其中所述第二标记物的检出限为约20pg/ml 约 0.01pg/ml。13.如权利要求10所述的方法，其中所述第二标记物包括B型利钠肽、IL-Iα、 IL-I β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFNl、cTnl、VEGF 、 胰岛素、GLP-1 (活 性)、GLP-I (完全)、TREMU 白细胞三烯 E4、AktU A β-40, A β-42, Fas 配体或 PSA。14.如权利要求10所述的方法，其中所述第二标记物是细胞因子。15.如权利要求14所述的方法，其中所述细胞因子是G-CSF、MIP-Ia、IL-10、 IL-22、IL-8、IL-5、IL-21、INF- Y 、 IL-15、IL-6, TNF-α、IL-7、GM-CSF、 IL-2、 IL-4、IL-I a、IL-12、IL-17 a、IL-I β 、MCP 、 IL-32 或 RANTES。16.如权利要求14所述的方法，其中所述细胞因子是IL-10、IL-8、INF-Y , IL-6, TNF- a、IL-7, IL-I α 或 IL-I β。17.如权利要求10所述的方法，其中所述第二标记物包括载脂蛋白、缺血修饰白蛋白(IMA)、纤连蛋白、C反应蛋白(CRP)、B型利钠肽(BNP)或髓过氧化物酶(MPO)。18.如权利要求1所述的方法，还包括测定第一标记物的浓度，和在第二标记物包含 蛋白时测定第二标记物的浓度。19.如权利要求1所述的方法，还包括在第二标记物包含蛋白时测定第一标记物浓度 与第二标记物浓度之比。20.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：菲利普J戈伊克斯，罗伯特普斯卡斯，约翰托德，理查德A利文斯顿，道格拉斯赫尔德，萨拉阿吉，
申请(专利权)人：神谷来克斯公司，
类型：发明
国别省市：US