酰化蛋白凝聚物及其用来减少免疫测定中的干扰的用途制造技术

用来减少免疫测定中非特定相互作用的含蛋白物质，其特征在于该减干扰物质是一种用－ＣＯ－Ｒ基团酰化的蛋白凝聚物，式中Ｒ是一个支化或无支化Ｃ↓［１］－Ｃ↓［４］烷基，该烷基可以有羧基、羟基、ＳＯ↓［３］Ｈ或ＰＯ↓［３］Ｈ↓［２］基团取代。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及酰化蛋白凝聚物、其制备方法、及其用作免疫测定法减干扰剂和结合剂，以及用来减少免疫测定中的干扰的用途以及相应的免疫检测方法。免疫检测方法近年来变得十分重要。它们用来以快速和准确的方式检测生物样品中药物、激素、蛋白、尤其传染性生物的存在。在所有免疫检测方法中，都是在第一特定结合配偶体，即待检测物质(被分析物或配体)，和专一地与该配体反应并与之结合的第二特定结合配偶体之间有一种特定结合反应。配体和与该配体结合的特定配偶体形成一个特定结合对，一般是抗原和抗体或抗体片断之间的配合物。在每个反应中可能有不止一种配体或一种结合配偶体彼此反应。这些特定结合反应是用不同方式检测的。一般来说，该特定结合反应的一种参与者是有标记的。普通标记方法使用放射性同位素、色原、荧光团或酶标记。在非均相免疫测定中，结合配偶体之一被固定在固相上。免疫测定中的一个难题是，在免疫测定的特定结合配偶体和样品、样品中所含附加成分与(可能)固相之间可能有所不希望的相互作用和非特定结合反应。这些相互作用一般导致背景信号增强和这些信号的较高散射，进而降低该测试的灵敏度和专一性。与标记结合配偶体的非特定相互作用也可能导致假阳性结果，这意味着甚至当一种被分析物不存在时也错误地记录这样一种被分析物的存在。为了减少免疫测定中的这些非特定相互作用，已经进行了各种尝试。一些时间以来已经知道，各种碳水化合物成分和各种蛋白质、蛋白质混合物或蛋白质部分以及它们的水解产物能减少免疫测定中测试成分与被分析物之间的非特定相互作用(例如，Robertson等人，Journal of Immun.Meth.26，1985，EP-A-260903，US-A-4，931，385)。使用蛋白质原部分和原水解产物的缺点是，其中所含的污染也可能导致该测试中的干扰。此外，用酶法产生的水解产物也可能受到用于其制造的蛋白酶污染。它们的质量也往往不均匀，因为裂解步骤是非常难以控制的。蛋白酶污染物会攻击测试成分，甚至少许数量也会对该测试的性能及其稳定性产生不利影响。EP-A-0331068描述了使用聚合免疫球蛋白(IgG)来减少特定干扰因子，如类风湿因子。然而，非特定相互作用，尤其是标记结合配偶体和被分析物或固相之间的非特定相互作用，无法以一种令人满意的方式消除。此外，人体和动物IgG的产生是复杂和昂贵的。为了减少免疫测定中的非特定相互作用，也已有人描述了化学改性蛋白、尤其琥珀酰化蛋白的使用(US-A-5,051,356,EP-A-525916)。然而，尤其在高分子被分析物如病毒抗原的测试中，先有技术尽管减干扰物质的浓度非常高，也不能确保令人满意地减少干扰。因此，本专利技术的一个目的是提供新型减干扰物质和/或减干扰剂，它们与从先有技术已知的那些相比，改善了免疫测定中干扰的消除。本专利技术尤其旨在提供能产生低空白值、减少信号散射、尤其当分析高分子被分析物时避免假阳性结果的减干扰物质。这个目的是借助于专门酰化的蛋白凝聚物实现的。本专利技术的主题是作为免疫测定法减干扰物质、用-CO-R基团酰化的蛋白凝聚物，式中R是一个支化或非支化C1-C4烷基，可以有羧基、羟基、SO3H或PO3H2基团取代。本专利技术的另一个主题是一种相应的免疫测定用减干扰剂，包括一种含蛋白的减干扰物质和一种缓冲剂，其特征是它含有按照本专利技术的一种或若干种酰化蛋白凝聚物。本专利技术的又一个主题是一种免疫测定用特定结合试剂，包括一个特定结合对中的一种配偶体，其特征是它还含有按照本专利技术的一种或若干种减干扰物质或减干扰剂。本专利技术的又一个主题是一种通过让本专利技术的减干扰物质或减干扰剂与用于免疫测定的一个特定结合对的特定结合配偶体接触而减少免疫测定中非特定相互作用的方法。本专利技术的一个具体主题是一种在减少非特定相互作用的同时测定样品中免疫配体的方法，它借助于1)让该配体的待测样品接触a)一种或若干种减干扰物质，或者一种或若干种含有减干扰物质和适当缓冲剂的减干扰剂，和b)特定结合对的一种或若干种特定结合配偶体，其中至少一种结合配偶体是有标记的，形成一种可检测结合对；2)测定标记结合对的存在或数量或一种特定结合对的自由标记结合配偶体，作为样品中配体存在或数量的量度，其特征在于该减干扰物质是一种用CO-R基团酰化的蛋白凝聚物，式中R是一个支化或非支化C1-C4烷基，可以有羧基、羟基、SO3H或PO3H2基团取代。配体是一种能与一种或若干种对应特定结合配偶体发生特定反应生成配合物的化学物质或生物物质。实例包括蛋白、肽、碳水化合物、毒素、半抗原、药物、病毒、真菌和细菌，它们的抗体或成分。本专利技术尤其适用于分析高分子配体，例如病毒、病毒标记，但也适用于分析激素，尤其多价蛋白，如HIV病毒、前列腺特有抗原(PSA)、促甲状腺激素(TSH)、癌胚抗原(CEA)、B型肝炎病毒(B型肝炎表面抗原，HBs)、α-胚蛋白(AFP)、人体绒膜促性腺激素(HCG)、促黄体激素(LH)、促滤泡激素(FSH)、促乳素、铁蛋白、胰岛素。样品一般是体液，如血液、血清、或血浆，唾液，尿，或其它体液。特定结合配偶体可以是能与另一种生物物质发生特定反应而形成特定结合对的任何一种生物结合配偶体或化学结合配偶体。它们包括抗体、抗体片段、抗原、半抗原、激素、抗生物素蛋白、生物素，或它们的衍生物。在本专利技术中，特定结合对的较好配偶体是能与抗原特定结合的抗体或抗体片断。免疫测定中特定结合配偶体的至少一种是有标记的。这种标记可以诸如通过放射性、化学发光、磷光、荧光、或电化学发光或一种可见颜色，直接或间接提供一种可测信号。特定结合配偶体也可以是间接可检测的，例如成为一种酶标记、生物素或抗生物素蛋白标记，它们参与一个或若干个反应，以产生一种可检测物质。酶标记较好，特别是过氧化酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶或碱性磷酸酯酶。另一种较好的标记是有化学发光、尤其电化学发光分子的标记。本专利技术的特征在于减干扰物质是用CO-R基团酰化的蛋白凝聚物。蛋白凝聚物要理解成这样一种凝聚物，其中相同或不同界定的蛋白单体聚合形成一种高分子颗粒。所谓界定，具体地说，就是把一种蛋白凝聚物理解成一种由至少2个、较好3～40,000个、尤其好的是30～600个蛋白单体组成的人造颗粒。它们以一种使之在水溶液中不会分解成单个分子的紧密方式相互结合。一种较好的方式是，这种蛋白凝聚物可溶于水。蛋白质的聚合和凝聚可以用加热方法或化学方法进行。在热聚合方法中，通过施加较高温度，使蛋白单体结合成凝聚物。蛋白质的热聚合详见EP-A-269092，用白蛋白作为实例。蛋白单体的化学聚合是用不含蛋白的均质或非均质双官能连接物分子进行的。这些蛋白的连接方法是专家们已知的，例如详见，GB-A-1505400，EP-A-0122209或EP-A-269092。蛋白单体与非均质双官能连接物连接的实例是与下列物质的反应二(顺丁烯二酰亚胺基)甲酯，辛二亚胺酸二甲酯，辛二酸二琥珀酰亚胺酯，戊二醛，3-(2-吡啶基连硫基)丙酸N-琥珀酰亚胺酯，N-(5-叠氨基-2-硝基苯甲酰)琥珀酰亚胺，4-(碘乙酰胺基)苯甲酸N-琥珀酰亚胺酯，或者顺丁烯二酰亚胺基-己酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MHS)或顺丁烯二酰亚胺基-苯甲酰-NHS(MBS)和3-乙酰硫代丙酸N-琥珀酰亚胺酯(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：D·施里帕，F·施米德，M·考夫曼，
申请(专利权)人：罗赫诊断器材股份有限公司，
类型：发明
国别省市：