本发明专利技术的试剂盒应用酶催化发光底物，通过检测发光底物产生的光信号代替酶联免疫分析中的显色底物的吸光度，具有与之同等的特异性，而检测光信号的灵敏度要高于检测显色底物的吸光度，可为甲状腺球蛋白的诊断提供更为特异、快速、可靠的依据。本发明专利技术提供了一种能够简便、快速、灵敏、稳定地检测甲状腺球蛋白的试剂盒及其制备方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医学免疫检测分析
，具体地提供了 一种人曱状腺球蛋白 酶促化学发光免疫测定试剂盒，适用于曱状腺球蛋白的酶促化学发光检测分析。
技术介绍
曱状腺球蛋白(Tg)是一分子量约为660kD的糖蛋白，在曱状腺主要激素如 曱状腺素、三碘曱腺原氨酸的合成中起激素原的作用。在曱状腺瘤、亚急性曱状 腺炎、桥本曱状腺炎和葛瑞夫氏病中，Tg的数目会增多；测量Tg的浓度水平有 助于婴儿天生甲状腺^f几能减退症状的治疗。目前测定Tg的方法有直接竟争固相放射免疫分析(RIA)和双抗体夹心免疫 放射分析法(IMRA)或酶联免疫分析法(ELISA),这些方法都会受到机体本身 的曱状腺球蛋白自身抗体的干扰，而且放射免疫分析方法存在对操作人员有放射 性危害、废弃物处理、产品保质期短、操作时间长等问题；酶联免疫分析法存在 灵敏度较低，操作步骤繁瑣，操作时间周期长，易造成结果假阳性或假阴性等问 题。从而需要人们寻找一种更为安全、灵敏和可靠的免疫检测分析方法，而最近 几年使用化学发光为检测技术的测定试剂盒开始初露端倪。把高灵敏的化学发光分析方法和特异性强的免疫分析方法相结合发展起来的一项 具有化学发光分析的高灵敏度和免疫分析法的高选择性的新的免疫分析技术。 1985年第一代化学发光免疫分析试剂盒研制成功并投放市场。进入九十年代，化 学发光免疫分析试剂盒的研制和自动化测量仪的生产取得了突破性进展，从而进 入高速发展阶段。化学发光免疫分析是继荧光、放射性同位素和酶免疫分析之后 发展起来的一项新的免疫分析技术，根据大量的实验结果及临床应用资料，从实 用性、稳定性、准确性及发展前景来看，在非放射性标记分析技术中化学发光免疫分析处于领先地位，代表了当今世界发展的方向和潮流，它不仅具有免疫反应 的特异性，而且具有化学发光反应的高灵敏性(检测限可达l(r"-l(T'8mol/L)。化 学发光免疫分析技术具有灵敏度高、快速、准确、重复性好、效期长并安全无毒 无污染等优点，成为取代放射免疫分析和酶免疫分析技术的首选。本专利技术用高活性的酶标记抗体，以1, 2-二氧乙烷类衍生物或鲁米诺、异鲁 米诺及增强剂为发光底物，检测化学发光信号，其灵敏度远远高于酶联免疫方法 中检测显色底物的吸光度的灵敏度。本专利技术既有效地利用了高特异的免疫方应， 又使用了化学发光技术确保了检测的灵敏度，使用本试剂盒可以快速灵敏地检测 血清样本中甲状腺球蛋白的含量，为临床诊断提供有价值的参考指标。
技术实现思路
首先，本专利技术提供了一种化学发光免疫分析测定曱状腺球蛋白的试剂盒。 本专利技术的试剂盒包括以下组分曱状腺球蛋白校准品；曱状腺球蛋白抗体包被的固相载体；酶标记的甲状腺球蛋白抗体；化学发光底物液；以及浓缩洗涂液。 根据本专利技术的试剂盒，所述固相载体为微孔板、塑料珠或塑料管。 根据本专利技术的试剂盒，所述酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶，优选的所述酶为辣根过氧化物酶。根据本专利技术的试剂盒，所述化学发光底物液的发光剂为1,2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺。其次，本专利技术提供了制备上述试剂盒的方法。其步骤如下以曱状腺球蛋白纯品配制校准品；以曱状腺球蛋白抗体包被固 相载体；制备酶标记的甲状腺球蛋白抗体；配制化学发光底物液；分装上述组分 并组装为试剂盒。根据本专利技术的方法，所述曱状腺球蛋白抗体包被固相载体的步骤包括以下 步骤采用0. 020M pH值为4. 2的磷酸緩冲液与适当浓度的甲状腺球蛋白抗体 混合制成包被液，并将其负载于固相载体上，使用封闭液封闭。配制封闭液为，lOOOmL所述封闭液中包含0. 2g NaH2P04 2H20、 2. 9g NaH2P04 12H20、 10g水解明胶和lmL生物防腐剂，pH值为7.0-7.6,然后 将所得封闭液负载于上述固相载体上。在上述方法中，所述固相载体为微孔板、塑料珠或塑料管，优选的，曱 状腺球蛋白抗体包被的微孔板为96孔的微孔板条。在上述方法中，所述酶为碱性磷酸酶或辣才艮过氧化物酶，优选的，所述 酶为辣根过氧化物酶。所述化学发光底物液的发光剂为1, 2-二氧乙烷类衍生物或鲁米诺、异鲁米诺。在上述方法中，优选的，所述化学发光底物液包含A液和B液，其中，lOOOmL 所述化学发光底物A液，包括1. 7716g鲁米诺、0. 051g 4-羟基联苯、0. 012g 4-碘苯硼酸、11.4g硼酸、4. 9g硼砂，其pH值为8. 0~ 10. 0; lOOOmL所述化学发光 底物B液，包括0. 329g过氧化脲、lml Tween20、 51. 58g Na2HP04 12H20、 8. 74g NaH2P04 . 2H20，其pH值为7. 0 ~ 7. 6。在上述方法中，所述浓缩洗涤液包括Na2HP04 12H20， 87g; NaH2P04 2H20, 3g; NaCl, 240g; Tween-20， 1. 5mL; Proclin 300, 1. 5mL;双蒸水，定溶至lOOOmL; 调整pH至7. 2-7. 4。使用时用双蒸水稀释30倍。上述方法中，所述配制曱状腺球蛋白校准品的原料为标准级，纯度不低于90%。本专利技术的试剂盒应用酶催化发光底物，通过检测发光底物产生的光信号代替 酶联免疫分析中的显色底物，具有与酶联免疫分析同等的特异性，而检测光信号 的灵敏度要比检测显色底物的吸光度要灵敏的多，可为曱状腺球蛋白抗体的诊断 提供更为特异、快速、可靠的依据。本专利技术解决了以往检测方法的缺陷，即去除 了放射免疫分析对操作人员的放射性危害，解决的废弃物的处理问题，使产品的 保存期更长，大大提高了分析方法的灵敏度，简化了操作步骤并节省了操作时间， 提供了一种能够简便、快速、灵敏、稳定地检测曱状腺球蛋白的试剂盒。附图说明图1为实施例1所制备的试剂盒校准曲线的线性图。 具体实施例方式实施例1制备本专利技术的曱状腺球蛋白化学发光免疫分析测定试剂盒 一、酶标抗体的制备及酶标抗体浓度的选定1. 曱状腺球蛋白抗体用戊二醛氧化法与辣根过氧化物酶偶联，用PBS充分透析， 加等量优质丙三醇，-20。C以下保存。具体的1)将lOmg HRP溶于0. 2mL含1. 25%戊二醛的0. lmol/L PH 6. 8的PBS中，置 室温18小时，充分透析除去多余戊二趁；2)加生理盐水至lmL,然后加入5mg纯 化的抗体球蛋白及0. lmLPH 9. 6的1 mol/L碳酸盐緩沖液，混合后于4'C冰箱放置 24小时；3)加入0. lmL 0. 2 mol/L的赖氨酸溶液，室温置2小时；4)用PH7. 2、 0.15 mol/L PBS充分透析，藉离心除去沉淀，上清即为酶结合物。2. 酶标抗体稀释液的配制三羟甲基氨基曱烷C4H N0312.1 g盐酸HC1调PH至7. 5氟化钠NaCl8.8 g牛血清白蛋白BSA10 gProclin3001. 0 mL食品红0. 1 mL纯化水H20加至1000 mL3.采用方阵法选择酶标抗体的工作浓度范围为1: 500 - 1: 5000。 二、曱状腺球蛋白校准品的制备用含100。/。小牛血清稀释甲状腺球蛋白纯品至2、 10、 40、 100、 250 ng/mL， So为稀释液，分装成每瓶O. 5mL， -20。C保存。三、固相微孔本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种甲状腺球蛋白化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：甲状腺球蛋白校准品；甲状腺球蛋白抗体包被的固相载体；酶标记的甲状腺球蛋白抗体；化学发光底物液；以及浓缩洗涤液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：靳辉，应希堂，宋胜利，胡国茂，郑金来，于尚永，
申请(专利权)人：北京科美东雅生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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