本发明专利技术公开一种组蛋白乙酰化修饰的MT2A基因组检测试剂盒及引物对，该检测试剂盒，包括如序列表SEQ ID No：1至SEQ ID No：2所示的引物对、阳性引物对、染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP)试剂组、核酸提取试剂和PCR反应试剂。本方法可以特异地检测MT2A基因组DNA相关的组蛋白乙酰化水平，同时本发明专利技术的试剂盒还能够对MT2A基因组DNA相关的组蛋白乙酰化水平进行特异、定量检测，检测结果可以为肿瘤患者治疗的方案制定提供依据，也为肿瘤患者对药物治疗的预后提供了评价方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于组蛋白乙酰化修饰的基因组检测，更具体地，涉及组蛋白乙酰化修饰相关的MT2A启动子区的基因检测。
技术介绍
胃癌是我国最常见的高发肿瘤之一，其死亡率在世界和中国均占各类恶性肿瘤死因的第二位(BrayF,etal2012；13(8):790-801)。由于缺乏早期发现的有效检测手段，在就诊患者中，90％以上处于中晚期。对于中晚期的患者，临床治疗多以化疗为主，这样的治疗方式虽然能在一定程度上抑制肿瘤的发展，但化疗所产生的副作用以及后期病人对化疗药的耐受，是不可忽视并亟需解决的问题，因此鉴别能够提高化疗敏感性的分子标志物及治疗靶点具有重要的临床应用价值(OrdituraM,etal，2014Feb21；20(7):1635-1649)。胃癌发生发展的分子机制涉及到癌基因与抑癌基因的表达失衡、引起细胞信号转导通路的异常调变等，是遗传学和表观遗传学(Epigenetics)渐进性异常改变的累积过程。肿瘤表观遗传学的改变不涉及核苷酸序列的变化，而是通过DNA甲基化(DNAmethylation)、组蛋白修饰(Histonemodification)，非编码RNA(Non-codingRNA，ncRNA)及重塑蛋白质与DNA或其它分子的相互作用等机制，从而影响和调控相关基因的表达与功能，并最终影响遗传特征。与基因突变不同，表观遗传学改变所致的表型变化在一定条件下可以逆转，这一特性为疾病尤其是肿瘤的早期诊断与防治提供了新的靶标(RiveraCM,etal，Cell.2013Sep26；155(1):39-55；ChoiJD,etal，GenomicsInform2013Dec；11(4):164-173；PlassC,etal，NatRevGenet.2013Nov；14(11):765-80.)。因此，研究基因差异表达及其表观遗传学调控在胃癌发生、发展中的作用，对胃癌的监测预警、分子分型、个体化诊断及精准医疗都具有十分重要的意义。研究表明抑癌基因(Tumorsuppressorgene，TSG)启动子区CpG岛异常高甲基化及组蛋白乙酰化修饰异常所致的基因表达与功能异常对肿瘤的发生发展，特别是癌症发生的初期，起到了关键作用，并作为表观遗传标志物与靶点应用于肿瘤的分子诊断与治疗。组蛋白乙酰化水平与靶基因的转录活性高低与肿瘤抑制基因的沉默状态直接相关。组蛋白乙酰化及去乙酰化是表观遗传学的一个重要组成部分，组蛋白乙酰化是通过组蛋白乙酰基转移酶(Histoneacetyltransferases，HATs)和组蛋白去乙酰化酶(Histonedeacetylases，HDACs)协同完成的，常见于组蛋白H3的赖氨酸9、14、18、23(H3K9ac、H3K14ac、H3K18ac、H3K23ac)和H4的赖氨酸5、8、12、16(H4K5ac、H4K8ac、H4K12ac、H4K16ac)等位点。组蛋白的乙酰化和去乙酰化之间的动态平衡是维持体内基因正常表达的重要方面，对细胞分化，增殖与转移有着重要意义，其中任何一个方面的失衡都可能导致肿瘤的产生。国内外有研究报道HDAC1和HDAC2在胃癌中高表达。HDAC1和HDAC2在具有高度氨基酸同源性的前提下，二者常常形成异二聚体参与组成蛋白复合体，如Sin、NuRD和CoREST。许多涉及细胞周期调控，分化和发展的转录因子与HDAC1、HDAC2或HDAC1/2复合体有直接关系。siRNA干扰HDAC1或HDAC2，在影响该蛋白表达量的同时破坏了HDAC1或HDAC2参与组成的转录抑制复合体的完整性和功能，从而影响胃癌细胞的增殖、凋亡、分化与转移等特性。HDAC抑制剂作用机理是HDAC1能使参与组成的复合蛋白体缺乏完整性，进而影响了该蛋白的功能。siHDAC1会导致超乙酰化的发生，从而引起部分类型的肿瘤细胞凋亡。金属硫蛋白家族(Metallothioneins,MT)是一类富含半胱氨酸的小分子(6-7kDa)金属结合蛋白，有四个主要亚型：MT-1(MT-1A,-B,-E,-F,-H,-I,-J,-K,-L和-X)、MT2A、MT-3和MT-4，与MT-3和MT-4呈现的局限性表达相比，MT-1和MT2A在人体广泛表达[12]。MTs是机体的一种保护性蛋白，参与多种应激反应，其基因启动子区域含有多种调控元件，如金属调控元件(metalregulatoryelements，MREs)、抗氧化反应元件、糖皮质激素反应元件和转录激酶反应元件等，MT这种复杂的结构基础决定了其容易被多种因素，如金属离子、激素、细胞因子、烷化剂等诱导的特性(BabulaP,etal，Metallomics.2012Aug；4(8):739-50；Ruttkay-NedeckyB,etal，Internationaljournalofmolecularsciences.2013；14(3):6044-66)。金属硫蛋白分子参与体内金属平衡和解毒，与细胞凋亡与增殖关系密切等(BabulaP,etal，Metallomics.2012Aug；4(8):739-50；Ruttkay-NedeckyB,etal，Internationaljournalofmolecularsciences.2013；14(3):6044-66；SharmaS,etal，IntJNanomedicine.2013；8:1477-88)。多项研究表明MT分子在肿瘤发生发展、癌症患者预后、肿瘤化疗耐药等方面具有重要作用(PedersenMO,etal，Progressinhistochemistryandcytochemistry.2009；44(1):29-64；JanssenAM,etal，TheJournalofpathology.2000；192(3):293-300)，提示MT可能与化疗的敏感性相关，因此被视为潜在的早期敏感生物标记(SharmaS,etal，IntJNanomedicine.2013；8:1477-88)。抑癌基因的表观沉默是胃癌发生发展的重要机制之一(GigekCO,etal，Epigenomics.2012Jun；4(3):279-94；AliZ,etal，JNanosciNanotechnol.2013Jan；13(1):40-51)。MTs被报导在人源肝细胞癌中作为抑癌基因呈现甲基化沉默状态，并可能作为预后标志物(ParkY,etal，Journalofgastroenterologyandhepatology.2013；28(9):1565-72.,27；SakamotoLH,etal，PediatrRes.2010Apr；67(4):387-93；KandaM,etal，IntJOncol.2009Sep；35(3):477-83.)；MT1F在结肠癌中具有抑癌基因作用，因其等位基因杂合性丢失(Lossofheterozygosity)而导致表达下降(YanDW,etal，BiochimBiophysActa.2012Jun；1822(6):918-26)。一项在人源肝细胞癌的研究表明，表观遗传沉默引起的细胞中MT1M表达下降，可导致N本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种MT2A基因组蛋白乙酰化修饰的检测引物对，其特征在于，该引物对如序列表SEQ ID No：1和SEQ ID No：2所示。
【技术特征摘要】
1.一种MT2A基因组蛋白乙酰化修饰的检测引物对，其特征在于，该引物对如序列表SEQIDNo：1和SEQIDNo：2所示。2.一种包含权利要求1所述引物对的检测试剂盒，其特征在于，包括如序列表SEQIDNo：1至SEQIDNo：2所示的引物对和阳性对照引物对。3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括染色质免疫共沉淀试剂组。4.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括核酸提取试剂。5.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括PCR反应试剂。6.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照引物对如序列表SEQIDNo：3和SEQIDNo：4所示。7.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述染色质免疫共沉淀试剂组包括样品洗涤缓冲液、免疫复合物沉淀洗涤缓冲液、裂解缓冲液、附着有蛋白A的珠子、稀释缓冲液、蛋白酶抑制剂、乙酰化组蛋白的抗体、对照IgG和洗脱缓冲液。8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄家强，吕有勇，潘元明，林舒晔，邢蕊，
申请(专利权)人：北京交通大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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