多肿瘤抑制因子基因种系突变及检测该基因癌肿倾向性的方法技术

本发明专利技术涉及人癌肿中的多肿瘤抑制因子（简称ＭＴＳ）基因的体细胞突变及其在人癌肿的诊断和预后方面的应用。本发明专利技术还涉及ＭＴＳ基因的种系突变及其在诊断癌肿发生的倾向方面的应用。本发明专利技术还涉及ＭＴＳ基因突变的人癌肿的治疗，其中包括基因治疗、蛋白质置换治疗和蛋白质模拟。最后，本发明专利技术涉及筛选用于癌肿治疗的药物。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
与相关申请的关系本专利技术是专利申请No.08/251,938(1994年6月1日申请)、08/215,087(1994年3月18日申请)和08/215,086(1994年3月18日申请)的部分续展申请，上述专利申请在此引用作为参考。专利申请No.08/251,938又是专利申请No.08/227,369(1994年4月14日申请)的部分续展申请，而专利申请No.08/227,369又是专利申请No.08/214,582(1994年3月18日申请)的部分续展申请，这些专利申请也在此引用作为参考。专利技术背景本专利技术涉及人癌肿中多肿瘤抑制因子(Multiple Tumor Sup-pressor，简称MTS)基因的体细胞突变及其在人癌肿的诊断和预后方面的应用。本专利技术还涉及MTS基因的种系(germline)突变及其在诊断癌肿发生的倾向方面的应用，这些癌肿包括黑素瘤、眼黑素瘤、白血病、星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、淋巴瘤、神经胶质瘤、Hodgkin氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、肉瘤、肌肉瘤、胆管癌、鳞状上皮细胞癌、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)以及胰腺、乳房、脑、前列腺、膀胱、甲状腺、卵巢、子宫、睾丸、肾、胃、结肠和直肠的癌肿。本专利技术还涉及MTS基因突变的人癌肿的治疗，其中包括基因治疗、蛋白质置换治疗和蛋白质模拟物(mimetics)。最后，本专利技术还涉及筛选用于癌肿治疗的药物。此处用来说明本专利技术的背景、尤其用来对实施提供额外的细节出版物和其他材料，在本申请中结合引用作为参考，并且为了方便起见，在下面的文章中指出而且分别归类在所附的文献清单中。癌肿遗传学非常复杂，涉及多个显性的、转化状态的正调节物(癌基因)以及多个隐性的、负调节物(肿瘤抑制基因)。已经确定了超过100种的癌基因。被鉴定的肿瘤抑制基因还不到12种，但是据估计该数目会增加至超过50种(Knudson，1993)。牵涉这么多基因强调了在细胞中为了维持正常组织的完整性而发挥作用的生长调控机制的复杂性。这种复杂性还通过另一种方式体现。迄今为止，还没有单个基因参与所有的、或者绝大多数的人癌肿的进程。最常见的癌基因突变是在H-ras基因中，在所有实体瘤的10—15％中有此种突变发现(Anderson et al.，1992)。突变频率最高的肿瘤抑制基因是p53基因，在约50％的所有肿瘤中发生突变。没有一个共同的针对所有转化细胞的靶目标，就不可能寻找到能够摧毁或逆转癌细胞而又不损害正常细胞的“魔弹”。新一代特异性导向式抗肿瘤药物的希望便寄托在能够鉴定出在细胞分裂调控中起普遍作用的肿瘤抑制基因或癌基因。已经克隆和确定的肿瘤抑制基因影响下列癌肿的易感性1)成视网膜细胞瘤(RB1)；2)Wilm氏瘤(WT1)；3)Li-Fraumeni(TP53)；4)家族性腺瘤息肉症(APC)；5)I型神经纤维瘤病(NF1)；6)II型神经纤维瘤(NF2)；7)von Hippel-Lindau综合征(VHL)和8)2A型多发性内分泌腺瘤病(MEN2A)。已经确定遗传图谱但还没有被分离的肿瘤抑制因子的基因座包括下列基因I型多发性内分泌腺瘤病(MEN1)；II型Lynch癌家族性综合征(LCFS2)；家族性乳房癌(BRCA1)；神经母细胞瘤(NB)；基底细胞痣综合征(BCNS)；Beckwith-Wiedemann综合征(BWS)；肾细胞癌(RCC)；I型结节性硬化(TSC1)和II型结节性硬化(TSC2)。目前已经定性的肿瘤抑制基因编码产物与多种蛋白质类型具有相似性，其中包括DNA结合蛋白(WT1)、辅助性转录调节蛋白(RB1)、GTP酶活化蛋白(又称为GAP)(NF1)、细胞骨架组份(NF2)、膜结合受体激酶(MEN2A)，其他的编码产物与已知的蛋白质没有明显的相似性(APC和VHL)。在大多数情况下，最初通过遗传研究而鉴别的肿瘤抑制基因已表明在某些偶发的肿瘤中是缺失的或突变的。该结果暗示，染色体异常的区域可以表明在癌肿的遗传倾向和偶发癌肿中所涉及重要的肿瘤抑制基因的位置。迄今为止确定的数种肿瘤抑制基因的特征之一是它们在某些肿瘤类型中高频率地缺失。缺失常常涉及失去一个等位基因，即所谓的杂合性丢失(loss of heterozygosity，简称LOH)，但是也涉及两个等位基因的纯合缺失(homozygous deletion)。对于LOH，余下的等位基因被认为不起作用，其原因或者是因为已有的遗传突变，或者是因为第二次的偶发突变。黑素瘤是一种常见的癌肿，每100个美国人中有1人得此病(American Cancer Society，1992)。环境影响如暴露于紫外线对于黑素瘤的发生起重要作用，但是遗传也是决定因素。家族性黑素瘤的一个基因即MLM，已经被定位于染色体9p21(Cannon-Albright etal.，1992；Nancarrow et al.，1993；Gruis et al.，1993；goldsteinet al.，1994)。如果MLM基因座具有一个倾向性的等位基因，则患黑素瘤的可能性增加约50倍。MLM是数目日益增长的肿瘤抑制基因家族中的一员。黑素瘤的倾向性按显性孟德尔性状进行遗传，但是倾向性的MLM突变被认为按最初由Knudson(1971)提出的方式呈现为体细胞的隐性等位基因。在携带一个野生型和一个突变型MLM等位基因的倾向性个体中，分裂的细胞经过了第二次的突变事件，该事件涉及MLM野生型拷贝的丢失或失活，从而暴露出可遗传的突变型MLM等位基因。相反，单一的野生型拷贝基因可以防止发生恶性肿瘤。在9p21处MLM附近的染色体异常已经广泛地在几种不同的肿瘤类型中被确定，包括神经胶质瘤细胞系、非小细胞肺细胞系和急性成淋巴细胞白血病细胞系(Olopade et al.，1992；Olopade et al.，1993；Lukeis et al.，1990；Diaz et al.，1991；Middleton et al.，1991；Fountain et al.，1992；Cheng et al.，1993；James et al.，1993)。因此，依据在非黑素瘤肿瘤细胞中9p21染色体异常的频率，MLM区域可能含有一个(或多个)参与至少几种不同肿瘤类型进展的基因。这些事件涉及LOH以及高频率的纯合缺失。组织中的细胞在一生中只有三种重要的选择生长并分裂，不生长但维持活着，或者细胞程序死亡。不适当的生长和分裂或者细胞在该死亡的时候而不死亡都会导致肿瘤。一种控制肿瘤生长的机制是直接调控细胞周期。例如，那些控制决定引发DNA复制的基因是癌基因或肿瘤抑制基因的有力候选者，其取决于它们在该过程中起刺激还是抑制作用。在细胞周期(G1，S，G2和M期)中，真核细胞的进程被一系列细胞周期蛋白(cyclin)/依赖细胞周期蛋白的激酶(cyclin-dependent kinase，简称Cdk)复合物的依次地形成、激活和随后失活所控制。已表明，细胞周期蛋白D′s/Cdk2，4，5、细胞周期蛋白E/Cdk2、细胞周期蛋白A/Cdk2和细胞周期蛋白B/A/Cdk2涉及该过程。细胞周期蛋白D′s和Cdk2、Cdk4和Cdk5涉及从G1向S的转变，即当细胞生长并决定是否开始DNA复制本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在哺乳动物中诊断与发生癌肿的倾向性相关的多态性的方法，这些癌肿包括如黑素瘤、白血病、星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、淋巴瘤、神经胶质瘤、Ｈｏｄｇｋｉｎ氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病以及胰腺、乳房、甲状腺、卵巢、子宫、睾丸、肾、胃和直肠的癌肿，其特征在于，包括：在哺乳动物样品中检测野生型ＭＴＳ基因或其表达产物的种系改变，该改变即表示存在患癌肿的倾向。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：MH斯科尔尼克，LA坎农奥尔布赖特，A坎巴，
申请(专利权)人：犹他大学研究基金会，亿万遗传股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]