一种检测特定部位体液中特异性抗体含量的方法技术

本发明专利技术涉及生物医学科学研究及临床应用领域，具体涉及一种检测特定部位体液中特异性抗体含量的方法。本发明专利技术的目的是提供一种操作简单，准确迅速的检测特定部位体液中特异性抗体含量的方法。本发明专利技术采取的技术方案是：一种检测特定部位体液中特异性抗体含量的方法，其特征在于：①对载有不同个体的同一类型组织标本的芯片进行抗原修复处理；②在芯片上加足量待测血清，４℃保温过夜或室温下保温１ｈ－６ｈ也可３７℃保湿３０ｍ－３ｈ后洗涤；③加经过相应标记方式处理过的抗人Ｉｇ抗体，４℃保温过夜或室温保温１－６ｈ或３７℃保湿３０ｍ－３ｈ后洗涤；④以正常人血清涂片作为阳性对照，以正常组织标本的芯片作为阴性对照，进行观察计数。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学科学研究及临床应用领域，具体涉及。癌症治疗效果的好坏主要取决于肿瘤负荷的大小和肿瘤所侵及的范围，肿瘤的大小和所浸及的范围又与发现的时间密切相关，发现的愈早，肿瘤负荷及其所浸及的范围就愈小，治疗的效果就愈好；反之，如果发现的愈晚，肿瘤负荷及其所侵及的范围就愈大，治疗的效果就会愈差。研究发现，肿瘤细胞与正常细胞的基因表达存在着较大的差异，这种表达差异进一步表现为肿瘤细胞表面出现了异常表达的蛋白质分子，(或)含量比正常细胞明显增加，这些肿瘤标志物与正常细胞中的分子存在较大差异，因此这种差异可以被机体的免疫系统所识别，继而对其产生特异性抗体或致敏淋巴细胞。目前通过免疫组织化学，酶联免疫分析(ELISA)或放射免疫分析(RIA)等方法均可对肿瘤标志物的含量进行检测，然后用于肿瘤的诊断、鉴别诊断或早期发现。但由于受检测手段的限制，临床上发现的早期肿瘤病例仍然较少，从而使临床治疗面临较大压力。而对特异性抗体的检测经检索国内外十年专利文献尚未发现与本发现相同或类似的文献报道。本专利技术的目的是提供一种操作简单，准确迅速的检测特定部位体液中特异性抗体含量的方法。为了实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是，其特征在于①对载有不同个体的同一类型组织标本的芯片进行抗原修复处理；②在芯片上加足量待测血清，4℃保温过夜或室温下保温1-6h或37℃保湿30m-3h后洗涤；③加经过相应标记方式处理过的抗人Ig抗体，4℃保温过夜或室温保温1-6h或37℃保湿30m-3h后洗涤；④以正常人血清涂片作为阳性对照，以正常组织标本的芯片作为阴性对照，进行观察计数。所述抗原修复是90℃微波、高压水浴或蛋白酶消化等方式。4℃保湿过夜或室温保湿1-6小时或37℃保湿30m-3h后洗涤，以除去未结合的非特异性抗体。所述抗人Ig抗体标记是采用辣根过氧化物酶或其他酶、生物素、同位素、发光化学物质或各种荧光色素等方式。下面将结合具体实施方式对本专利技术作详细说明，但本专利技术并不局限于以下实施例2用于胃癌病人体液中特异性抗体含量的检测将80个不同个体的胃癌组织标本排列在一张玻片上，制成胃癌组织芯片，其中68个是相同或不同病理类型的不同个体的胃癌组织标本，包括26例腺癌，17腺鳞癌，14例鳞状细胞癌，5例未分化癌，4例类癌，还有12个是不同个体的不同组织来源的正常对照组织标本。其中包括乳腺、心、脑、肌肉、肾、甲状腺、肾上腺、前列腺、肝、脾、肺、膀胱等。胃癌组织芯片先经常规脱蜡和水化之后进行抗原修复，抗原修复使用90℃微波和高压水浴两种方法结合处理，其方法同传统免疫组化方法。然后加待测人员空腹静脉血清200μl，4℃保湿过夜，PBS洗涤以除去未结合的自身抗肿瘤细胞抗原的抗体，加鼠抗人IgG单(多)克隆抗体，37℃保湿1小时20分钟后洗涤，再加生物素标记过的抗鼠IgG抗体即第二抗体，37℃保湿1小时后洗涤，加HRP标记的亲和素后洗涤，再加DAB底物进行显色，洗涤后进行观察和计数。以正常人血清涂片作为阳性对照，以不加待测血清的同一种组织芯片作为阴性对照，也可用组织芯片上其他正常组织作为阴性对照。结果判定为1％～5％肿瘤细胞着色者为弱阳性，以“+”表示；6％～10％肿瘤细胞着色者为阳性，以“++”表示；11％～15％肿瘤细胞着色者为强阳性，以“+++”表示。正常对照组织应全部阴性。这样同时用多张相同的组织芯片和抗不同类型的多种人Ig抗体就可以检测待测血清中与胃癌相关的自身抗癌胚抗原(CEA)、肿瘤相关糖抗原CA50、CA19-9、CA242、CA72-4、变异的P53蛋白、或其他抗肿瘤细胞表面抗原的未知自身抗肿瘤细胞抗原的抗体，包括IgG、IgM或其他类型的自身抗体均可用此法进行检测。若出现阳性结果，说明待测血清中具有抗肿瘤细胞某种抗原的自身抗肿瘤抗体的存在及其含量的多少。实施例3用于肝癌病人体液中特异性抗体含量的检测将90个不同个体的肝癌组织标本排列在一张玻片上，制成肝癌组织芯片，其中78个是相同或不同病理类型的不同个体的肝癌组织标本，包括40例肝细胞型，31例胆管细胞型，7例混合细胞型，还有12个是不同个体的不同组织来源的正常对照组织标本。其中包括乳腺、心、脑、肌肉、肾、甲状腺、肾上腺、前列腺、肝、脾、肺、膀胱等。肝癌组织芯片先经常规脱蜡和水化处理之后进行抗原修复，抗原修复用蛋白酶消化10分钟，然后加待测血清250μl，4℃保湿过夜，PBS洗涤以除去未结合的非特异性抗体，加鼠抗人IgG单(多)克隆抗体，37℃保湿50分钟后洗涤，再加荧光色素标记的抗鼠IgG抗体即第二抗体，37℃保湿50分钟后洗涤，用荧光显微镜进行观察和计数。以正常人血清涂片作为阳性对照，以不加待测血清的同一种组织芯片作为阴性对照，也可用组织芯片上其他正常组织作为阴性对照。结果判定为1％～5％肿瘤细胞着色荧光强度大于对照1倍以上者为弱阳性，以“+”表示；6％～10％肿瘤细胞着色或荧光强度大于对照2倍以上者为阳性，以“++”表示；11％～15％肿瘤细胞着色或荧光强度大于对照3倍以上者为强阳性，以“+++”表示。正常对照组织应全部阴性。主要月于检测待测血清中自身抗甲胎蛋白(AFP)抗原的抗体。若出现阳性结果，说明待测血清中具有抗肿瘤细胞AFP抗原的自身抗肿瘤抗体存在。若同时用多张相同的组织芯片和抗不同类型的多种人Ig抗体就可以同时检测待测血清中与肝癌相关的自身抗甲胎蛋白(AFP)、γ-谷氨酰转移酶同功酶II(γ-GT II)、异常凝血酶原(DCP)、碱性磷酸酶同功酶I(ALP-I)、5’-核苷酸磷酸二酯酶同功酶V，VI(5’-NPDaseV，VI)、胎盘型谷胱甘肽S转移酶(GST-P)或其他抗肿瘤细胞表面抗原的未知自身抗体，包括IgG、IgM或其他类型的自身抗肿瘤细胞抗原的抗体均可用此法进行检测。若出现阳性结果，说明待测血清中具有抗肿瘤细胞某种抗原的自身抗肿瘤抗体的存在及其含量的多少。实施例4用于乳腺癌病人体液中特异性抗体含量的检测将100个不同个体的乳腺癌组织标本排列在一张玻片上，制成乳腺癌组织芯片，其中88个是相同或不同病理类型的不同个体的乳腺癌组织标本，包括32例浸润性小叶癌，20例浸润性导管癌，12例硬癌，10例髓样癌，8例单纯癌，6例腺癌；还有12个是不同个体的不同组织来源的正常对照组织样本。其中包括乳腺、心、脑、肌肉、肾、甲状腺、肾上腺、前列腺、肝、脾、肺、膀胱等。乳腺癌组织芯片先经常规脱蜡和水化，抗原修复使用先用90℃微波5分钟，再用蛋白酶消化5分钟，然后加待测血清250μ1，37℃保湿45分钟，PBS洗涤以除去未结合的非特异性抗体，加羊抗人IgG单(多)克隆抗体，37℃保湿后洗涤，再加发光化学物质标记过的抗羊IgG抗体即第二抗体，37℃保湿45分钟后洗涤，用光敏显微镜进行观察和计数。以正常人血清涂片作为阳性对照，以不加待测血清的同一种组织芯片作为阴性对照，也可用组织芯片上其他正常组织作为阴性对照。结果判定为1％～5％肿瘤细胞有发光信号或发光强度大于对照1倍以上者为弱阳性，以“+”表示；6％～10％肿瘤细胞有发光信号或发光强度大于对照2倍以上者为阳性，以“++”表示；11％～15％肿瘤细胞有发光信号或发光强度大于对照3倍以上者为强阳性，以“+++”表示。正常对本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测特定部位体液中特异性抗体含量的方法，其特征在于：①对载有不同个体的同一类型组织标本的芯片进行抗原修复处理；②在芯片上加足量待测血清，４℃保温过夜或室温下保温１～６ｈ或３７℃保湿３０分钟～３小时后洗涤；③加经过相应标记方式处理过的抗人Ｉｇ抗体，４℃保温过夜或室温保温１～６ｈ或３７℃保湿３０分钟～３小时后洗涤；④以正常人血清涂片作为阳性对照，以正常组织标本的芯片作为阴性对照，进行观察计数。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李军，步雪，王伟华，
申请(专利权)人：陕西超英生物医学研究开发有限公司，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]