本发明专利技术提供编码双并四氢呋喃型木脂体4位特异性葡萄糖基转移酶的多核苷酸等。所述多核苷酸含有：包含序列号3或5表示的碱基序列的多核苷酸或编码包含序列号4或6表示的氨基酸序列的蛋白质的多核苷酸。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及来自连翘(> > ￥ 3々)的双并四氢呋喃型木脂体4位特异性葡萄糖基转移酶(7 α 7，>型彡V f > 4位々^ 二一 7転移酵素)、编码该酶的多核苷酸、含有该多核苷酸的载体以及使用该载体得到的转化体等。
技术介绍
木脂体作为植物次级代谢产物中的一种在植物界中广泛分布(非专利文献1 Umezawa, T. (2003) Phytochem. Rev. 2，371-390)，其中具有有用的生物活性的木脂体已被用作药品或健康食品。例如，已知在胡麻科(pedaliaceae)芝麻(sesamum indicum)中含有的主要的双并四氢呋喃型木脂体具有抗氧化性、改善脂质代谢、保护肝功能等功效，并且已在市售(非专利文献 2 :Nakai，M. et al. (2003) J. Agri. Food Chem. 51，1666-1670 ；非专利文献 3 =Tsuruoka, T. et al. (2005) Biosci. Biotech. Biochem. 69，179—188 ；非专利文献 4 Sirato-Yasumoto，S. et al. (2001) J. Agri. Food Chem. 49，2647—2651)。另一方面，在小檗科盾叶鬼臼(美洲八角莲)的根中含有的作为芳基四氢萘内酯型(7 U > y卜，u >，々 卜 >型)的抗肿瘤性木脂体的鬼白毒素，因为其具有细胞分裂抑制活性，所以已被用作治癌剂及用于新型治癌剂的开发(非专利文献5 :AyreS，D.C.和Loike，J.D. (1990) Lignans Chemical Biological and Clinical Properties. Cambridge Univ. Press, Cambridge, U.K.)。此外，认为大多数木脂体在摄取后，在体内代谢为具有类似雌性荷尔蒙活性的肠内酯，因此木脂体成为近年来引起关注的次级代谢产物(非专利文献6:Heinonen，S. et al. (2001) J. Agric. Food Chem. 49，3178-3186)。木犀科(oleaceae)连翘(连翘属(forsythia))是多年生木本植物，因其顽强而易于栽培，因开鲜艳的黄花故多被用作庭院灌木。另一方面，已知在连翘的叶子、种子以及花瓣中蓄积了丰富的具有抗氧化或抗炎症活性的木脂体类，在亚洲(特别是中国和日本)将其叶子作为茶饮用。(非专利文献7 :Guo，H. et al. (2007) Rapid Communications in Mass Spectrometry 21，715—729 ；非专利文献 8 :Chang，M-J. et al. (2008) Biosci. Biotech. Biochem. 72，2750_2755)。与芝麻或亚麻等一年生草本植物不同，连翘不需要每年播种及育苗，可数年连续从叶子中获取功能性木脂体，因此认为连翘是有用的次级代谢产物的分子育种目标。在木犀科连翘中木脂体的生物合成，通过由结构式(I’)(参照图IA ；以下其它结构式也相同)的单木质醇进行氧化聚合生成结构式(Ia)的双并四氢呋喃型木脂体而开始(非专利文献 9 =Davin, L. B. and Lewis, N. G. (2003) Phytochem. Rev. 2，257-288 ；非专利文献 10:Suzuki，S. and Umezawa, Τ. (2007) J. Wood. Sci. 53, 273-284) 结构式(Ia)的木脂体，经过结构式(IV)及结构式(V)的木脂体(非专利文献11 =Dinkova-Kostova, A. et al. (1996) J. Biol. Chem. 271,29473-29482 ；非专利文献 12 =Nakatsubo, T. et al. (2008) J. Biol. Chem. 283，15550-1557 ；非专利文献 13 :Min，Τ. et al. (2003) J. Biol. Chem. 278，50714-50723 ；非专利文献 14 :Gang, D. et al. (1999) J. Biol. Chem. 274，7516-7527)，转化为结构式(VI)的木脂体(非专利文献15 :Xia，Z-Q. et al (2001) J. Biol. Chem. 276, 12614-12623 ；非专利文献 16 =Youn, B. et al (2005) J. Biol. Chem. 280，12917-12926)。其后在转化为结构式(VII)的木脂体糖苷之前，需要进一步经过多个酶反应。这些在连翘中的一系列木脂体生物合成体系中，仅确认出几种酶活性，目前仍未分离出负责各反应的催化酶、或编码这些酶的基因。虽然在连翘中含有的所有木脂体均以糖苷的形式稳定存在， 但仅检测出向结构式(VII)的木脂体的7位转移糖的活性(非专利文献17 =Berim, A. et al. (2008)Phytochemistry 69，374-381)，还未鉴定出其它的木脂体糖基转移酶。另一方面，在芝麻中虽然大部分木脂体也以糖苷的形式存在，但仅鉴定出对于结构式(III)表示的木脂体的糖基转移酶UGT71A9。该酶对结构式(III)的化合物的2位以外的位置或对其它木脂体化合物无活性。对于除此之外的木脂体的糖基转移酶仍然不明确(非专利文献 18 :0no, Ε. et al. (2006) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103，10116-10121 ；非专利文献 19 Noguchi，Α.，et al. (2008)Plant J. 54，415-427)。通常情况下，植物中的糖基转移酶的位置选择性高，在相同或类似化合物的相同位置进行反应的糖基转移酶之间的氨基酸序列在不同的种间保守，因此，可利用序列的同源性分离该酶。但是，即使为相同的或类似的化合物，在不同位置添加糖的糖基转移酶的氨基酸序列的同源性低，极难于以在其它位置反应的糖基转移酶的序列信息为基础分离该酶。因此，即使是相同的木脂体化合物，也极难于以在上述结构式(III)化合物的2位添加糖的来自芝麻的UGT71A9的信息为基础，类推在其它木脂体化合物、例如结构式(Ia)等的双并四氢呋喃型木脂体的4位及/或4'位上添加糖的糖基转移酶的结构并将其分离。现有技术文献非专利文献非专利文献 1 =Umezawa, T. (2003) Phytochem. Rev. 2，371-390 ；非专利文献2 =Nakai, M. et al. (2003) J. Agri. Food Chem. 51，1666-1670 ；非专禾Ij 文献 3 :Tsuruoka，T. et al. (2005)Biosci. Biotech. Biochem. 69, 179-188 ；非专禾Ij 文献 4 :Sirato-Yasumoto，S. et al. (2001) J. Agri. Food Chem. 49, 2647-2651 ；非专利文献5 :Ay本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.05.19 JP 2009-1206371.一种多核苷酸，其特征在于，为以下(a) (f)中任一项所述的多核苷酸(a)一种多核苷酸，其含有由序列号3或5表示的碱基序列组成的多核苷酸；(b)一种多核苷酸，其含有编码由序列号4或6表示的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸；(c)一种多核苷酸，其含有编码由序列号4或6表示的氨基酸序列中1 15个氨基酸发生缺失、取代、插入及/或添加后的氨基酸序列组成、且具有针对木脂体的葡萄糖基转移酶活性的蛋白质的多核苷酸；(d)一种多核苷酸，其含有编码具有与序列号4或6表示的氨基酸序列有80%以上同源性的氨基酸序列、且具有针对木脂体的葡萄糖基转移酶活性的蛋白质的多核苷酸；(e)一种多核苷酸，其含有与序列号3或5表示的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交、且编码具有针对木脂体的葡萄糖基转移酶活性的蛋白质的多核苷酸；或者(f)一种多核苷酸，其含有与编码序列号4或6表示的氨基酸序列所组成的蛋白质的多核苷酸的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交、且编码具有针对木脂体的葡萄糖基转移酶活性的蛋白质的多核苷酸。2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，为以下(g) (j)中任一项所述的多核苷酸(g)一种多核苷酸，其含有编码由序列号4或6表示的氨基酸序列中10个以下的氨基酸发生缺失、取代、插入及/或添加后的氨基酸序列组成、且具有针对木脂体的葡萄糖基转移酶活性的蛋白质的多核苷酸；(h)一种多核苷酸，其含有编码具有与序列号4或6表示的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列、且具有针对木脂体的葡萄糖基转移酶活性的蛋白质的多核苷酸；(i)一种多核苷酸，其含有与序列号3或5表示的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在高严谨条件下杂交、且编码具有针对木脂体的葡萄糖基转移酶活性的蛋白质的多核苷酸；或者(j) 一种多核苷酸，其含有与编码...
【专利技术属性】
技术研发人员：小野荣一郎，佐竹炎，金贤仲，
申请(专利权)人：三得利控股株式会社，
类型：发明
国别省市：
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