h-PRUNE的酶抑制剂在过度表达h-PRUNE的肿瘤转移的预防和治疗中的应用制造技术

本发明专利技术涉及ｈ－ＰＲＵＮＥ的酶抑制剂的应用、用于过度表达ｈ－ＰＲＵＮＥ的肿瘤转移的预防和治疗的抑制剂的筛选方法和用于检测预后所述转移的诊断试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及h-PRUNE的酶抑制剂在过度表达h-PRUNE的肿瘤转移的预防和治疗中的应用、所述抑制剂的筛选方法和用于检测该转移的诊断试剂盒。本专利技术更具体涉及h-PRUNE的酶抑制剂在乳房肿瘤、肉瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤的转移的预防和治疗中的应用和所述抑制剂的筛选方法。本专利技术还涉及所述肿瘤转移的诊断试剂盒。人PRUNE(h-PRUNE)蛋白属于DHH超家族，该家族包括一些磷酸酯酶，例如来自细菌的核RecJ和来自酵母与细菌的焦磷酸酶(Aravind等，1998)。DHH超家族可以根据C末端基序分为两个主要的类别，该基序在各类别中是非常保守的，但不跨越各种类别。所有该超家族的成员都具有另外四个含有高保守电荷的氨基酸残基的基序，这些残基预期形成离子键和催化磷酸酯化反应。它们的主要特征是第三基序，即DHH(Asp-His-His)，该超家族以此被命名。RecJ蛋白是DNA修复蛋白，它与其它核酸酶和缺乏特征的细菌蛋白同属于第一类；而PRUNE和聚磷酸酶属于第二类。来自果蝇的PRUNE基因最初在其突变表型的基础上鉴定的，该突变表型由于果蝇蝶呤的减少而呈现紫褐色眼，与亮红眼的野生型果蝇不同(Timmons等，1996)。虽然纯合PRUNE突变体存活和生育，但在至少一个突变拷贝的存在下，它们被不断产生的假黑素瘤致死，突变拷贝干扰将产生翅的成虫盘的正确形成(awd/K-pn；也称作PRUNE杀手(Killer of PRUNE))。人类编码多达8个awd基因(nm23)的直向同源基因，其中至少4个编码活性核苷二磷酸激酶(NDKPs)，该酶催化磷酰基从核苷三磷酸转移到核苷二磷酸(Lombardi等，2000)。一些肿瘤和高度增殖性细胞过度表达nm23-H1mRNA及其蛋白，大多数情况下该过度表达会导致早期的癌症。乳腺癌是一种复杂的疾病，由于其生物异质性和对治疗的广泛响应性，难以进行临床治疗(Keen等，2003)。对肿瘤发生的分子机理的进一步认识实现了对越来越多的生物标记的鉴别，这些生物标记已与病理进展的不同阶段的各种癌症预后相关，从而能够选择最合适的治疗处理(Keen等，Domchek等，2002)。在目前用于原发性乳腺癌的良好确立的预后因素中，有淋巴结受累、组织学检查、肿瘤大小、雌激素和孕酮受体状态、增殖指数、核或组织学级别(Kuru等，2003，Morabito等，2003)。提供在后续的转化、侵袭和转移过程中所涉及的新的分子用作标记，用于在肿瘤病理进展中后续阶段的预后。在乳腺癌和黑色素瘤中，人nm23-H1的高表达与降低的转移潜力有关(Florenes等，1992)。对于特定的乳腺癌，转移的扩散实质上是所有癌症死亡的原因。成为侵袭性肿瘤细胞需要改变它们的粘附性质，解除原发瘤中与其它细胞的连接，与它们侵袭的组织的宿主细胞的细胞外基质建立新的连接。在此范围内，肿瘤细胞周围蛋白酶活性的调节起重要作用。为了从原发瘤转移并离开移生次级器官的循环系统，肿瘤细胞也需要获得运动功能。目前，已经分离并鉴定了一些转移抑制基因(Steeg等，2003)。其中，已知在肿瘤乳腺细胞中nm23过度表达时引起细胞运动性的下降(Freije等，1997，Hartsough等，2001，Freije等，1997)，影响非不依赖贴壁的移生，引起分化(Kantor等，1993；Leone等，1993；Howlett等，1994；Hartsough等，1998，Lombardi等，2000)。此外，已证明nm23-H1在侵袭性乳腺癌细胞系克隆MDA-C100中的过度表达在体内和体外显著地减少其转移表型(Hartsough等，2000，Mao等，2001，Tseng等，2001)。本专利技术人在以前的研究中证实了h-PRUNE与nm23-H1间的相互作用和通过nm23H1-S120G突变对该相互作用的破坏(Reymond等，1999)。还发现h-PRUNE的一些拷贝的扩增引起细胞增殖的诱导，与中度或低的nm23-H1水平相比，高水平的h-PRUNE表达与增加的肉瘤和乳腺癌的侵袭性相关(Forus等，2001)。因此，显然需要提供适合抑制h-PRUNE的酶活性的化合物，有利地用于以h-PRUNE的过度表达为特征的肿瘤及其转移的治疗和预防。目前，本专利技术人鉴别了h-PRUNE的一种新的、特别是与乳腺癌的转移相关的酶活性，而且该活性容易受到治疗性酶抑制。实际上，本专利技术人目前已经发现，h-PRUNE具有环核苷酸磷酸二酯酶活性，并有将cAMP优先于cGMP作为底物的亲和力，这可以被一些磷酸二酯酶抑制剂有效地抑制。此外，通过本专利技术人进行的研究发现，在一些组织中，随着转移肿瘤中nm-23表达的减少，同时h-PRUNE被过度表达。还发现，在一个乳腺肿瘤模型中，由于与nm23H1的物理性的蛋白质-蛋白质相互作用，增加的cAMP-PDE h-PRUNE的活性与细胞运动性直接相关。该发现表明，h-PRUNE与nm23-H1间的相互作用导致nm23-H1在细胞增殖和抑制肿瘤转移过程中的保护功能的修饰。根据本专利技术的进一步研究，通过研究一组乳腺癌患者中h-PRUNE蛋白与nm23-H1的表达分布，评价了h-PRUNE作为乳腺癌临床进展的预后的潜在独立标记可能起到的作用。特别是，h-PRUNE表达在各种分析的临床病例中均一分布，可以有利地将该蛋白用作预后标记，并独立于其它的因素，例如肿瘤类型、组织学大小、雌激素和孕酮受体活性、淋巴结受累。新标记的鉴定可用于鉴定具有转移潜力的肿瘤，根据选择的目标疗法，使对乳腺癌患者的治疗更有效。在通过用于评价hPRUNE环核苷酸磷酸二酯酶活性的抑制的适当的筛选方法测试了的磷酸二酯酶(PDE)抑制剂中，发现在体外和乳腺细胞模型中，根据IC50双嘧达莫都具有最高的对hPRUNE活性的抑制能力，它是一种已知的具有抗凝剂特性的药物。另外，长春西汀和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)在筛选中也表现出对hPRUNE抑制期望的IC50值；来自该选择的数据表明，可筛选上述三种化合物的结构类似物、衍生物和异构体。最后，大量转移性乳腺肿瘤的体内分析证实，增加的hPRUNE蛋白水平与nm23-H1表达的负调节间存在直接的关联，如临床跟踪研究所报道，它导致远距离转移的形成。因此，本专利技术的目的之一是h-PRUNE环核苷酸磷酸二酯酶活性的抑制剂在制备用于以h-PRUNE过度表达为特征的肿瘤转移的预防和治疗的药物中的应用，这样的肿瘤有例如乳腺癌、肉瘤、神经母细胞瘤、前列腺肿瘤、胰腺肿瘤、结肠肿瘤、直肠肿瘤、神经管母细胞瘤、上皮瘤、肝癌(epatocarcinoma)、T细胞或B细胞淋巴瘤、骨髓瘤和黑色素瘤。本专利技术具体涉及具有以下通式(I)的h-PRUNE环核苷酸磷酸二酯酶活性的抑制剂 其中，R1和R2相同或不同，可以选自氨基醇、氨基烷基、胆固醇；R3和R4相同或不同，可以选自杂环芳环或芳环。优选地，杂环芳环可选自吡唑、吡咯、咪唑、吡啶、嘧啶、吗啉。在本专利技术优选的实施方式中，R1和/或R2为二乙醇胺，R3和/或R4为嘧啶。在本专利技术更优选的实施方式中，R1和R2为二乙醇胺，R3和R4为嘧啶，抑制剂为双嘧达莫。本专利技术还涉及h-PRUNE环核苷酸磷酸二酯酶活性的抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】
ｈ－ＰＲＵＮＥ环核苷酸磷酸二酯酶活性抑制剂在制备用于预防和治疗以ｈ－ＰＲＵＮＥ过度表达为特征的肿瘤转移的药物中的应用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：马西莫佐洛，
申请(专利权)人：马西莫佐洛，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]