一种氯霉素人工抗原的制备方法技术

一种氯霉素人工抗原的制造方法，是将氯霉素溶于无水吡啶中，并加入琥珀酸酐，使氯霉素分子导入了羧基，加交联剂ＥＤＡＣ和６－氨基己酸，使氯霉素衍生物中的羧基与６－氨基己酸中的氨基缩合，增长了碳链，然后与载体蛋白质进行偶联，得到氯霉素－碳链－载体蛋白复合物，该复合物是一种氯霉素人工抗原。同现有技术比较，本发明专利技术的优点是偶联方法简便易行，将本氯霉素－碳链－载体蛋白复合物用于动物体氯霉素残留量检测及免疫检测上，有助于提高检测水平。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种含有氯霉素的复合物，特别涉及。
技术介绍
氯霉素是人体及动物治病防病的一种重要的抗生素，在动物治病中应用广泛，由于价格低廉等因素该抗菌素被广泛应用到动物的饲料中，是常用的动物饲料添加剂之一。但是抗生素的不合理的滥用导致许多病菌能够耐受抗生素，产生抗药性，对抗生素的有效治疗疾病带来负面影响。随着人们生活水平以及对滥用抗生素的防范意识的提高，逐渐认识到滥用抗生素的危害性，开始关注氯霉素的毒副作用，尤其肉食品中的抗生素的残留量，肉食品及水产品的进出口贸易中对添加剂的成分及其含量，均有严格的限定。 肉制品及水产品中的氯霉素的残留量是否超标通常采用色谱检测法，但操作较烦，且需要专人测定，给生产企业了解抗生素的残留量带来困难；后来人们开展放射免疫测定及酶联免疫测定，但设备要从国外进口，价格昂贵；由于氯霉素是半抗原，需要与载体蛋白交联才能制备相应的抗氯霉素的抗体，在此基础上才能建立相关的免疫检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，将该人工抗原用于动物体氯霉素残留量及免疫检测上，具有检测快速、操作简便、成本低的优点。 ，其特征在于采用以下步骤A)按重量比为1∶0.3～0.5分别称取氯霉素和琥珀酸酐，先后加入到无水吡啶中，无水吡啶用量按1克氯霉素加5-20毫升比例添加，在封闭容器中水浴6-24h，生成含有羧基的氯霉素衍生物； B)将上述氯霉素衍生物置于离心管中，加入氯霉素原反应体积的5-10倍的冰冷1-5N盐酸量，离心管以每分钟1000转的转速转动10分钟，析出含有羧基的氯霉素红色产物，再用2-10倍体积的1-5N盐酸冰冷的盐酸溶液离心洗涤沉淀2次，得到紫红色沉淀物；C)向沉淀物中加入浓度为40～75％的乙醇溶液，沉淀物溶解后加入氯霉素重量20～50％的水溶性碳化二亚胺EDAC，在常温下反应5-10分钟后，加入氯霉素重量30～50％的6-氨基己酸，生成带有碳链手臂的氯霉素衍生物；D)在带有碳链手臂的氯霉素衍生物中加入氯霉素重量20～50％的水溶性碳化二亚胺，反应5-10分钟后，再加入氯霉素重量50-200倍重量的待偶联的蛋白质进行偶联反应，经过透析，除去未能偶合的自由小分子化合物，获得氯霉素-碳链-载体蛋白复合物，该复合物为一种氯霉素人工抗原；其中的载体蛋白是指常规的可作免疫载体使用的可溶性蛋白质。 同现有技术比较，本专利技术的优点是将本氯霉素-碳链-载体蛋白复合物作为氯霉素人工抗原用于动物体氯霉素残留量检测及免疫检测领域，使相关免疫检测具有检测快速、操作简便、成本低的优点。具体实施方式实施例1，其特征在于采用以下步骤A)按重量比为1∶0.3分别称取氯霉素和琥珀酸酐，先后加入到无水吡啶中，无水吡啶用量按1克氯霉素加5毫升比例添加，小量制备可在封闭容器中水浴60℃、24h(大量制备则需要在在回流装置中进行水浴60℃、24h)，生成含有羧基的氯霉素衍生物；B)将上述氯霉素衍生物置于离心管中，加入氯霉素原反应体积的5倍的冰冷5N盐酸量，离心管以每分钟1000转的转速转动10分钟，析出含有羧基的氯霉素红色产物，再用2倍体积的5N盐酸冰冷的盐酸溶液离心洗涤沉淀2次，得到紫红色沉淀物；C)向沉淀物中加入浓度为40％的乙醇溶液，沉淀物溶解后加入氯霉素重量50％的水溶性碳化二亚胺EDAC，在常温下反应5分钟后，加入氯霉素重量50％的6-氨基己酸，生成带有碳链手臂的氯霉素；D)在带有碳链手臂的氯霉素中加入氯霉素重量20％的水溶性碳化二亚胺，反应10分钟后，再加入氯霉素重量50倍重量的待偶联的蛋白质进行偶联反应，经过透析，除去未能偶合的自由小分子化合物，获得氯霉素-碳链-载体蛋白复合物，该复合物为一种氯霉素人工抗原。 实施例2，其特征在于采用以下步骤A)按重量比为1∶0.5分别称取氯霉素和琥珀酸酐，先后加入到无水吡啶中，无水吡啶用量按1克氯霉素加20毫升比例添加，小量制备可在封闭容器中水浴60℃、6h(大量制备则需要在在回流装置中进行水浴60℃、6h)，生成含有羧基的氯霉素衍生物；B)将上述氯霉素衍生物置于离心管中，加入氯霉素原反应体积的10倍的冰冷1N盐酸量，离心管以每分钟1000转的转速转动10分钟，析出含有羧基的氯霉素红色产物，再用10倍体积的1N盐酸冰冷的盐酸溶液离心洗涤沉淀3次，得到紫红色沉淀物；C)向沉淀物中加入浓度为75％的乙醇溶液，沉淀物溶解后加入氯霉素重量20％的水溶性碳化二亚胺EDAC，在常温下反应10分钟后，加入氯霉素重量30％的6-氨基己酸，生成带有碳链手臂的氯霉素；D)在带有碳链手臂的氯霉素中加入氯霉素重量50％的水溶性碳化二亚胺，反应5分钟后，再加入氯霉素重量200倍重量的待偶联的蛋白质进行偶联反应，经过透析，除去未能偶合的自由小分子化合物，获得氯霉素-碳链-载体蛋白复合物，该复合物为一种氯霉素人工抗原。 实施例3，其特征在于采用以下步骤A)按重量比为1∶0.4分别称取氯霉素和琥珀酸酐，先后加入到无水吡啶中，无水吡啶用量按1克氯霉素加12毫升比例添加，小量制备可在封闭容器中水浴60℃、15h(大量制备则需要在在回流装置中进行水浴60℃、15h)，生成含有羧基的氯霉素衍生物； B)将上述氯霉素衍生物置于离心管中，加入氯霉素原反应体积的7倍的冰冷3N盐酸量，离心管以每分钟1000转的转速转动10分钟，析出含有羧基的氯霉素红色产物，再用7倍体积的3N盐酸冰冷的盐酸溶液离心洗涤沉淀3次，得到紫红色沉淀物；C)向沉淀物中加入浓度为55％的乙醇溶液，沉淀物溶解后加入氯霉素重量35％的水溶性碳化二亚胺EDAC，在常温下反应8分钟后，加入氯霉素重量40％的6-氨基己酸，生成带有碳链手臂的氯霉素；D)在带有碳链手臂的氯霉素中加入氯霉素重量35％的水溶性碳化二亚胺，反应8分钟后，再加入氯霉素重量120倍重量的待偶联的蛋白质进行偶联反应，经过透析，除去未能偶合的自由小分子化合物，获得氯霉素-碳链-载体蛋白复合物，该复合物为一种氯霉素人工抗原。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种氯霉素人工抗原的制备方法，其特征在于采用以下步骤：　　　　Ａ）按重量比为１∶０．３～０．５分别称取氯霉素和琥珀酸酐，先后加入到无水吡啶中，无水吡啶用量按１克氯霉素加５－２０毫升比例添加，在封闭容器中或在回流装置中水浴６－２４ｈ，生成含有羧基的氯霉素衍生物；　　　　Ｂ）将上述氯霉素衍生物置于离心管中，加入氯霉素原反应体积的５－１０倍的冰冷１－５Ｎ盐酸量，离心管以每分钟１０００转的转速转动１０分钟，析出含有羧基的氯霉素红色产物，再用２－１０倍体积的１－５Ｎ盐酸冰冷的盐酸溶液离心洗涤沉淀２－３次，得到紫红色沉淀物；　　　　Ｃ）向沉淀物中加入浓度为４０～７５％的乙醇溶液，沉淀物溶解后加入氯霉素重量２０～５０％的水溶性碳化二亚胺ＥＤＡＣ，在常温下反应５－１０分钟后，加入氯霉素重量３０～５０％的６－氨基已酸，生成带有碳链手臂的氯霉素；　　　　Ｄ）在带有碳链手臂的氯霉素中加入氯霉素重量２０～５０％的水溶性碳化二亚胺，反应５－１０分钟后，再加入氯霉素重量５０－２００倍重量的待偶联的蛋白质进行偶联反应，经过透析，除去未能偶合的自由小分子化合物，获得氯霉素－碳链－载体蛋白复合物，该复合物为一种氯霉素人工抗原。...

【技术特征摘要】
1.一种氯霉素人工抗原的制备方法，其特征在于采用以下步骤A)按重量比为1∶0.3～0.5分别称取氯霉素和琥珀酸酐，先后加入到无水吡啶中，无水吡啶用量按1克氯霉素加5-20毫升比例添加，在封闭容器中或在回流装置中水浴6-24h，生成含有羧基的氯霉素衍生物；B)将上述氯霉素衍生物置于离心管中，加入氯霉素原反应体积的5-10倍的冰冷1-5N盐酸量，离心管以每分钟1000转的转速转动10分钟，析出含有羧基的氯霉素红色产物，再用2-10倍体积的1-5N盐酸冰冷的盐酸溶液离心洗涤沉淀2-3次，得到紫红色沉淀物；C)向沉淀物中加入浓度为40...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈正贤，邬建敏，叶兴乾，沈立荣，吴建祥，马志超，徐正，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]