本发明专利技术涉及一种利用酶比色法及酶联法技术的离子钙诊断／测定试剂盒，同时本发明专利技术还涉及测定离子钙浓度的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学／食品／环境检验测定技术领域。本发明专利技术的试剂盒主要成分包括：缓冲液、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ氧化酶、还原型辅酶、过氧化物酶、还原型色原体组合、稳定剂及抗干扰剂；通过一系列的酶促反应，最终将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染料，从而可以通过可见光分析仪器，在４００－７００ｎｍ波长处，测定染料含量的高低，进而直接反映出离子钙浓度的大小。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种离子钙诊断/测定试剂盒，同时本专利技术还涉及测定离子钙浓度的方法，属于医学/食品/环境检验测定
技术介绍
血液中的钙几乎全部存在于血浆中，血浆钙有两种形式1非扩散性钙，也称结合钙。它同蛋白质结合，不能透过毛细血管壁，不具有生理活性，约占钙的40％；2可扩散性钙，包括离子化钙，约占总钙的46％，是具有生理活性的部分。与碳酸氢根、磷酸盐、柠檬酸、乳酸等阴离子结合的钙，约占总钙的14％。非扩散性钙与扩散性钙可以互相转变并保持动态平衡。 钙的生理功能主要为1构成骨骼和牙齿，维持和修补骨骼的完整性；2保持神经肌肉的正常应激性；3传导神经冲动；4维持细胞的正常生理通透性；5参与血疑过程；6激活某些酶的活性，如琥珀酸脱氢酶、ATP酶等；7对心肌收缩的影响，ca2+有利于心肌收缩，它和有利于心肌舒张的K+相拮抗，从而维持心肌正常的收缩与舒张。血钙与骨骼中的钙保持动态平衡。血钙含量的变化常能反映出骨组织的代谢情况，因此测定血钙对某些疾病的诊断有帮助。 总钙的测定方法很多，概括起来有滴定法(氧化还原滴定法、络合滴定法)，比色法(方法很多，最常用又便与自动化操作的是邻甲酚酞合络酮法、甲基麝香草酚蓝法、偶氮胂III法等)，火焰光度法、原子吸收分光光度法、同位素稀释质谱法、酶法。国际临床化学联合(IFCC)推荐的钙测定决定性方法为同位素稀释质谱法(IDMS)，参考方法为原子吸收分光光度法。世界卫生组织(WHO)推荐的中等实验室用的常规方法为邻甲酚酞络合酮法(O-CPC)。 离子钙的测定方法大致有生物学法、透析法、超滤法、金属指示剂法、离子选择性电极法.目前应用最多的是离子选择性电极法(ISE)。此方法简便、迅速、重复性好，正确和敏感性高。测定结果不受血浆蛋白质的影响，能反映机体钙代谢的实际情况。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提出一种利用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)及酶联法(Couple Reaction)技术，连续监测通过酶联反应生成吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)，所导致在400-700nm波长处吸光度的上升，得以测定离子钙浓度的方法，同时，本专利技术还将给出用以实现该方法的离子钙诊断/测定试剂盒，采用该试剂盒不仅可以在可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行离子钙浓度测定，而且测定速度快、灵敏度大、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。 本专利技术离子钙浓度测定方法原理如下 还原型辅酶+氧NAD(P)H氧化酶/Ca2+辅酶+过氧化氢 过氧化氢+还原型色原体组合过氧化物酶吲嗒胺色原或醌亚胺色原+水 这种方法应用NAD(P)H氧化酶(NAD(P)H oxidase；EC 1.6.3.1)需要钙离子才能激活酶活性的酶促反应速率比色法。在钙离子的催化下，NAD(P)H氧化酶(NAD(P)H oxidase；EC 1.6.3.1)酶解反应产生过氧化氢，再通过(偶)联合过氧化物酶(peroxidase；EC 1.11.1.7)的作用，最终将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染料，从而可以通过可见光分析仪器，在400700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)波长处，测定染料，吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)，含量高低的光吸收大小，通过测量400-700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)处吸光度上升的速度，得出离子钙浓度大小测定结果。 实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，如下成分关系的本专利技术离子钙浓度诊断/测定试剂盒较为理想 缓冲液 100mmol/L 稳定剂 50mmol/L 还原型辅酶 0.25mmol/L NAD(P)H氧化酶 6000U/L 过氧化物酶15000U/L 还原型色原体组合 6mmol/L 所述还原型色原体组合(Chromogen)可以是下列28个组合中的任一个组合 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 石碳酸 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 N，N-双乙基-m-甲苯胺 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2，4-双氯石碳酸 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 3，5-双氯石碳酸磺酸 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 3，5-双氯-2-羟基-苯磺酸 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 仨溴羥基苯甲酸 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 双甲基苯胺 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2，2’-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸) 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 4-羥基-3-甲氧基苯甲酸 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 3-甲基-乙基-羥基苯胺 4-氨基抗砒 石碳酸 4-氨基抗砒 N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺 4-氨基抗砒 N，N-双乙基-m-甲苯胺 4-氨基抗砒 2，4-双氯石碳酸 4-氨基抗砒 2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸 4-氨基抗砒 3，5-双氯石碳酸磺酸 4-氨基抗砒 3，5-双氯-2-羟基-苯磺酸 4-氨基抗砒 N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐 4-氨基抗砒仨溴羥基苯甲酸 4-氨基抗砒 双甲基苯胺 4-氨基抗砒 N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺 4-氨基抗砒 2，2’-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸) 4-氨基抗砒 4-羥基-3-甲氧基苯甲酸 4-氨基抗砒 3-甲基-乙基-羥基苯胺 本专利技术的离子钙浓度诊断/测定试剂盒可以是单剂，包括缓冲液、稳定剂、NAD(P)H氧化酶、还原型辅酶、过氧化物酶、还原型色原体组合、抗干扰剂。 试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。 也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂 试剂1 缓冲液、稳定剂、还原型色原体组合、抗干扰剂、还原型辅酶。 试剂2 缓冲液、稳定剂、过氧化物酶、NAD(P)H氧化酶。 NAD(P)H氧化酶、还原型辅酶、过氧化物酶、还原型色原体组合在试剂1或试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。 也可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂 试剂1 缓冲液、稳定剂、还原型色原体组合、还原型辅酶、抗干扰剂。 试剂2 缓冲液、稳定剂、过氧化物酶。 试剂3 缓冲液、稳定剂、NAD(P)H氧化酶。 NAD(P)H氧化酶、还原型辅酶、过氧化物酶、还原型色原体组合在试剂1、试剂2或试剂3中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。 具体实施例方式 下本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种离子钙浓度的测定方法，其方法原理如下： 还原型辅酶＋氧 ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ氧化酶／Ｃａ↑［２＋］ 辅酶＋过氧化氢 过氧化氢＋还原型色原体组合 过氧化物酶 吲嗒胺色原或醌亚胺色原＋水 将最终反应物置于可见光分析仪下，检测４００－７００ｎｍ处直接反映吲嗒胺色原或醌亚胺色原含量高低的光吸收大小，得出离子钙浓度大小测定结果。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：苏州艾杰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。