生物分子用标记色素、标记试剂盒以及生物分子的检测方法技术

本发明专利技术的生物分子用标记色素具有由有机ＥＬ色素形成的显色部、结合生物分子的结合部以及连接显色部和结合部的间隔部。可以获得对生物分子的高标记率和固体状态下的高荧光强度。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及由荧光色素形成，用于核酸、蛋白质、肽类以及糖类等生物分子 的检测的生物分子用标记色素和标记试剂盒以及生物分子的检测方法。
技术介绍
最近，人类基因组的所有序列被探明，进行着以基因治疗、基因诊断等为目的的后基因组的研究。例如，DNA分析是使固定在DNA微阵列板上的探针DNA 和用荧光色素等标记了的样品DNA杂交而形成双链后，再进行样品DNA的检测。 这是将用荧光色素标记了的核酸进行PCR扩增，在基板上进行杂交后进行测定的 方法。最近，采用使用具有更多的氨基的引物的方法、在DNA中引入氨基的方法。 标记中广泛地使用荧光色素，要求具有高荧光强度、在干燥状态(固体状态) 下也可以发光、且具有水溶性等特性。作为荧光色素，例如使用Cy3或Cy5(例如， 参考非专利文献l)。非专利文献l:《科学》283.1， l月，1999， 93-87 专利技术的揭示但是，以前的标记色素存在标记率低的问题。例如，相对于具有一个反应点 的DNA使用200倍摩尔左右的荧光色素，但即使是在所述条件下标记率也只能达 到50 60%左右。因此，存在如下的问题因需要使用大量的标记色素而导致检 测费用的成本增加，或者因需要除去未反应的标记色素的处理步骤而检测所需的时 间较长。为了解决上述课题，本专利技术人认真努力后结果发现，通过使用具有由有机EL 色素形成的显色部、结合生物分子的结合部以及连接显色部和结合部的间隔部的标 记色素，可以大幅度地提高对DNA的标记率，从而完成了本专利技术。即，本专利技术的 生物分子用标记色素为用于基于荧光测定的生物分子检测的标记色素，其特征在 于，具有由有机EL色素形成的显色部、结合生物分子的结合部以及连接显色部和结合部的间隔部。在这里，上述有机EL色素可以使用由与包含一种以上的杂原子、硒原子或硼 原子的五元环化合物和具有共轭体系的六元环化合物形成的稠合多环化合物。另外，上述稠合多环化合物可以使用由以下的通式(l)、 (2)或(3)的任一种表示 的吡咯衍生物。在这里，式中，Rp R2、 R3、 R4分别独立地表示氢原子，卤素原子，可具有垸基、 链烯基、炔基、垸氧基、羟基、氰基、磺酰基、芳族烃基、杂环基、环内包含杂原 子的芳基等取代基的芳族烃基、烃基、杂环基或环内包含杂原子的芳基；X表示可 具有取代基的氮原子、硫原子、氧原子、硒原子或硼原子；R'表示可含芳环的垸 基或链烯基等脂肪族烃基或芳族烃基；An-表示C1—、 Br—、 I—等卤化物离子，CF3S03—， BF4-， PF6。另外，上述的R2和R3可以使用选自噻吩衍生物、呋喃衍生物、吡咯衍生物、咪唑衍生物、嗯唑衍生物、噻唑衍生物、吡唑衍生物以及吡啶衍生物的一种。另外，上述的R2和R3可以使用具有磺酰基的苯基。另外，上述稠合多环化合物可以使用由以下通式(4) 、 (5) 、 (6) 、 (7) 或(8)表示的咪唑衍生物。R3 (1)<formula>formula see original document page 8</formula>(2)<formula>formula see original document page 8</formula><formula>formula see original document page 9</formula>]在这里，式中，R" R2、 R3、 R4、 R5分别独立地表示氢原子，卤素原子，可 具有垸基、链烯基、炔基、垸氧基、羟基、氰基、磺酰基、芳族烃基、杂环基、环内包含杂原子的芳基等取代基的芳族烃基、烃基、杂环基或环内包含杂原子的芳基，R,、 R2、 R3、 R4、 Rs可相同或不同；R'、 R"表示可含芳环的垸基或链烯基等脂肪 族烃基或芳族烃基；An—表示Cr、 Br—、 r等卤化物离子，CF3S03—， BF4-， PF6—。另外，上述的R2和R3可以使用选自噻吩衍生物、呋喃衍生物、吡咯衍生物、咪唑衍生物、噁唑衍生物、噻唑衍生物、吡唑衍生物以及吡啶衍生物的任意一种。另外，上述的R2和R3可以使用具有磺酰基的苯基。另外，本专利技术的标记色素的结合部可以使用选自羧基、异氰酸酯基、异硫氰 酸酯基、环氧基、卤代垸基、三嗪基、碳二亚胺基以及活性酯化的羰基的任意一种 反应性基团。另外，本专利技术的标记色素的间隔部可以使用含有至少一种选自-CH2-、 -NHCOO-、 -CONH-、 -C關H-、 -CH2NR-、 -COO-、 -S02NH-、 -HN-C(=NH)-NH-、 -O-、 -S-、 -NR-(R为烷基)、-(CH2-CH2-0) n-(n为1 10的整数)、-CH-CH-、 -C eC-、 -Ar-以及-CO-Ar-NR-的官能团。在这里，上述间隔部可以使用由以下的通式(I)表示的基团。-(CHR')p-X-(CHR")q- (I)式中，X为直接结合或选自-NHCOO- 、 -CONH- 、 -COO- 、 -S02NH-、 -HN-C(=NH)-NH-、陽O-、 -S陽、-NR-、 -CH=CH-、 -C三C-、 -Ar-以及-CO-Ar-NR-的 至少一种官能团；R'和R"分别独立地表示氢原子，或可含有芳环的烷基或链烯基等脂肪族烃基，或芳族经基中根据需要取代有选自磺酰基、羟基、季铵基以及羧基的任意一种的带电基团的基团；Ar表示芳基；p和q分别独立地表示0 20的整 数，p+q>l。另外，间隔部可以使用氨基酸或由2 20个氨基酸形成的肽连接基。 另外，可以间隔部使用氨基酸，该氨基酸使用天然氨基酸或合成氨基酸。 另外，氨基酸可以使用选自半胱氨酸、2-氨基-3-磺基硫代丙酸(2-7$乂-3-只少尔fv^7 7二少:7。口,y酸)、2-氨基-3-磺酰基丙酸(2-7 $ 乂-3-只少尔年、> 7°口八°:/酸)、酪氨酸、苏氨酸、4-氨基-2-羟基丁酸、高丝氨酸和丝氨酸的至少一 种氨基酸。另外，也可以间隔部使用肽连接基，该肽连接基使用具有选自磺酰基、羟基、 季铵基以及羧基的至少一种带电基团的基团。另外，肽连接基也可以使用包含半胱氨酸、2-氨基-3-磺基硫代丙酸、2-氨基-3-磺酰基丙酸、酪氨酸、苏氨酸、4-氨基-2-羟基丁酸、高丝氨酸和丝氨酸的至少一种氨基酸的基团。另外，本专利技术的第1种生物分子用标记试剂盒为用于基于荧光测定的生物分 子检测的生物分子用标记试剂盒，其特征在于，包含具有由有机EL色素形成的显 色部、结合生物分子的结合部以及连接显色部和结合部的间隔部的标记色素。另外，本专利技术的第2种生物分子用标记试剂盒为用于基于荧光测定的生物分 子检测的生物分子用标记试剂盒，其特征在于，至少包含由有机EL色素形成的显 色部，结合在该显色部且含有至少一种选自-CH2-、 -NHCOO-、 -CONH-、 -CH2NH-、 -CH2NR-、 -COO-、 -S02NH-、 -HN-C(=NH)-NH-、 -O隱、-S-、 -NR-(R为烷基)、-(CH2-CH2-0) n-(n为1~10的整数)、-CH=CH-、 -C三C-、 -Ar-以及-CO-Ar-NR-的 官能团的间隔部。还有，第2种生物分子用标记试剂盒可以包含反应性基团引入试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
生物分子用标记色素，它是用于基于荧光测定的生物分子检测的标记色素，其特征在于，具有由有机ＥＬ色素形成的显色部、结合生物分子的结合部以及连接显色部和结合部的间隔部。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：礒部信一郎，
申请(专利权)人：礒部信一郎，
类型：发明
国别省市：JP[日本]