精神分裂症生物标记物、筛选方法及试剂盒技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及精神分裂症生物标记物、筛选方法及试剂盒。本发明专利技术提供了一种精神分裂症生物标记物，包括miRNA-1273d、miRNA-1303、miRNA-3064-5p、miRNA-3131、miRNA-3687、miRNA-4428、miRNA-4725-3p和miRNA-5096，上述标记物的筛选方法以及检测上述标记物含量的试剂盒；同时还提供了一种预测抗精神分裂症药物疗效的生物标记物，包括miRNA-21-3p和miRNA-3916，上述标记物的筛选方法以及检测上述标记物含量的试剂盒；本发明专利技术还提供了鉴别精神分裂症与广泛性焦虑症、抑郁症、精神发育迟滞的试剂盒。本发明专利技术的有益效果在于首次提供了精神分裂症生物标记物和预测抗精神分裂症药物疗效的生物标记物，具有较高的特异性和敏感值，有较高的诊断参考价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及精神分裂症生物标记物、筛选方法及试剂盒。
技术介绍
精神分裂症(schizophrenia,SZ)是最为严重的精神障碍之一，以幻觉、妄想、精神运动性兴奋等阳性症状和(或)以情感迟钝、情感淡漠、社交退缩、意志减退等阴性症状为主要临床特征，其对患者的认知、情感、行为和社会功能造成严重损害。目前，虽对SZ的病因已有一定的认识，如研究者依据神经影像学、基因组学、蛋白组学、免疫组化等技术对SZ病因学研究的结果涉及遗传因素、社会心理因素、神经生化病理学说及大脑病理和脑结构变化学说等。但对其病理过程尚缺乏充分的了解，这阻碍了对SZ诊断、治疗、康复技术的进步。大量研究显示，遗传因素在SZ发生、预后、疗效、复发中起主要作用，从SZ的家族聚集性，患者同胞再患的危险度以及同卵、异卵双生共患的差异推断，遗传因素占SZ发病因素的65％～85％。因此，对SZ遗传机制及其调控过程的了解，对揭示其病理过程具有重要意义，对SZ的诊断和治疗也具有较好的前景。已有研究表明，精神分裂症病人若能早期明确诊断并及时得到有效治疗，可以显著改善患者的心理、生理、社会功能以及工作效率，并大大减少治疗费用。然而，目前对精神分裂症的诊断仍是依靠其临床症状的主观评估，缺乏有效的客观诊断“金标准”，因而在临床上误诊、误治时有发生。另一方面，由于事先未知患者对哪种药物敏感，临床上不得不用“试错法”给药，这不仅影响患者的治疗效果，而且降低其服药依从性，并造成巨大的医疗资源浪费。因此，有必要研发一种具有敏感性和特异性的生物标志物，来提高精神分裂症的诊断科学性，并对其亚型加以区分，以便于有针对性地进行药物干预和开展临床科学研究。miRNA是一种小分子的非编码RNA，长度为大约为22个碱基。miRNA的生成包括两步剪切：首先细胞核内的miRNA基因转录成pri-miRNA，由细胞核内的酶DroshaRNase将其剪切成miRNA前体pre-miRNA。核内的转运蛋白将pre-miRNA转运到细胞质中，然后在细胞质中的另一种酶Dicer把miRNA前体剪切成双链miRNA，通过部分或完全地与靶mRNA的3'非翻译区(3'UTR)互补配对，阻止其翻译或使其降解，从而起到基因转录后调节的作用。约有50％的蛋白质编码基因受到miRNA的精确调控，多个miRNA分子可以共同调节一个基因的表达，一个miRNA分子亦可调控数百、上千个基因的表达。越来越多的研究证明，在大脑的发育、神经发生、神经元成熟及突触形成过程中，miRNA起关键的调控作用。进一步的研究表明，精神分裂症的发生、发展中，miRNA亦起重要作用，并与抗精神病药物的疗效有相关性。因此，某些MicroRNA可成为精神分裂症诊断和预测抗精神分裂症药物治疗效果的生物标记物。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是：提供精神分裂症生物标记物、筛选方法及试剂盒。在本专利技术的第一方面，提供了精神分裂症诊断生物标记物，所述标记物包括miRNA-1273d、miRNA-1303、miRNA-3064-5p、miRNA-3131、miRNA-3687、miRNA-4428、miRNA-4725-3p和miRNA-5096。在本专利技术的第二方面，提供了上述精神分裂症诊断生物标记物的筛选方法，包括以下步骤：分别选取等量的精神分裂症患者和健康对照组数名，取血样，从中提取总RNA，提取得到的总RNA经过Ploly A加尾，再进一步用生物素标记，标记好的RNA与RNA芯片杂交并通过RNA芯片筛查出差异性表达的miRNA；选取若干例精神分裂症患者，设为病例组；选取若干例健康对照者，设为对照组；分别采集血样，提取出外周血单核细胞中的总RNA后进行miRNA的反转录和荧光定量PCR检测，所得数据使用统计学方法进行分析，对通过RNA芯片筛查得到的差异性表达miRNA进行验证，得到在病例组和对照组间呈显著差异的miRNA种类。在本专利技术的第三方面，提供了一种精神分裂症诊断试剂盒，其能够测定血液中miRNA-1273d、miRNA-1303、miRNA-3064-5p、miRNA-3131、miRNA-3687、miRNA-4428、miRNA-4725-3p和miRNA-5096的含量。优选的，所述精神分裂症诊断试剂盒含有miRNA-1273d、miRNA-1303、miRNA-3064-5p、miRNA-3131、miRNA-3687、miRNA-4428、miRNA-4725-3p和miRNA-5096的引物探针，所述探针序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。所述试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂，如Taq酶，逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl2和DEPC水等；还可以含有标准品和/或对照品。在本专利技术的第四方面，还提供了序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的探针的用途，其用于制备精神分裂症诊断试剂盒。在本专利技术的第五方面，提供了一种预测精神分裂症疗效的生物标记物，所述标记物包括miRNA-21-3p和miRNA-3916。在本专利技术的第六方面，提供了上述预测抗精神分裂症药物疗效的生物标记物的筛选方法，包括以下步骤：选取若干例精神分裂症患者进行临床药物干预随访观察，对选取的患者分别施以临床常用的抗精神分裂症药物，在用药前后分别采集血样，提取出外周血单核细胞中的总RNA后进行miRNA的反转录和荧光定量PCR检测，所得数据使用统计学方法进行分析，得到用药前后表达水平有显著性差异的miRNA。在本专利技术的第七方面，提供了一种预测抗精神分裂症药物疗效的生物标记物检测试剂盒，其能够测定血液中miRNA-21-3p和miRNA-3916的含量。优选的，所述预测抗精神分裂症药物疗效的生物标记物检测试剂盒含有miRNA-21-3p和miRNA-3916的引物探针，所述探针序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。所述试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂，如Taq酶，逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl2和DEPC水等；还可以含有标准品和/或对照品。在本专利技术的第八方面，本文档来自技高网...

【技术保护点】
精神分裂症诊断生物标记物，所述标记物包括miRNA‑1273d、miRNA‑1303、miRNA‑3064‑5p、miRNA‑3131、miRNA‑3687、miRNA‑4428、miRNA‑4725‑3p和miRNA‑5096。

【技术特征摘要】
1.精神分裂症诊断生物标记物，所述标记物包括miRNA-1273d、
miRNA-1303、miRNA-3064-5p、miRNA-3131、miRNA-3687、miRNA-4428、
miRNA-4725-3p和miRNA-5096。
2.一种如权利要求1所述的精神分裂症诊断生物标记物的筛选方法，包括以
下步骤：分别选取等量的精神分裂症患者和健康对照组数名，取血样，从中提取
总RNA，提取得到的总RNA经过Ploly A加尾，再进一步用生物素标记，标记
好的RNA与RNA芯片杂交并通过RNA芯片筛查出差异性表达的miRNA；选
取若干例精神分裂症患者，设为病例组；选取若干例健康对照者，设为对照组；
分别采集血样，提取出外周血单核细胞中的总RNA后进行miRNA的反转录和
荧光定量PCR检测，所得数据使用统计学方法进行分析，对通过RNA芯片筛查
得到的差异性表达miRNA进行验证，得到在病例组和对照组间呈显著差异的
miRNA种类。
3.一种精神分裂症诊断试剂盒，其含有miRNA-1273d、miRNA-1303、
miRNA-3064-5p、miRNA-3131、miRNA-3687、miRNA-4428、miRNA-4725-3p
和miRNA-5096的引物探针，所述探针序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ 
ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID 
NO.8所示。
4.序列如SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：张理义，卢正斌，李万帅，
申请(专利权)人：张理义，常州杰傲病理诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32