本发明专利技术涉及一种特异性的分子标记在鉴定雪山草鸡中的应用以及鉴定雪山草鸡的试剂盒和鉴定的方法，所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述试剂盒包括DNA提取试剂、鉴定体系和阳性对照；所述方法包括4个步骤。本发明专利技术的有益效果为：本发明专利技术的鉴定鸡种的方法能够很好的从分子学水平鉴定出雪山草鸡，应用这种分子标记鉴定鸡种，操作相对简单，特异性高而且重复性高，也为家禽品种资源的正确保存和合理利用增添了新的科学依据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物育种学、分子遗传学和分子生物学领域，具体涉及一种特异性的 分子标记在鉴定雪山草鸡中的应用、鉴定的试剂盒以及鉴定的方法。
技术介绍
雪山草鸡是利用中国优质地方良种藏鸡、茶花鸡为主要素材，经多种杂交选育而 成的草鸡新品种。雪山草鸡性成熟早，长羽快，基本无啄羽现象。抗病能力强，适合多种方 式饲养。雪山草鸡具有耐粗饲，抗病力强等特点，全国各地都能饲养，特别适合广大农村果 园，树林，荒地，山坡放养。肉质鲜美，深受光大消费者喜爱。雪山草鸡作为一种优良鸡种， 不管是为其保种，还是建立家系和品系工作，都要对鸡种进行明确鉴定和分类。 长期以来，主要是以常规形态学标记分析手段进行动物品种分类和真伪鉴定。形 态学标记分析简便、经济，但由于形态学特征常常受环境因素的影响，具有表型可塑性和遗 传可变性，容易导致不正确的分类与鉴定；并且形态学方法无法鉴定许多群体中普遍存在 的隐存分类单元，应用分子生物学技术将有利于品种鉴定。形态学鉴定的局限性和不断缩 减的分类学家队伍，使分类学的发展面临巨大的挑战。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的上述问题，本专利技术提供了一种特异性的分子标记在鉴定 雪山草鸡中的应用以及鉴定雪山草鸡的试剂盒和鉴定的方法，能够通过分子生物学技术手 段对不同鸡种进行更精确的分类。 本专利技术所采用的技术方案为： -种特异性的分子标记在鉴定雪山草鸡中的应用，所述分子标记的包括如SEQID NO:1所示的核苷酸序列。所述分子标记来源于雪山草鸡的16号染色体BRD2基因的3'UTR 区域，雪山草鸡的16号染色体BRD2基因的3'UTR区域的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示， 其他鸡种的16号染色体BRD2基因的3'UTR区域的核苷酸序列如SEQIDNO:5所示。扩 增所述分子标记的上游引物的核苷酸序列如SEQIDN0 :2所示；扩增所述分子标记的下游 引物的核苷酸序列如SEQIDN0 :3所示。 -种鉴定雪山草鸡的试剂盒，所述试剂盒包括以下组分：DNA提取试剂：总体系1000 yL，0? 02mg的CTAB(十六烷基三甲基溴化铵）、100 yL 浓度为100mm〇l/L的Tris-HCL(pH8.0)(三（羟甲基）氨基甲烷）、200yL浓度为lmol/L 的EDTA(pH8. 0)乙二胺四乙酸）、150 yL浓度为 2. 5mmol/L的NaCl、0. 03mg 的PVP-40 (聚 乙烯吡咯烷酮），余量为ddH20。其中EDTA为抗凝剂；Tris-HCL、NaCl和PVP-40共同作为 裂解液使用。 鉴定体系：总体系为20yL :1 yL浓度为100ng/yL的待鉴定鸡种的DNA，2yL 10\?0?8虹€61，1.5 1^浓度为1〇111111〇1/1的(1犯13，浓度为1(^111〇1/1^的上、下游引物各 1 y L，0? 2 y L 浓度为 5U/ y L 的 Taq 酶，ddH20 13. 3 y L ; 阳性对照：总体系为20 y L : 1 y L浓度为100ng/ y L的雪山草鸡的DNA，2 y L 10\?0?8虹€61，1.5 1^浓度为1〇111111〇1/1的(1犯13，浓度为1(^111〇1/1^的上、下游引物各 1 y L，0? 2 y L 浓度为 5U/ y L 的 Taq 酶，ddH20 13. 3 y L ; 阴性对照：总体系为20yL :1 yL浓度为lOOng/yL的其他鸡种的DNA，2yL 10\?0?8虹€61，1.5 1^浓度为1〇111111〇1/1的(1犯13，浓度为1(^111〇1/1^的上、下游引物各 1 y L，0? 2 y L 浓度为 5U/ y L 的 Taq 酶，ddH20 13. 3 y L ; 其中，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO :2所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO :3所示；雪山草鸡的DNA中的16号染色体BRD2基因的3'UTR区域核苷酸序列如SEQ ID N0 :4所示；其他鸡种的DNA中的16号染色体BRD2基因的3'UTR区域核苷酸序列如SEQ ID N0 :5 所示。 -种鉴定雪山草鸡的方法，所述方法包括以下步骤： 1)以包括SEQ ID N0 :1所示的核苷酸序列作为模板，用如SEQ ID N0 :2所示的核 苷酸序列作为上游引物，如SEQ ID N0 :3所示的核苷酸序列作为下游引物进行PCR扩增；在 实际的操作过程中，该步骤只操作一次即可，无需每次鉴定都进行操作。 2)以待鉴定鸡种的DNA作为模板，用如SEQ ID N0 :2所示的核苷酸序列作为上游 引物，如SEQ ID N0 :3所示的核苷酸序列作为下游引物进行PCR扩增； 3)将步骤1)和步骤2)中PCR扩增得到的两种扩增产物分别通过琼脂糖凝胶电泳 进行检测并进行对比； 4)如两种扩增产物相同，则待鉴定鸡种即为雪山草鸡；如两种扩增产物不同，则 待鉴定鸡种为非雪山草鸡。经反复验证后，雪山草鸡的扩增产物的特异性条带出现在300bp 处，因此当待鉴定鸡种的扩增产物出现300bp的特异性扩增条带时，则判定该待鉴定鸡种 为雪山草鸡，反之，则待鉴定鸡种不为雪山草鸡。 所述步骤1)和步骤2)中PCR扩增反应体系的总体积为20 y L :1 y L浓度为 100即/1^的0嫩模板，2 1^10\?0?81^€61，1.5 1^浓度为1〇111111〇1/1的(1犯13，浓度为 10p mol/yL 的上下游引物各 1 yL，0. 2yL浓度为 5U/yL 的 Taq酶，ddH20 13. 3yL〇 所述步骤1)和步骤2)中PCR扩增程序为：95°C预变性5min ;94°C变性40s， 64.6°(：退火4〇8,72°(：延伸4〇8,35个循环；最后72°(：延伸1〇1^11，4°(：保存备用。 所述步骤3)所用琼脂糖凝胶电泳为：将PCR扩增得到的两种扩增产物用2%浓度 的琼脂糖凝胶在电压为100V的条件下，电泳40min，分子量为50-500bp的DNA Marker作参 照。其中琼脂糖凝胶的浓度为质量体积比。 本专利技术中所用试剂如无特殊说明，均为市购。 本专利技术的有益效果为：本专利技术将本专利技术的鉴定鸡种的方法能够很好的从分子学水 平鉴定出雪山草鸡，应用这种分子标记鉴定鸡种，操作相对简单，特异性高而且重复性高， 也为家禽品种资源的正确保存和合理利用增添了新的科学依据。【附图说明】 图1是本专利技术的琼脂糖凝胶电泳图。 图中：1、雪山草鸡；2、罗斯鸡；3、斗鸡；4、乌骨鸡；5、鹿苑鸡；6、安卡鸡；7、油鸡； 8、文昌鸡；9、太湖鸡；10、溧阳鸡。【具体实施方式】 实施例1 本专利技术提供了 一种特异性的分子标记在鉴定雪山草鸡中的应用，所述分子标记的 包括如SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列。所述分子标记来源于雪山草鸡的16号染色体BRD2 基因的3'UTR区域。扩增所述分子标记的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID N0 :2所示；扩 增所述分子标记的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID N0 :3所示。 如表1所示为雪山草鸡与其他鸡种16号染色体BRD2基因的3'UTR区域的基因片 段，由于雪山草鸡与其他鸡种在16号染色体BRD2基因的3' 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种特异性的分子标记在鉴定雪山草鸡中的应用，其特征在于：所述分子标记包括如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：常国斌，王洪志，徐璐，李志腾，万方，张康宁，袁青妍，许盛海，陈国宏，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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