细胞色素Ｃ乙酰化的检测和调节制造技术

本发明专利技术涉及细胞色素ｃ乙酰化的检测和调控。本发明专利技术具有对于神经退行性病症和癌症的诊断和治疗应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及诊断和治疗神经退行性疾病和癌症的方法。
技术介绍
细胞色素c是线粒体内膜中的含血红素蛋白，其中其是电子传递链的成分。细胞色素C也是内源性凋亡途径(intrinsic apoptotic pattiway)的一部分。在经历细胞凋亡的细胞中，细胞色素c从线粒体膜释放出来，与凋亡蛋白酶活化因子1 (apoptotic protease-activating factor-1) (APAFl)相互作用，从而形成凋亡体，该凋亡体激活参与介导细胞死亡的胱天蛋白酶(caspases)。细胞色素c的释放和细胞至细胞凋亡的细胞定向(commitment)是被高度调控的过程，并且代表了与细胞凋亡相关的病症的靶调控步骤。已显示细胞色素c活性通过多个因子来调控，包括BCL2家族成员、胱天蛋白酶、热激蛋白、影响线粒体分裂/融合的蛋白质、 钙水平、细胞色素c的氧化还原状态的调控、亚硝基化作用、组蛋白Hl. 2和细胞溶胶p53 (0w 等人，Q008) Nat Rev Mol Cell Biol 9:532-542)。专利技术概述本文中描述了用于调控细胞色素c的新型方法，包括乙酰化的调控。已显示细胞色素 C乙酰化与细胞经历细胞凋亡相关联。因此，细胞色素C乙酰化水平的检测已用于神经退行性病症的诊断，并且细胞色素C的脱乙酰化代表了用于治疗神经退行性病症的治疗方法。 此外，通过细胞色素C的乙酰化产生的细胞凋亡的诱导和细胞色素C水平的监控具有对于癌症的诊断和治疗性应用。本专利技术的方面涉及用于通过检测受试者的样品中乙酰化细胞色素c水平表征受试者患神经退行性病症的风险的方法，其中相对于预定值，受试者的样品中升高的乙酰化细胞色素c水平标示着增加的患神经退行性病症的风险。样品中乙酰化细胞色素c的水平可通过本领域技术人员已知的任意方法例如使用特异性结合乙酰化细胞色素c的抗体和/ 或通过使用质谱法来检测。在本专利技术的一些实施方案中，用于表征受试者的神经退行性病症的风险的方法包括检测受试者的样品中相应于全长野生型细胞色素c多肽中的残基K40的赖氨酸残基的乙酰化，其中受试者的样品中相应于全长野生型细胞色素c多肽中的残基K40的赖氨酸残基的乙酰化的存在表示受试者具有增加的患神经退行性病症的风险。在某些实施方案中，通过质谱法检测赖氨酸残基K40的乙酰化。在本专利技术的一些实施方案中，用于表征受试者患神经退行性病症的风险的方法包括检测受试者的样品中相应于全长野生型细胞色素c多肽的残基K74的赖氨酸残基的乙酰化，其中受试者的样品中相应于全长野生型细胞色素c多肽中的残基K74的赖氨酸残基的乙酰化的存在表示受试者具有增加的患神经退行性病症的风险。在某些实施方案中，通过质谱法检测赖氨酸残基K74的乙酰化。在一些实施方案中，用于表征受试者患神经退行性病症的风险的方法包括检测受试者的样品中相应于全长野生型细胞色素C多肽的残基K40和K74的赖氨酸残基的乙酰化，其中相应于全长野生型细胞色素c多肽中的残基K40和K74的赖氨酸残基的乙酰化的存在表示受试者具有增加的患神经退行性病症的风险。在某些实施方案中，通过质谱法检测赖氨酸残基K40和K74的乙酰化。本专利技术的方面涉及用于诊断受试者的神经退行性病症的方法，包括检测受试者的样品中乙酰化细胞色素c水平，其中相对于预定值，受试者的样品中升高的乙酰化细胞色素c水平标示着神经退行性病症。在某些实施方案中，通过使用特异性结合乙酰化细胞色素c的抗体和/或通过使用质谱法检测受试者的样品中乙酰化细胞色素水c的水平。本专利技术的其他方面涉及用于评估疗法在患有神经退行性病症的受试者中的功效的方法，包括检测受试者的样品中细胞色素c的乙酰化水平，其中相对于预定值，受试者的样品中细胞色素c的乙酰化水平标示着所述疗法是否有效。在某些实施方案中，通过使用特异性结合乙酰化细胞色素C的抗体和/或通过使用质谱法检测受试者的样品中乙酰化的细胞色素C的水平。本文中还描述了用于治疗患有神经退行性病症的受试者的方法，包括给需要此种治疗的受试者施用有效量的化合物以使受试者的乙酰化细胞色素c水平降至低于预定值，其中所述化合物是激活sirtuin的化合物。在一些实施方案中，本专利技术包括抑制细胞的细胞凋亡，其中通过将所述细胞与使细胞色素c脱乙酰化的试剂接触来乙酰化细胞色素 c。使细胞色素c脱乙酰化的试剂可以是脱乙酰酶蛋白例如sirtuin。在一些实施方案中， sirtuin 是 SIRT3。本专利技术的其他方面涉及通过进行确定患者是否患有癌症(所述癌症显示相应于全长野生型细胞色素c多肽中的残基K40和K74的赖氨酸残基的脱乙酰化)的测定来确定癌症患者是否应当用乙酰细胞色素c的试剂来进行治疗，其中如果患者患有显示相应于全长野生型细胞色素c多肽中的残基K40和K74的赖氨酸残基的脱乙酰化的癌症，那么患者是利用乙酰化细胞色素c的组合物的治疗的候选者。本文中描述了用于诱导细胞的细胞凋亡的方法，其中通过将所述细胞与乙酰化细胞色素c的试剂接触来使细胞色素c脱乙酰化，从而诱导细胞的细胞凋亡。在一些实施方案中，细胞存在于体内并且所述方法还包括将细胞与另外的治疗剂接触。本专利技术的一些实施方案包括方法，所述方法通过将显示细胞色素C的脱乙酰化的癌细胞与以有效地减少癌细胞的活力的量的乙酰化细胞色素C的试剂接触来减少所述癌细胞的活力。在一些实施方案中，细胞存在于体内并且所述方法还包括将所述细胞与另外的治疗剂接触。本文中还描述了特异性结合乙酰化细胞色素c多肽的表位的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位包含相应于全长野生型人细胞色素c氨基酸序列中的残基K40的乙酰化残基。在一些实施方案中，分离的抗体或其抗原结合片段以约1 χ IO-6MU χ ΙΟ"7 MU χ IO"8 MU χ IO-9MU χ 1(T1QM、5 χ 1(T1Q M 或 1 χ 1(Γ" M 或更小的结合亲和力特异性结合表位。在某些实施方案中将抗体或其抗原结合片段连接至可检测的标记物。本文中还包括编码此类抗体的核酸分子、含有此类核酸分子的杂交瘤和产生此类抗体的杂交瘤细胞系。本专利技术的方面还包括含有编码本文中描述的抗体或抗原结合片段的分离的核酸分子的表达载体、用此类表达载体转化或转染的宿主细胞和产生本文中描述的抗体或抗原结合片段的质粒。在一些实施方案中，本专利技术涉及包含本文中描述的抗体或抗原结合片段的组合物。本文中还描述了特异性结合乙酰化细胞色素c多肽的表位的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述表位包含相应于全长野生型人细胞色素c氨基酸序列中的残基Κ74 的乙酰化残基。在一些实施方案中，分离的抗体或其抗原结合片段以约1 χ IO-6MU χ ΙΟ"7 MU χ IO"8 MU χ IO-9MU χ 1(T1QM、5 χ 1(T1Q M 或 1 χ 1(Γ" M 或更小的结合亲和力特异性结合表位。在某些实施方案中，将抗体或其抗原结合片段连接至可检测的标记物。本文中还包括编码此类抗体的核酸分子、含有此类核酸分子的杂交瘤和产生此类抗体的杂交瘤细胞系。本专利技术的方面还包括含有编码本文中描述的抗体或抗原结合片段的分离的核酸分子的表达载体、用此类表达载体转化或转染的宿主细胞和产生本文中描述的抗体或抗原结合片段的质粒。在一些实施方案中，本专利技术涉及包含本文档来自技高网...

【技术保护点】
表征受试者患神经退行性病症的风险的方法，所述方法包括：检测受试者的样品中乙酰化细胞色素ｃ的水平，其中相对于预定值，受试者的样品中升高的乙酰化细胞色素ｃ水平标示着增加的患神经退行性病症的风险。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：AV哈夫纳，
申请(专利权)人：哈佛大学校长及研究员协会，
类型：发明
国别省市：US