使用磁性标记进行的肌钙蛋白Ｉ测定制造技术

本发明专利技术涉及一种用于测量样品中的肌钙蛋白Ｉ的方法，包括步骤：提供样品；使样品接触与磁性标记耦合的抗肌钙蛋白Ｉ单克隆抗体；使样品接触与传感器表面耦合的抗肌钙蛋白Ｉ多克隆抗体；以及检测传感器表面上的磁性标记。本发明专利技术还涉及一种用于测量样品中的肌钙蛋白Ｉ的设备及药筒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于测量样品中的肌钙蛋白I的方法、设备和药筒。本专利技术还涉及在诊断心肌梗死过程对这种方法、设备和药筒的使用。
技术介绍
在诊断心肌梗死中，测量血液中的肌钙蛋白I是重要的步骤。对肌钙蛋白I的最先进的生物分析是基于利用发光检测进行的实验室高灵敏度的非均相免疫测定。这涉及从化学反应发射光，或者发射标记的可视化。使用这种免疫测定得到pg/mL量级的免疫测定灵敏度。一般地，在针对高处理量测量而设计的大型自动检测系统上执行这些测定，并且这些测定并不适合于由非技术用户在中央实验室以外进行快速测试。在现有技术中已知将磁性标记用作检测标记的免疫测定。这种测定实现磁性致动并且减少测定时间。在这些测定中，磁性标记由于其的大尺寸而被空间位阻，并且不像分子标记(例如，放射性碘、酶标记等)那样容易地与具有分子受体的表面结合。另外，由于标记在测定期间被磁化，因此标记之间接触的持续时间增加，这提高了磁性标记不可逆地聚集以及丢失定量信息的概率。当使用更大的磁性粒子(> 200nm)时，这可能成为严重的问题，因为更大的磁性粒子更易于形成不可逆的群聚。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供用于测量样品中的肌钙蛋白I的灵敏且快速的方法。该目的是通过用于测量样品中的肌钙蛋白I的方法实现的，该方法至少包括以下步骤-提供样品-使样品接触与磁性标记耦合的抗肌钙蛋白I单克隆抗体-使样品接触与传感器表面耦合的抗肌钙蛋白I多克隆抗体，或者接触与传感器表面耦合的至少两种不同的抗肌钙蛋白I抗体-检测传感器表面上的磁性标记其中，步骤b和c能够以任意次序执行。下文中“抗肌钙蛋白I多克隆抗体”意在包括抗肌钙蛋白I多克隆抗体和至少两种不同抗肌钙蛋白I抗体这两者。“以任意次序”包括使样品同时接触抗肌钙蛋白I单克隆抗体和多克隆抗体。优选地，步骤b在步骤c之前。该步骤顺序改进了测定结合，因为与磁性标记耦合的抗肌钙蛋白I单克隆抗体相对于与传感器表面耦合的抗肌钙蛋白I多克隆抗体具有更多的自由度。该实施例使得测定时间减少。本专利技术提供针对肌钙蛋白I的快速免疫测定试验，其允许利用小的样品体积在5 分钟内进行对肌钙蛋白I的灵敏检测。由于附着到其相应表面的一抗和二抗的移动性降低导致相对大尺寸的标记与大块传感器表面的结合是具有挑战性的。在溶液中工作良好并且由抗体供应商推荐的肌钙蛋白I的抗体不会在1步磁性标记测定中产生高信号。在不希望受到该理论的约束的情况下，造成这一点的原因可能是由于对于在磁性标记测定中使抗体为进行结合而最优地取向而言，需要更严格的条件。与供应商数据表针对肌钙蛋白I测定推荐的抗体耦合相比，与磁性标记耦合的抗肌钙蛋白I单克隆抗体和与传感器表面耦合的抗肌钙蛋白I多克隆抗体的组合给出改进的结果。在优选实施例中，磁性标记是包括无机材料，或者诸如聚合物基质中的氧化铁细粒的无机材料和有机材料的组合的粒子。使用磁性标记实现了磁性致动，加速测定的反应动力学。另外，使用磁性标记促进了通过磁场优选结合梯度移除未复合到传感器表面的与抗肌钙蛋白I单克隆抗体结合或未结合的任何标记。该实施例不再需要额外的冲洗步骤以识别针对背景结合的特定信号。在优选实施例中，所使用的磁性标记具有200至IOOOnm的尺寸。该尺寸范围下的粒子允许最优的测定条件和检测。在另一优选实施例中，所使用的抗肌钙蛋白I多克隆抗体是抗肌钙蛋白I山羊多克隆抗体。使用山羊多克隆抗体得到优化的测定结果。在另一实施例中，磁性标记以光学方式进行检测，优选通过受抑全内反射(FTIR) 进行检测。在又一实施例中，磁性标记以磁性方式进行检测。另外地或备选地，设想能够基于第二磁性标记或第二非磁性标记的存在而检测磁性标记。该第二标记能够直接附着于磁性标记，或者间接地通过分析物结合到该磁性标记。 非磁性标记能够经由无机或有机成份在磁性标记外部附着于磁性标记，或者能够并入到磁性标记中。在本专利技术背景下，合适的第二标记为在体外测定中典型使用的那些标记，例如但不限于发色基团、放射性标记、场致发光标记、化学发光标记、磷光标记、荧光标记或反射标记。本专利技术的目的还通过能够根据本专利技术的方法测量肌钙蛋白I的生物传感器设备实现。另外，本专利技术的目的通过在测定设备中使用的药筒实现，该药筒包括-与磁性标记结合的抗肌钙蛋白I单克隆抗体-在药筒内与传感器表面结合的抗肌钙蛋白I多克隆抗体-样品入口优选地，药筒中的磁性标记具有200至IOOOnm的尺寸。在药筒的优选实施例中，抗肌钙蛋白I多克隆抗体是山羊多克隆抗体。本专利技术将通过具体实施例并参考附图进行描述，但本专利技术不限于此。不应将权利要求中的附图标记解释为限制范围。所描述的附图仅为示意性的而非限制性的。在附图中， 出于图解说明的目的，某些元件的尺寸被放大，且并非按照比例绘制。在本说明书和权利要求中使用“包括” 一词处，不排除其他元件或步骤。当指代诸如“一”或“一个”、“该”的单数名词而使用的不定冠词或定冠词处，除非另有详细说明，否则其包括多个该名词。另外，在说明书和权利要求中的“第一”、“第二”、“第三”等术词用于区分相似元件，而并非必须用于描述顺序或时间次序。将理解的是，在适当情况下，如此使用的术语是可互换的，并且这里描述的本专利技术的实施例能够以这里描述或图解说明以外的其他顺序操作。提供以下术语或定义仅为了辅助理解本专利技术。不应这些定义解释为具有比本领域技术人员所理解的范围更小的范围。附图说明图1为根据本专利技术的测定的示意性表示；图2为肌钙蛋白I的剂量响应曲线。具体实施例方式本专利技术公开了一种用于通过免疫测定检测肌钙蛋白I，优选为哺乳动物肌钙蛋白 I，更优选为人类肌钙蛋白I的方法。测定使用两种不同的抗体，与磁性标记耦合的抗肌钙蛋白I单克隆抗体以及与传感器表面耦合的抗肌钙蛋白I多克隆抗体。图1示出了根据本专利技术的测定的示意性设置。 在图IA中，潜在包括肌钙蛋白I(I)的样品接触与磁性标记(3)耦合的抗肌钙蛋白I单克隆抗体O)。样品还接触与传感器表面( 耦合的抗肌钙蛋白I多克隆抗体G)。抗肌钙蛋白I单克隆和多克隆抗体被选择为使得感兴趣分析物，即在当前情况下的肌钙蛋白I，能够同时结合到抗肌钙蛋白I单克隆和多克隆抗体。如果样品中存在肌钙蛋白I，则在传感器表面上形成包括与传感器表面耦合的多克隆抗体、肌钙蛋白I和与磁性标记耦合的单克隆抗体的复合物(6)。这在图IB中示意性示出。优选地，在移除包括并非经由肌钙蛋白I特异性复合至所述表面的磁性标记或任何裸磁性标记的抗肌钙蛋白I单克隆抗体之后，确定在传感器表面上存在肌钙蛋白I的量。在以下部分中描述本专利技术的要素。^^根据本专利技术的单克隆抗体也包括来自单克隆抗体的Fab片段、适体、亲和体、scFv 片段以及本领域技术人员已知的任何其他单表位结合部分(moiety)。根据本专利技术的多克隆抗体也包括来自多克隆抗体的Fab片段以及本领域技术人员已知的具有可变结构的结合部分的任何组。在优选实施例中，根据本专利技术的抗体针对肌钙蛋白I分子的氨基酸序列30-110， 更优选地80-110。这是分子的稳定部分。优选地，所选择的表位不与用于肝素结合的已知区域重叠，肝素结合将导致来自肝素样品的干扰。优选地，从包括以下的组中选择抗肌钙蛋白I单克隆抗体克隆A34500(与肌钙蛋白I的氨基酸87-91结合)、8I-7(a3本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种用于测量样品中的肌钙蛋白Ｉ的方法，其至少包括以下步骤：ａ．提供样品ｂ．使所述样品接触与磁性标记耦合的抗肌钙蛋白Ｉ单克隆抗体ｃ．使所述样品接触与传感器表面耦合的抗肌钙蛋白Ｉ多克隆抗体，或者接触与传感器表面耦合的至少两种不同的抗肌钙蛋白Ｉ抗体ｄ．检测所述传感器表面上的所述磁性标记，其中，能够以任意次序执行步骤ｂ和ｃ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：W·U·迪特默，
申请(专利权)人：皇家飞利浦电子股份有限公司，
类型：发明
国别省市：NL