多肽HM-3纳米颗粒及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种多肽HM‑3纳米颗粒及其应用，其特征在于多肽HM‑3纳米颗粒由多肽HM‑3，海藻酸钠，壳聚糖，聚乳酸‑羟乙酸共聚物（PLGA），乳化剂，药用辅料等组成。本发明专利技术提供的多肽HM‑3纳米颗粒，将多肽HM‑3包裹在内水相中，提高了多肽HM‑3的稳定性，同时控制多肽HM‑3的释放，延长血浆半衰期。本发明专利技术提供的多肽HM‑3纳米颗粒可以在治疗与血管新生相关的疾病，如肿瘤和年龄相关性黄斑变性等中应用。

【技术实现步骤摘要】
多肽HM-3纳米颗粒及其制备方法
本专利技术涉及HM-3纳米颗粒及其制备方法，主要涉及HM-3纳米颗粒的一种制备方法。
技术介绍
抗肿瘤多肽药物HM-3为整合素阻断剂多肽序列为：Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp，该序列包含了整合素配体序列(Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp)和新生血管抑制序列(Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro)，其中整合素配体序列中含有RGD序列(Arg-Gly-Asp)，整合素阻断剂多肽序列可以有效地结合于肿瘤特异性表达的整合素亚型,并且该序列中含有新生血管抑制序列，从而抑制肿瘤新生血管形成，进而达到抑制肿瘤生长和转移的效果。前期研究表明其作用靶点为整合素αvβ3和α5β1，但主要的结合靶点仍为整合素αvβ3。该多肽经反复体内外活性评价证实具有较好的抑瘤效果，能够显著抑制内皮细胞迁移、抑制肿瘤新生血管生成，从而抑制肿瘤的生长。然而上述多肽的半衰期短，临床需每天二次静脉注射给药，这给患者带来了一定的痛苦。纳米粒粒径介于1-1000nm，该体系依然是热力学不稳定体系。纳米乳粒径小，有较好的稳定性。纳米粒粒径小于光波长，呈现半透明状。纳米粒作为载体具备以下优势：(1)相比于微乳，使用的表面活性剂少(2)稳定性好，有良好的渗透性(3)可以作为不稳定的脂质体和囊泡的替代(4)可以作为制备纳米胶囊和纳米球的初始物。这些优点使得纳米粒在美容业、农业、化工业、药剂学等领域得到了广泛应用。聚乳酸-羟乙酸共聚物(PLGA)又名丙交酯乙交酯，聚乙丙交酯等。它由羟乙酸(或称乙醇酸)和乳酸聚合而成，是一种生物可降解高分子材料。由于其易于合成，生物兼容性，生物可降解，机械性强，降解速度可调节性和良好的可塑性。近年来被大量用作控释系统的骨架材料。对于治疗剂量低，需要长时间内持续给药的蛋白，多肽，激素类药物，PLGA纳米粒控释系统是相当理想的载药系统。PLGA纳米粒包裹水溶性药物最常的制备方法是乳化溶剂挥发法，即首先将小体积的药物溶液与PLGA的二氯甲烷溶液混合，制成初乳。然后将初乳顷入含有乳化剂的水溶液中制备复乳，最后挥干溶剂，洗涤，冻干即得纳米粒。此种制备方法存在的主要问题之一是药物的突释，通常在24小时内释放20％～50％的蛋白药物。采用w/o/w复乳法制备PLGA纳米粒多可形成多孔性纳米粒。一般小且多孔的纳米粒具有较大的表面积，因此，最终产生较低的包封率和较高的突释。在常压或真空干燥的过程中，水分在蒸发之前向基质的表面转移，同时，药物也通过对流向表面扩散，导致药物在聚合基质中的不均匀分布。聚合物基质中药物的不均匀分布造成干燥和储藏阶段药物的转移，且真空干燥使孔隙率更大。给药初期的突释有可能导致血药浓度接近或超过中毒水平，产生明显的毒副作用。因此，突释现象已成为PLGA微球控释系统研究者面临的一个亟待解决的问题。许多因素可以影响突释，在复乳法制备PLGA纳米粒过程中，常常采用提高PVA浓度，以减压溶剂挥发代替常压溶剂挥发法，在内水相中加入一定比例的Tween20,有机相中加入甘油，乙醇，连续相中加入盐或者糖，改变有机相比例或新复合物以抑制突释，甚至待纳米粒成型但未冻干前反复洗涤以增加载包封率和载药量，减少突释，从而使制剂有效作用时间缩短。附加剂会改变PLGA纳米粒表面特征及多肽，蛋白的载药率和体外释放。在制备纳米粒时共同包裹附加剂以改变纳米粒的形态，载药及释药，已经引起研究者的关注，已报到一些附加剂能减少蛋白聚集变性，但多使蛋白释放加快，如甘油三葵酸酯，麦芽糖以及PEG.通过改变微球骨架材料的组成，骨架性质可以降低突释，例如采用嫁接PVA的PLGA材料制备纳米粒。另一种方式是用具有较高粘度的聚合物材料对突释严重的微球进行包衣。PLGAPLA双层微球是一种特殊的包衣形式。利用PLGA,PLA在一定条件相分离的特性制备纳米粒，具有PLA为壳，含药PLGA为核的双层结构。不含药的PLA层对药物的释放构成屏障，减少突释；将药物储库包入PLGA中，也能有效改变突释。Jiang等将胰岛素放入聚丙烯乙基淀粉凝胶中，再用溶剂抽提、挥干法将PLGA包裹于凝胶微粒之外，构成突释小，释放缓慢的纳米颗粒。HM-3纳米颗粒延长多肽HM-3分子的体内半衰期、清除率低、降低了免疫原性和抗原性，改善药物体内分布和动力学行为，并且抗肿瘤活性增加，降低了给药频率提高了病人的耐受性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抗肿瘤药HM-3纳米颗粒的制备方法，其可以降低突释和延长半衰期，同时具有靶向功能。本专利技术纳米颗粒的主要组成为：多肽HM-3，海藻酸钠，壳聚糖，聚乳酸-羟基乙酸共聚物，乳化剂，药用辅料。纳米颗粒粒径为1nm-1000nm。本专利技术的纳米颗粒的为注射制剂、滴眼剂、口服制剂形式。本专利技术的纳米颗粒的制备方法，与传统的w/o/w复乳的溶剂挥发法制备PLGA纳米粒的操作步骤一样简单。在含药物的内水相中添加低浓度的海藻酸钠溶液，加与含有PLGA的有机相形成初乳后，注入含有壳聚糖，聚乙烯醇(PVA)，氯化钙的混悬液中形成复乳，经室温搅拌挥发固化后，水洗，冷冻干燥即得壳聚糖修饰的PLGA纳米粒。本专利技术HM-3纳米颗粒的制备方法主要通过以下方案实现：所述的一种多肽HM-3纳米颗粒制备方法，其特征在于：将多肽HM-3溶于质量体积比为0.0001％-50.000％(w/v)的海藻酸钠溶液组成内水相，称取PLGA1-1000mg溶于二氯甲烷作为有机相，两相混合后超声，充分乳化后注入混悬液中，搅拌挥发有机溶剂，离心除去不溶物，蒸馏水洗涤后冷冻干燥即可。混悬液由0.0001％-50.000％(w/v)PVA、0.0001％-50.000％(w/v)壳聚糖溶液，0.0001％-50.000％(w/v)氯化钙混合后形成的。所述的超声条件为10-1000w，1-60min超声。进一步来说：将多肽HM-3溶于质量体积比为0.0001％-50.000％(w/v)的海藻酸钠溶液组成内水相，称取PLGA1-1000mg溶于二氯甲烷作为有机相，两相混合后置探头式超声仪，于10-1000瓦(w),1-60min超声，充分乳化后注入混悬液中(0.0001％-50.000％PVA0.0001％-50.000％壳聚糖溶液，0.0001％-50.000％氯化钙组成的混合溶液的混悬液)，室温搅拌挥发有机溶剂，离心除去不溶物，蒸馏水洗涤后冷冻干燥即可。本专利技术方法的使包囊在PLGA纳米粒中的多肽HM-3有一个相对亲水的微环境，从而很好地保护了多肽药物，同时延长抗肿瘤多肽药物的半衰期。本专利技术的有益效果：在含多肽HM-3和低浓度的海藻酸钠溶液的内水相中添加壳聚糖，氯化钙，PVA混悬液，对PLGA微球表面进行修饰，而获得疏水性PLGA微球，即纳米颗粒。这种修饰作用可以使PLGA纳米颗粒包封率本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽HM-3纳米颗粒，其特征是：包括多肽HM-3，海藻酸钠，壳聚糖，聚乳酸-羟基乙酸共聚物，乳化剂，药学可接受的辅料。/n

【技术特征摘要】
1.一种多肽HM-3纳米颗粒，其特征是：包括多肽HM-3，海藻酸钠，壳聚糖，聚乳酸-羟基乙酸共聚物，乳化剂，药学可接受的辅料。


2.根据权利要求1所述的多肽HM-3纳米颗粒，其特征是：纳米颗粒含有聚乙烯醇，海藻酸钠，壳聚糖，聚乳酸-羟基乙酸共聚物的混合物。


3.根据权利要求1所述的多肽HM-3纳米颗粒，其特征是：抗肿瘤多肽药物HM-3制备成缓释给药剂型。


4.根据权利要求1所述的多肽HM-3纳米颗粒，其特征是：HM-3纳米颗粒为注射剂、滴眼剂、口服剂形式。


5.根据权利要求1所述的多肽HM-3纳米颗粒在制备治疗与血管新生相关的疾病药物中的应用。


6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述的血管新生相关的疾病药物为肿瘤或年龄相关性黄...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛建鹏，徐寒梅，李则青，李应锋，袁松涛，王瑱，李铎，谢可人，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32