一种具有免疫调节和抗肿瘤作用的药物制造技术

本发明专利技术属于药物治疗领域，特指一种具有免疫调节和抗肿瘤作用的药物。公开了一种具有抑制PD‑L1蛋白，激活免疫功能的小分子药物及其免疫调节和抗肿瘤作用。该药物为小分子阿尼芬净。本发明专利技术首次提出阿尼芬净可以与抑制免疫检查点PD‑L1结合并发挥免疫调节作用治疗肿瘤疾病，阿尼芬净的免疫调节和抗肿瘤作用将是一个很有前景的老药新用途临床策略，为免疫抗肿瘤小分子化合物研究提供参考。

【技术实现步骤摘要】
一种具有免疫调节和抗肿瘤作用的药物
本专利技术属于医药治疗领域，特指一种具有免疫调节和抗肿瘤作用的药物，具体涉及小分子药物阿尼芬净及其在制备对PD-L1抑制、实现免疫抗肿瘤作用药物中的用途。
技术介绍
肿瘤的发生发展伴随着肿瘤的免疫逃逸，肿瘤细胞可通过调整自身和微环境状态来抑制免疫细胞的活性，抑制了机体的正常免疫状态，最终逃避机体的免疫监视，营造出有利于肿瘤生长的环境，从而大量繁殖危害生命。传统的“手术+放疗+化疗”手段应答率低，靶向性差，具有严重的不良反应。近年来，肿瘤免疫治疗成为近年肿瘤治疗领域的研究热点，主要通过增强免疫原性和抑制免疫检查点两个方面，包括肿瘤疫苗，CAR-T疗法和免疫检查点抑制剂等。其中，与肿瘤疫苗和细胞疗法不同，免疫检查点抑制剂是通过阻断肿瘤免疫检查点激发肿瘤特异性T细胞功能，从而改善抗肿瘤免疫达到抗肿瘤效果。程序性死亡受体1(programmeddeath1,PD-1，CD279)及其配体(programmeddeath1ligand,PD-L1,CD274)是目前研究最为广泛的免疫检查点，PD-1表达于T细胞表面，当机体被肿瘤入侵时，肿瘤表面会高表达PD-L1，这时处于肿瘤微环境中的T细胞上的PD-1会肿瘤表面的PD-L1结合，从而抑制T细胞的活化，下调IFN-γ，IL-4等免疫相关因子的表达，从而造成肿瘤的免疫逃逸。目前已有大量针对此免疫检查点研究获得的单克隆抗体出现。2016年，第一个靶向免疫检查点PD-1的单克隆抗体抑制剂Pembrolizumab上市用于晚期黑色素瘤和非小细胞肺癌的治疗。随后，针对PD-1/PD-L1的单克隆抗体包括Nivolumab,Atezolizumab,Avelumab以及Durvalumab相继上市，对肾细胞癌、尿路上皮癌以及非小细胞肺癌具有显著治疗效果。然而，目前上市的免疫检查点抑制剂都为单克隆抗体，虽然能够很好地靶向到肿瘤细胞表面，却存在半衰期长、口服生物利用度低、储存运输困难以及生产成本较高等缺点，而且因其特异性强，往往在治疗后期会激活其它免疫检查点导致单药有效率低。因此，开发结构多样性的小分子化合物代替大分子抗体有望解决上述问题，具有重要实际意义。阿尼芬净(Anidulafungin)，是一种棘白菌素类抗真菌药，其结构如下：阿尼芬净能抑制真菌中葡聚糖合成酶，从而抑制真菌中的主要成分1,3,β-D葡聚糖的合成，对念珠菌、曲霉菌有抗菌活性，对器官移植后长期使用免疫抑制剂所诱发的真菌感染具有显著效果，其在血浆中缓慢降解，最后经胆汁由粪便排泄，对肝脏肾脏影响极小。但目前未有阿尼芬净可以抑制PD-L1，具有免疫抗肿瘤作用的报道。本专利技术提供了阿尼芬净的新用途，通过结合抑制PD-L1，实现免疫抗肿瘤作用。
技术实现思路
本专利技术提供了一种具有免疫抗肿瘤作用的药物，该药物为FDA批准上市的抗真菌药物阿尼芬净。本专利技术还提供了阿尼芬净作为PD-L1小分子抑制剂，激活免疫以及抗肿瘤相关的活性，该化合物与免疫检查点PD-L1蛋白具有体外结合能力，其结合亲和力KD＝7.69×10-5M。该化合物对人肺腺癌细胞A549以及小鼠肺癌细胞LLC均具有一定的抑制作用，其IC50分别为170.6μg/ml和160.9μg/ml。并且该化合物对于LLC-荷瘤小鼠具有一定的体内抗肿瘤作用，且毒作用较小，当阿尼芬净浓度为25mg/kg和50mg/kg时，荷瘤小鼠体内的肿瘤体积和重量均显著小于空白组(P<0.01)。此外，阿尼芬净可作为潜在PD-L1抑制剂激活免疫系统产生抗肿瘤作用，当浓度为5mg/kg和25mg/kg时，荷瘤小鼠体内的IFNγ浓度显著高于空白组和对照组(P<0.01)。本专利技术提供的小分子药物阿尼芬净能在体内和体外产生良好的抗肿瘤效果，并且具有结合PD-L1产生抑制作用从而激活免疫抗肿瘤通路的潜在功能。附图说明图1为配制好的样品溶液和蛋白溶液加料顺序示意图。图A和图B分别代表了同一个96孔板上的溶液加料和传感器的位置顺序。图2为PD-L1与阿尼芬净的体外相互作用动力学过程图。曲线前半段为小分子与PD-L1的体外结合阶段，后半段为解离阶段，图中曲线从上到下依次是阿尼芬净浓度2.5、1.25、0.625、0.3125μM时与PD-L1蛋白结合-解离的动态过程。图3为阿尼芬净对人肺腺癌细胞A549的体外抑制效果图。其中，阿尼芬净的浓度依次为5、25、50、100、200μg/ml，经计算得IC50为170.6μg/ml。图4为阿尼芬净对小鼠肺癌细胞LLC的体外抑制效果图。其中，阿尼芬净的浓度依次为5、25、50、100、200μg/ml，经计算得IC50为160.9μg/ml。图5为阿尼芬净对LLC-荷瘤小鼠的体内肿瘤抑制效果图。以空白对照为参考，对各给药组的小鼠肿瘤体积进行统计学分析，考察阿尼芬净与对照药物的体内抑瘤效果差异。“***”表示给药组与空白对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。图6为阿尼芬净对LLC-荷瘤小鼠的体重影响图。以空白对照为参考，对各给药组的小鼠体重进行统计学分析，考察阿尼芬净与对照药物对小鼠体重的影响差异。“***”表示给药组与空白对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。图7为阿尼芬净对LLC-荷瘤小鼠的血液IFNγ表达的影响图。以空白对照为参考，对各给药组的小鼠血液IFNγ表达量进行统计学分析，考察阿尼芬净与对照药物对免疫因子IFNγ表达的影响差异。“***”表示阿尼芬净组与阳性对照组的IFNγ表达与空白对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。具体实施方式以下结合附图，通过具体的实施例对本专利技术作进一步描述，这些实施例仅用于说明本专利技术，并不是对本专利技术保护范围的限制。本专利技术首先在体外用生物膜干涉分子间相互作用分析系统(FortebioOCTETRed96e)分析了体外阿尼芬净与PD-L1的相互作用。接下来用阿尼芬净分别处理人肺腺癌细胞A549以及小鼠肺癌细胞LLC，之后构建了体内LLC-荷瘤小鼠模型，用阿尼芬净、阳性对照药物durvalumab以及阴性对照5-FU分别处理，并采用ELISA试剂盒对小鼠血浆中的IFNγ表达进行了测定。实施例1阿尼芬净与PD-L1体外结合实验为了测定阿尼芬净与PD-L1的体外结合，本专利技术采用FortebioOCTETRed96e系统，该系统运用生物膜层反射光干涉(Bio-layerInterferometry,BLI)原理，即生物分子结合在传感器表面形成一层生物膜，生物膜对透过传感器的光波造成干涉现象，干涉现象以相位移动的方式被检测，从而可以实时监测传感器上生物分子的变化。基于此原理，本专利技术的实验步骤如下：(1)实验材料生物素(D-Biotin)化后的人源PD-L/B7-H1/CD2741蛋白冻干粉(HisTag)购自北京神州义翘生物科技有限公司，化合物阿尼芬净购自天津狄克特科技有限公司，黑色96孔板，蛋白分子相互作用仪本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有免疫调节和抗肿瘤作用的药物，其特征在于：该药物为小分子化合物阿尼芬净。/n

【技术特征摘要】
1.一种具有免疫调节和抗肿瘤作用的药物，其特征在于：该药物为小分子化合物阿尼芬净。


2.根据权利要求1所述的一种具有免疫调节和抗肿瘤作用的药物，其特征在于：所述药物与免疫检查点PD-L1在体外有合亲和力，阿尼芬净在实验浓度范围2.5-0.3125μM内与PD-L1存在梯度结合与解离，且存在线性关系，阿尼芬净与PD-L1的结合亲和力为7.69×10-5M，且PD-L1与小分子化合物阿尼芬净的结合呈现快结合与快解离的结合模式。

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【专利技术属性】
技术研发人员：冯春来，王思琦，季薇，芮蒙杰，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32