本发明专利技术描述了用于获得基于不同的合成的神经节苷脂GM3变体的纳米颗粒佐剂的方式。取决于在合成的GM3的神经酰胺中存在的脂肪酸的精细结构，可以获得用于特异性地和专门地刺激针对所伴随的抗原的体液或细胞免疫应答的佐剂。特别地，本发明专利技术提供了免疫原性疫苗组合物，其包含肽、多肽或蛋白质和上面提及的纳米颗粒，所述纳米颗粒通过将细菌脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)的外膜复合物(OMC)的疏水蛋白质与完全合成的神经节苷脂GM3变体一起进行分散来形成。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】作为疫苗中的佐剂的包含合成的神经节苷脂GM3变体的纳米颗粒
本专利技术涉及免疫纳米技术和免疫肿瘤学的领域，尤其涉及用于治疗具有癌症和/或由致癌病毒引起的慢性感染的个体的治疗性疫苗。特别地，本专利技术描述了专门用于特异性地在这些患者中刺激细胞或体液免疫效应子的纳米颗粒佐剂，和此外还提供了相应的疫苗组合物。现有技术在几十年的失败的临床试验结果之后，癌症治疗性疫苗的领域未能实现成为有益于患者的有效且低毒性的治疗这一希望。最近的用免疫检查点抑制剂抗体(Abs)获得的临床成功鼓励了在免疫肿瘤学中的商业和科学兴趣，包括癌症疫苗。从这个观点看，这些治疗性疫苗的失败可能归因于诸如下列的因素：抗原的不正确的选择、相对无效的载体/佐剂的使用和分开形式(即没有与允许纠正由肿瘤微环境所施加的负面效应的其他免疫调节剂相组合)的所述疫苗的使用(BrancaM.A.等人,(2016)NatBiotech34(10):1019-24)。传统上，癌症疫苗在其制剂中使用被分类为自身肿瘤相关抗原的蛋白质，所述自身肿瘤相关抗原尽管在肿瘤细胞中异常地表达，但也存在于正常组织中。这些疫苗的临床有效性的坚实证据的缺乏可能部分地归因于中枢性耐受过程，通过该过程发生具有有着针对大多数的这些自身抗原的高亲和力的受体的T细胞的消除(TranE.等人,(2017)NatImmunol18(3):255-62)。因此，基于该类型的抗原的癌症疫苗的成功将会依赖于新型专门佐剂的使用，所述新型专门佐剂能够增强效应T细胞的特异性应答(其在开始时相对微弱)，以致天然地将肿瘤转变为新抗原的来源。这使得能够调动多特异性的和个性化的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的强大作用，其能够根除恶性损伤。最近，现有技术反映了在评价用于设计成功的癌症疫苗的抗原中的改变，其在于选择肿瘤新抗原。这些新抗原的一个有吸引力的来源产生自个体肿瘤突变的个性化检测。该类型的抗原的另一个更受限的来源来自致癌病毒蛋白质的序列。虽然这些经突变的肽的优点可能是对于免疫系统来说是新的(不存在于正常组织中)并因此是更具免疫原性的，但是用这些新抗原设计的新疫苗的成功还将会依赖于新型佐剂，所述新型佐剂能够使CTL应答最大化(其中通过允许其在正确成熟的情形下被抗原呈递细胞(APC)呈递的局部持续性来寻求抗原的最佳可得性)，和另外还纠正肿瘤微环境的免疫抑制效应。另外，真正的新表位的鉴定在实践中是无效的行为。测序研究鉴定出在个体肿瘤中的数千个的体细胞突变并且生物信息学程序预测出数百个的能够结合特异性MHC的肽。但是当分离出它们并且通过质谱法进行研究时，这些新表位中的绝大多数在真实的肿瘤中并不存在，并且甚至更糟，仅很少一些能够刺激CTL应答。这意味着，现行的用于预测和验证新表位的方法学远不能常规地用于使个性化免疫疗法进入临床实践(Editorial,(2017)NatBiotech35(2):97)。在所有类型的疫苗中，合适的佐剂的选择是取得所希望的成功的关键要素。癌症治疗性疫苗的基本目标是诱导B淋巴细胞、T淋巴细胞和先天免疫介体的激活和增殖，以致出现能够识别和破坏肿瘤细胞的体液和细胞免疫效应子，从而导致存活率和患者生活质量的提高。在这个意义下，理想的佐剂应当首先优化抗原对于APC的可得性。其次，应当取得这些APC的有效刺激以便其表达必需的共刺激信号并且分泌特异性的细胞因子和趋化因子。第三，应当能够调节TME以便中和免疫抑制效应。现今，在实践中还不存在具有所有这些特征的佐剂。如KhongH.等人(KhongH.等人,(2016)JImmunotherCancer4:56)所解释的，在被证明最令人感兴趣的用于癌症疫苗的佐剂变体之中的是微颗粒和纳米颗粒，这是由于其可以具有一些所希望的特性，尤其是还作为疫苗载体起作用。可以对这些颗粒制备物进行设计，以致可以有效地将所伴随的抗原引导至特异性APC，通过调节颗粒大小、刚度和净电荷。具有在500-2000nm的范围内的直径的颗粒疫苗在注射位点处优先被APC捕获并移动至淋巴结(LN)，而在20和200nm之间的颗粒被动地引流至LN，在那里它们被常驻的APC获取。最常用于这些目的的微颗粒和纳米颗粒是脂质体、脂蛋白体、合成聚合物和天然聚合物。这些系统中的每一个系统的优点和限制已经详细地描述在现有技术中。与本专利技术特别相关的是XuF.等人(XuF.等人,(2016)ACSNano第10卷:1189-1200)的关于在其组成中包含神经节苷脂GM3的合成纳米颗粒佐剂的描述。该佐剂通过用其中插入了神经节苷脂GM3的脂质膜包被直径为40至80nm的金纳米颗粒来获得。以该方式可以有利地利用糖脂-受体特异性相互作用的原理以进行定向，特别是唾液酰基乳糖与Siglec1(CD169)(其是在激活的树突细胞(DC)上过表达的标志物，所述激活的树突细胞是在LN中与CD4+T细胞的突触的主角)的相互作用。虽然这些包覆有GM3的纳米颗粒在体内选择性地积累在腘LN中存在的CD169+DC中，但在用参考抗原的免疫接种实验中不存在其作为佐剂的可能性的证据，和在肿瘤模型中也不存在任何功效证据。另一方面，该原理仅在直径范围具为40至80nm的纳米颗粒中起作用。Molina等人在专利US7,776,346中描述了用于通过将非常小尺寸的脂蛋白体(VSSP)与确定的免疫原性差的抗原相联合来制备有效的免疫原的方式，所述非常小尺寸的脂蛋白体通过细菌脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseriameningitidis)的外膜蛋白质复合物(OMPC)与神经节苷脂GM3的疏水缀合来形成，这可以被认为最接近本专利技术的技术解决方案。而Rodríguez等人在US6,149,921中已经详细地描述了用于获得这些VSSP的方式，其中强调用于获得这些脂蛋白体的神经节苷脂GM3应当从生物学来源，主要从由于单克隆抗体的工业生产而产生的杂交瘤块来获得。同样地，Estévez等人(Estévez等人,(2000)Vaccine第18卷:90-197)教导，也可以通过采用从犬红细胞开始获得的GM3来产生这些VSSP。在现有技术中已知，如例如LeeH等人(LeeH等人,(2011)IntJMassSpectr第305卷:138-150)所教导的，从任何天然来源获得的神经节苷脂GM3由各种不同分子种类的可变混合物组成，其中寡糖的组成是固定的但神经酰胺是多变的，出现各种不同类型的脂肪酸。除了使用动物或肿瘤起源的成分来产生药用制备物的不方便之外，采用生物学起源的GM3还适度地妨碍获得具有所需的高度可重现的特征的VSSP。关于本专利技术，合乎情理的是确立，没有任何以前的技术解决方案或科学出版物描述了通过使用具有在化学上确定的结构的完全合成的各种不同GM3的制备过程而获得的VSSP变体，其具有令人惊奇的特性，即其作为治疗性疫苗的佐剂的专门用途最终取决于在其获得中所使用的在分子上均质的神经节苷脂GM3，并且由于所述专门化而提供了相对于用来自生物学来源的GM3所产生的VSSP而言具有有利特性的佐剂。因此，本专利技术的新颖性在于提供了两种新的VSSP类型的纳米颗粒佐剂。其中之一采用其神经本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.佐剂，其包含纳米颗粒，所述纳米颗粒通过将完全合成的神经节苷脂GM3变体与细菌脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)的外膜复合物的疏水蛋白质相联合来形成。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171106 CU CU-2017-01371.佐剂，其包含纳米颗粒，所述纳米颗粒通过将完全合成的神经节苷脂GM3变体与细菌脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseriameningitidis)的外膜复合物的疏水蛋白质相联合来形成。
2.根据权利要求1的佐剂，其中在所述神经节苷脂GM3的神经酰胺中存在的脂肪酸为硬脂酸(18:0)。
3.根据权利要求1的佐剂，其中在所述神经节苷脂GM3的神经酰胺中存在的脂肪酸为油酸(18:1)。
4.疫苗组合物，其包含权利要求1-3中任一项的纳米颗粒佐剂，和作为抗原的肽、多肽或蛋白质。
5.权利要求4的疫苗组合物，其任选地包含从包括下列各项的组中选择的其他佐剂：
-氧化铝，和
-油性佐剂。
6.权利要求4-5的疫苗组合物，其中所述抗原为生长因子受体的细胞外结构域或其部分。
7.权利要求4-6的疫苗组合物，其中所述生长因子受体为单独的或相组...
【专利技术属性】
技术研发人员：L·E·费尔南德斯莫利纳，B·桑切斯拉米雷斯，A·菲尔南德斯戈麦斯，G·贝加多贝兹，C·梅萨帕迪略，L·超加西亚，N·冈萨雷斯萨莱斯，D·佩雷斯马丁尼兹，D·R·赫尔南德斯费尔南德斯，M·克鲁兹罗德里格斯，A·A·曼索瓦尔加斯，V·G·维雷斯本科莫，B·I·托伦穆尔吉亚，M·A·洛佩兹罗佩兹，J·A·琼科巴兰科，
申请(专利权)人：分子免疫中心，
类型：发明
国别省市：古巴;CU
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