【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于制备基因工程化细胞的方法和组合物相关申请的交叉引用本申请要求2017年8月9日提交的标题为“用于制备基因工程化细胞的方法和组合物(METHODSANDCOMPOSITIONSFORPREPARINGGENETICALLYENGINEEREDCELLS)”的美国临时申请号62/543,359的优先权，将其内容通过引用以其整体并入。通过引用并入序列表本申请是与电子格式的序列表一起提交的。所述序列表作为2018年7月11日创建的标题为735042010540SEQLIST.txt的文件提供，其大小为35,434字节。将电子格式的序列表中的信息通过引用以其整体并入。
本公开文本涉及用于制备供细胞疗法用的T细胞的方法、由所述方法产生的组合物以及将所述细胞给予受试者的方法。具体地，本公开文本涉及工程化T细胞的制备，所述工程化T细胞是例如表达基因工程化受体的那些，所述基因工程化受体是例如基因工程化抗原受体，如工程化(重组)TCR和嵌合抗原受体(CAR)，或其他重组嵌合受体。所述方法的特征包括与其他方法相比产生更一致的和/或可预测的T细胞产物和/或更低的毒性。所提供的方法包括在刺激条件下孵育细胞，以在经刺激的组合物中诱导与非幼稚样T细胞相比幼稚样T细胞的扩增或增殖，这转而可以导致源自所述幼稚样T细胞的细胞的优先转导。所述方法的特征还可以包括与其他方法相比成本降低、步骤数减少和资源消耗减少。
技术介绍
有多种方法可用来制备用于治疗用途的细胞和给予所述细胞。例如，有方法可用来制备用于工程化和细胞疗法的...
【技术保护点】
1.一种用于基因工程化T细胞的方法，所述方法包括：/n(a)在刺激条件下将输入组合物孵育2与6天之间，所述输入组合物包含含有幼稚样T细胞和非幼稚样T细胞的T细胞群，其中所述刺激条件包括能够激活TCR复合物的一种或多种组分的一个或多个细胞内信号传导结构域和/或一种或多种共刺激分子的一个或多个细胞内信号传导结构域的刺激试剂，从而产生经刺激的组合物；以及/n(b)将编码基因工程化重组受体的核酸引入所述经刺激的T细胞组合物中，其中所述引入是在所述孵育的至少一部分期间进行的。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170809 US 62/543,3591.一种用于基因工程化T细胞的方法，所述方法包括：
(a)在刺激条件下将输入组合物孵育2与6天之间，所述输入组合物包含含有幼稚样T细胞和非幼稚样T细胞的T细胞群，其中所述刺激条件包括能够激活TCR复合物的一种或多种组分的一个或多个细胞内信号传导结构域和/或一种或多种共刺激分子的一个或多个细胞内信号传导结构域的刺激试剂，从而产生经刺激的组合物；以及
(b)将编码基因工程化重组受体的核酸引入所述经刺激的T细胞组合物中，其中所述引入是在所述孵育的至少一部分期间进行的。
2.一种用于基因工程化T细胞的方法，所述方法包括在刺激条件下将输入组合物孵育2与6天之间，所述输入组合物包含含有幼稚样T细胞和非幼稚样T细胞的T细胞群，其中：
所述刺激条件包括能够激活TCR复合物的一种或多种组分的一个或多个细胞内信号传导结构域和/或一种或多种共刺激分子的一个或多个细胞内信号传导结构域的刺激试剂的存在，从而产生经刺激的组合物；并且
在刺激条件下孵育所述输入组合物是在引入编码基因工程化重组受体的核酸之前、期间和/或之后进行的。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述孵育进行至少3天。
4.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述孵育进行至少4天。
5.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述孵育进行至少5天。
6.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述孵育进行至少6天。
7.一种用于刺激T细胞的方法，所述方法包括：
(a)在刺激条件下孵育包含含有培养起始量的幼稚样T细胞或其CD8+T细胞子集的T细胞的输入组合物，从而产生经刺激的组合物，其中所述刺激条件包括能够激活TCR复合物的一种或多种组分的一个或多个细胞内信号传导结构域和/或一种或多种共刺激分子的一个或多个细胞内信号传导结构域的刺激试剂的存在，从而产生经刺激的组合物；以及
(b)将编码基因工程化重组受体的核酸引入所述经刺激的细胞组合物中，其中所述方法由此产生包含表达所述基因工程化重组受体的T细胞的输出组合物。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述T细胞包含幼稚样T细胞和非幼稚样T细胞，其中与所述非幼稚样T细胞相比，所述刺激条件在所述经刺激的组合物中优先诱导所述幼稚样T细胞的扩增或增殖。
9.根据权利要求7或权利要求8所述的方法，其中所述引入是在所述孵育的至少一部分期间进行的或者是在所述孵育之后进行的。
10.根据权利要求7-9中任一项所述的方法，其中所述培养起始量的幼稚样T细胞或其CD8+T细胞子集为从或从约0.1x108至5x108个、从或从约0.1x108至4x108个、从或从约0.1x108至2x108个、从或从约0.1x108至1x108个、从或从约1x108至5x108个、从或从约1x108至4x108个、从或从约1x108至2x108个、从或从约2x108至5x108个、从或从约2x108至4x108个的所述幼稚样T细胞或其CD8+T细胞子集。
11.根据权利要求7-10中任一项所述的方法，其中所述培养起始量的幼稚样T细胞或其CD8+T细胞子集为至少或至少约或者为或为约0.5x108个、0.75x108个、1x108个、1.5x108个、2x108个或4x108个的所述幼稚样T细胞或其CD8+T细胞子集。
12.根据权利要求7-11中任一项所述的方法，其中所述培养起始量的幼稚样T细胞或其CD8+T细胞子集为至少或至少约或者为或为约2x108个的所述幼稚样T细胞或其CD8+T细胞子集。
13.一种用于刺激T细胞的方法，所述方法包括在刺激条件下孵育包含T细胞的输入组合物，所述T细胞包含培养起始量的幼稚样T细胞或其CD8+T细胞子集，即从或从约1x108至4x108个幼稚样T细胞或其CD8+T细胞子集，从而产生经刺激的组合物，其中所述刺激条件包括能够激活TCR复合物的一种或多种组分的一个或多个细胞内信号传导结构域和/或一种或多种共刺激分子的一个或多个细胞内信号传导结构域的刺激试剂的存在，从而产生经刺激的组合物。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述T细胞包含幼稚样T细胞和非幼稚样T细胞，其中与所述非幼稚样T细胞相比，所述刺激条件在所述经刺激的组合物中优先诱导所述幼稚样T细胞的扩增或增殖。
15.根据权利要求13或权利要求14所述的方法，其中所述培养起始量的幼稚样T细胞或其CD8+T细胞子集为至少或至少约或者为或为约2x108个的所述幼稚样T细胞或其CD8+T细胞子集。
16.根据权利要求7-15中任一项所述的方法，其中所述培养起始量是幼稚样CD8+T细胞的量。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述幼稚样T细胞或幼稚样CD8+T细胞：
对选自CD45RA、CD27、CD28和CCR7的T细胞激活标记呈表面阳性；和/或
对选自CD25、CD45RO、CD56、CD62L、KLRG1的标记呈表面阴性；和/或
具有CD95的低表达；和/或
对选自IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的细胞因子的细胞内表达呈阴性。
18.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述幼稚样细胞或所述幼稚样CD8+细胞：
对选自CD45RA、CD27、CD28和CCR7的T细胞激活标记呈表面阳性；和/或
对选自CD45RO、CD56、KLRG1的标记呈表面阴性；和/或
具有CD95的低表达。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述幼稚样T细胞或所述幼稚样CD8+细胞呈CD45RA+、CD27+、CCR7+和/或CD45RO-。
20.根据权利要求1-7、8-12和14-19中任一项所述的方法，其中所述非幼稚样T细胞：
对选自CD45RA、CD27、CD28和CCR7的T细胞激活标记呈表面阴性；和/或
对选自CD25、CD45RO、CD56、CD62L、KLRG1和穿孔素的标记呈表面阳性；和/或
对选自IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的细胞因子的细胞内表达呈阳性；和/或
具有CD95的高表达。
21.根据权利要求1-7、8-12和14-20中任一项所述的方法，其中所述非幼稚样T细胞呈CD45RA-、CD27-、CCR7-和/或CD45RO+。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述输入组合物的细胞在所述孵育之前尚未并且没有经历基于内源性T细胞表面标记的选择步骤，所述内源性T细胞表面标记区分幼稚样与非幼稚样T细胞。
23.根据权利要求13-22中任一项所述的方法，其还包括将基因工程化重组受体引入所述经刺激的细胞中，
其中所述方法由此产生包含表达所述基因工程化重组受体的T细胞的输出组合物。
24.根据权利要求23所述的方法，其中在刺激条件下孵育所述组合物是在引入编码基因工程化重组受体的核酸之前、期间和/或之后进行的。
25.根据权利要求1-12和23-24中任一项所述的方法，其中所述重组受体能够与靶抗原结合，所述靶抗原与疾病、障碍或病症的细胞或组织相关，为疾病、障碍或病症的细胞或组织所特有，和/或在疾病、障碍或病症的细胞或组织上表达。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述疾病、障碍或病症是感染性疾病或障碍、自身免疫性疾病、炎性疾病或者肿瘤或癌症。
27.根据权利要求25或权利要求26所述的方法，其中所述靶抗原是肿瘤抗原。
28.根据权利要求25-27中任一项所述的方法，其中所述靶抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CAIX)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erbB2)、L1-CAM、B7-H3、B7-H6、碳酸酐酶9(CA9，也称为CAIX或G250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、癌胚抗原(CEA)、和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD133、CD138、CD171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、erb-B2、erb-B3、erb-B4、erbB二聚体、III型表皮生长因子受体突变体(EGFRvIII)、叶酸结合蛋白(FBP)、Fc受体样蛋白5(FCRL5；也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、叶酸结合蛋白(FBP)、叶酸受体α、神经节苷脂GD2、O-乙酰化GD2(OGD2)、神经节苷脂GD3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPRC5D)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erbB2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原A1(HLA-A1)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、IL-22受体α(IL-22R-α)、IL-13R-α2(IL-13Rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、L1-CAM的CE7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员A(LRRC8A)、路易斯Y、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、间皮素(MSLN)、c-Met、鼠巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、黑色素A(MART-1)、神经细胞粘附分子(NCAM)、癌胚胎抗原、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或DCT)、叶酸受体-a、8H9、双抗原、糖蛋白100(gp100)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血管内皮生长因子受体2(VEGF-R2)、雌激素受体、孕酮受体、Wilms肿瘤1(WT-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原以及与通用标签相关的抗原。
29.根据权利要求1-12和23-28中任一项所述的方法，其中所述重组受体是或包含功能性非TCR抗原受体或TCR或其抗原结合片段。
30.根据权利要求1-12和23-29中任一项所述的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
31.根据权利要求1-12和23-30中任一项所述的方法，其中所述重组受体包含含有特异性地结合靶抗原的抗原结合结构域的细胞外结构域和含有ITAM的细胞内信号传导结构域。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述抗原结合结构域是或包含抗体或其抗体片段，所述抗体片段任选地是单链片段。
33.根据权利要求31或权利要求32所述的方法，其中所述细胞内信号传导结构域是或包含CD3链、任选地CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。
34.根据权利要求31-33中任一项所述的方法，其中所述细胞内信号传导区域还包含共刺激信号传导区域。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述共刺激信号传导区域包含T细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·L·博尼哈迪，
申请(专利权)人：朱诺治疗学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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